Влияние физических и химических факторов на жизнеспособность вирусов

Устойчивость вирусов к кислотам и щелочам у разных видов различна. Каждый вирус имеет характерную для него зону стабильности, в пределах которой он сохраняет жизнеспособность. Одни вирусы устойчивы к кислотам и щелочам, а другие чувствительны к изменениям реакции среды и сохраняют активность только в узких пределах концентрации водородных ионов.

Вирусы различны также по устойчивости в солевых растворах.

Все окислители инактивируют вирусы в той или иной степени (перекись водорода, марганцовокислый калий, концентрированные растворы мочевины).

Наиболее сильное действие на все вирусы оказывает лизол (5% раствор), инактивирующий вирусы через 1-5 мин.

Наилучшим консервантом для многих вирусов является 50% глицерин, который сохраняет жизнеспособность в течение нескольких месяцев.

Облучение вирусов ультрафиолетовыми лучами инактивирует их. Дозы и время облучения различны для разных вирусов. Вирусы обладают устойчивостью к ионизирующему облучению.

Различно отношение вирусов к высоким температурам. Большинство из них инактивируется при 55⁰С-60⁰С в течение 5-30 мин. Некоторые вирусы выдерживают нагревание до 80⁰С в течение 30 мин. Все вирусы хорошо сохраняются при температуре – 70⁰С и ниже.

Длительное время они остаются жизнеспособными при высушивании под вакуумом из замороженного состояния.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Методы исследования, применяющиеся для лабораторной диагностики вирусных заболеваний, разделены на три вида: 1) Экспресс – диагностика. 2) Вирусологический метод. 3) Серологический метод.

В основе большинства методов диагностики вирусных инфекций лежит реакция взаимодействия вирусных антигенов и специфических антител в жидкой среде.

Экспресс-диагностика позволяет обнаружить вирус, его антигены и нуклеиновые кислоты непосредственно в исследуемом материале больного в течение нескольких часов.

Для экспресс-диагностики важно взять материал у больного как можно раньше. В зависимости от вида инфекции исследуют: мазки и смывы из верхних дыхательных путей, кровь, спинномозговую жидкость, мочу, фекалии, содержимое везикул, пустул, соскобы эпителия, кусочки органов и др.

Материал больного для исследования берут, соблюдая правила асептики, чтобы предотвратить внесение посторонней микрофлоры и не инфицировать себя. Транспортируют пробы в термосах со льдом.

Для экспресс-диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:

1. Реакцию иммунофлюоресценции (РИФ).

2. Иммуноферментный анализ (ИФА).

3. Полимеразнуя цепную реакцию (ПЦР).

4. Вирусоскопический метод:

а) оптическая микроскопия (для обнаружения внутриклеточных включений);

б) электронная микроскопия (для обнаружения вирионов);

в) иммунная электронная микроскопия (для обнаружения вируса после смешивания вируссодержащего материала со специфической сывороткой. В результате взаимодействия антител с вирусами образуются микропреципитаты. Образование иммунных агрегатов повышает концентрацию вирионов в микропрепарате, разрешающую способность и специфичность метода).

Вирусоскопический метод используется не для массовых исследований.

Вирусологический метод основан на накоплении (культивировании) вируса, на выявлении (индикации) вируса и определении его вида (идентификации).

В зависимости от применения определенного метода культивирования вируса возможно проведение вирусологического исследования в трех направлениях:

1. Использование для выделения вирусов лабораторных животных, чувствительных к предполагаемому возбудителю инфекции. Заражение животных проводят с учетом тропизма вирусов к определенным тканям. Методы заражения могут быть разными: интраназальное, в головной и спинной мозг, в глаз, через пищеварительный тракт, под кожу, внутрикожно, внутримышечно, внутривенно и др.

После заражения ведут тщательное наблюдение за внешним видом и поведением подопытных животных.

Появление клинических признаков заболевания, как общих, так и местных, и их развитие, а также наличие летальных исходов свидетельствует о развитии инфекции и наличии вируса у животных. Идентификацию выделенного возбудителя проводят с помощью реакции биологической нейтрализации (РБН).

2. Более доступный и удобный метод для выделения вирусов от больных – заражение куриных эмбрионов. В результате размножения вируса возможны гибель эмбриона, накопление возбудителя в аллантоисной и амниотической жидкостях. Индикацию вируса в указанных жидкостях проводят в РГА. Для его идентификации используют РТГА.

3. Наиболее широко для выделения вирусов используются культуры клеток. Перед заражением из пробирки с культурой клеток удаляют питательную среду и вносят исследуемый материал. После добавления поддерживающей среды зараженные культуры инкубируют при 36⁰С и проверяют на наличие ЦПД в течение 4-8 дней, начиная со 2-го дня после инфицирования. Появление ЦПД говорит об индикации вируса. Выявление вируса можно провести также с помощью цветной пробы и реакции гемадсорбции (РГА).

С целью идентификации выделенного вируса используют иммунологические методы – реакцию тканевой нейтрализации (РТН), РИФ, РТГА, ИФА, РНГА, радиоиммунный метод (РИМ), реакцию преципитации в геле и ПЦР.

Серологический метод. С целью серодиагностики вирусной инфекции у больного для исследования берут две пробы сыворотки крови: взятие первой порции осуществляется сразу при подозрении на вирусную инфекцию, а вторую – через 10-14 дней после первой. При одновременном исследовании парных сывороток результат считается положительным в двух случаях: 1) когда в первой пробе нет антител, а во второй появились антитела, 2) если в первой пробе уже были антитела, а во второй отмечается диагностическое нарастание титра антител не менее чем в четыре раза.

При нормальном иммунном ответе на вирусную инфекцию доминируют антитела класса IgM и IgJ. Антитела IgJ обнаруживаются через две недели и циркулируют длительное время, антитела класса IgM появляются рано (на 3-5 день болезни) и исчезают через несколько месяцев. Поэтому обнаружение IgM является надежным методом быстрой диагностики и свидетельствует о текущей инфекции даже при наличии одной сыворотки, взятой в первые дни заболевания.

Наиболее употребительными методами серодиагностики являются ИФА, РТГА, РНГА и РТН.