3 курс / Микробиология / инт08 (Диагностика полиомиелита, вирусов Коксаки и ECHO)

Диагностика полиомиелита

     Возбудитель полиомиелита входит в семейство Picornaviridae, род Enterovirus.

     Исследуемый материал: испражнения (вирусы полиомиелита присутствуют длительное время и в больших концентрациях), в первые дни заболевания материалом для исследования могут служить смывы из носоглотки. Кроме того, могут исследоваться кровь, спинномозговая жидкость, моча. В случае летального исхода – секционный материал: кусочки ткани головного и спинного мозга, миокарда, печени, поджелудочной железы, селезёнки, легких, лимфатических узлов.

     Используют методы диагностики: вирусологический, серологический.

     Вирусологический метод. Предполагает обнаружение вируса в исследуемом материале и последующую его идентификацию. После приготовления проб, обработки антибиотиками, ими обрабатывают перевиваемые культуры клеток, например, Helia, Hep-2 и др. индикацию осуществляют по цитопатическому действию (ЦПД) и цветной пробе (ЦП). Идентифицируют с помощью типоспецифических стандартных сывороток к трем типам полиовируса, в РН ЦПД, РН ЦП, реакции преципитации.

     Серологический метод. Проводится путем исследования парных сывороток крови обследуемого в реакции нейтрализации ЦПД, в реакции нейтрализации ЦП, в реакции связывания комплемента со стандартными штаммами трех типов вирусов полиомиелита (антигенами трех типов). Диагностическое значение имеет лишь четырехкратное и более нарастание титра антител во второй сыворотке, взятой через 2-3 недели от начала заболевания.

Диагностика инфекции, вызванной вирусами Коксаки

     

     Вирусы выделены в местечке Коксаки (штат Нью-Йорк). Входят в семейство Picornaviridae, род Enterovirus.

     Исследуемый материал. В первые дни болезни вирусы Коксаки можно обнаружить в крови, в смывах из зева, испражнениях, спинномозговой жидкости. Последний материал особенно удобный, т.к. спинномозговая жидкость стерильна и её можно вводить мышам-сосункам или в культуру клеток без предварительной обработки антибиотиками.

     Используют методы диагностики: вирусологический, серологический.

     Вирусологический метод. Индикацию вирусов Коксаки осуществляют путем введения исследуемого материала в культуру клеток или в организм новорожденных мышей-сосунков (1-3 дневных). Клинические проявления, обусловленные вирусом Коксаки А, возникают на 2-5 день и характеризуются появлением парезов и вялых параличей мышц спины и конечностей. Клинические проявления, обусловленные вирусом Коксаки В, возникают на 4-9 день и характеризуются появлением спастических параличей. Идентификация обнаруженных вирусов осуществляется в реакции нейтрализации на животных со специфическими диагностическими сыворотками.

     В культуре клеток вирусы обнаруживают по ЦПД, ЦП. Идентифицируют в реакции нейтрализации ЦПД, ЦП со специфическими диагностическими сыворотками.

     Полимеразная цепная реакция. Применяется в диагностике Коксаки – вирусных инфекций при выделении штаммов, которые не культивируются в клеточных культурах.

     Серологический метод. Выявляют специфические антитела к вирусам Коксаки в парных сыворотках крови больных в реакции нейтрализации ЦПД, ЦП и РСК.

Диагностика инфекции, вызванной вирусами ЕСНО

     ЕСНО-вирусы – группа вирусных инфекционных заболеваний, характеризующихся полиморфной клинической картиной и развивающиеся преимущественно у детей раннего возраста и лиц с иммунодефицитами.

     Возбудителями ЕСНО-инфекций являются ЕСНО-вирусы (эховирусы, Еnteric Cytopathic Human Orphan viruses, вирусы-сироты), которые относятся к виду Human enterovirus B, рода Enterovirus, семейства Picornaviradae. Впервые выделены в 1950-х годах М. Рамос-Альваресом (США) при изучении культур клеток. После выделения вирусы получили название кишечных цитопатогенных человеческих вирусов-сирот в связи с тем, что, несмотря на факт наличия ЦПД на эритроцитах, их роль в развитии заболеваний у человека, как и таксономическое положение длительное время были не ясны.

     По свойствам и строению ЕСНО-вирусы являются классическими представителями семейства и рода, к которым относятся: плюс-однонитевые РНК-содержащие простые вирионы, размером 24-30 нм.

     Антигенная структура. В настоящие время выделяют более 30 серотипов ЕСНО-вирусов, которые относятся к виду Human enterovirus В (серотипы 1-7, 9, 11-21, 24-27, 29-33 и др.), при этом для отдельных серотипов имеются характерные клинические формы инфекции, а 12 серотипов обладают гемагглютинирующей способностью.

     Резистентность и эпидемология аналогичны другим представителям рода Enterovirus (см. вирусы Коксаки). Резервуаром и источником инфекции являются больные и вирусоносители. Вирусы выделяются из организма человека с фекалиями и, в меньшей степени, с носоглоточной слизью. ЕСНО-вирусы нередко обнаруживаются в сточных водах, водных источниках и водопроводной воде, на продуктах питания и продуктах обихода. Механизм передачи инфекции чаще фекально-оральный, реже – аэрогенный (воздушно-капельный путь). Наибольшую эпидемическую опасность представляют ЕСНО-вирусы 11, 18, и 19 сероваров.

     Патогенез и клиническая картина ЕСНО-вирусных инфекций во многом схожи с таковыми для всех представителей рода Enterovirus. Нередко ЕСНО-вирусы длительное время присутствуют в кишечнике клинически здоровых детей и взрослых (вирусоносительство). В части случаев инфицирование вирусами ЕСНО приводит к развитию ЕСНО-инфекции, клинические проявления которой многочисленны и определяются, главным образом, серотипом вируса. Для серотипов 1 и 8 ЕСНО-вирусов рецептором являются клеточные интегрины VLA-2.

     Как правило, после первичной репродукции в лимфоидной ткани слизистой оболочки верхних дыхательных путей и/или пищеварительного тракта возбудитель ЕСНО-вирусных инфекций диссеминирует гематогенно (виремия) и вызывает поражение клеток (вторичная репродукция) в органах, к тканям которых обладает тропностью конкретный серовар вируса, а затем снова попадает в кровь (вторичная виремия) и цикл замыкается. Для некоторых сероваров ЕСНО-вирусов определены наиболее характерные клинические проявления. Так, ЕСНО-вирусы 8-11 и 20 сероваров вызывают простудные инфекции; серовары 2-9, 12, 14, 16, 21 – асептические менингиты. протекающие относительно легко, не вызывая осложнений (в большинстве случаев наблюдают спонтанное выздоровление). Реже наблюдают восходящие параличи и энцефалиты, напоминающие поражения, вызываемые полиовирусами. Серовары 9 и 16 ЕСНО-вирусов вызывают лихорадочное состояние, сопровождающиеся кореподобными высыпаниями на коже и слизистых оболочках. В последние годы чаще регистрируют ЕСНО-вирусные асептические менингиты и увеиты, которые возникают в виде эпидемических вспышек в разных странах и обладают склонностью к эпидемическому распространению.

     Иммунитет после перенесенных ЕСНО-вирусных инфекций стойкий, серовароспецифический, гуморальный (за счет секреторных IgA и сывороточных IgG).

     Исследуемый материал: слизь из носоглотки, испражнения, кровь, спинномозговая жидкость.

     Используют методы диагностики: вирусологический, серологический, молекулярно-генетический.

     Вирусологический метод. Обнаруживают вирус только в культурах клеток Животные не чувствительны. Одной суспензией исследуемого материала, после выдерживания с антибиотиками, обрабатывают 2-3 культуры клеток (первично-трипсинизированные или перевиваемые). Индикация вируса осуществляется по ЦПД, ЦП, т.к. в культурах клеток идёт активная репродукция вируса с проявлением типичного для энтеровирусов цитопатического эффекта.

     Идентификация проводится в реакции нейтрализации ЦПД, реакции нейтрализации ЦП, РТГА с диагностическими типовыми иммунными сыворотками.

     Серологический метод. Выявляют нарастание титров антител, как правило, вируснейтрализующих в парных сыворотках крови, взятой у обследуемого. Диагностическое значение имеет 4-х кратное нарастание. Используют реакцию нейтрализации ЦПД, ЦП. Можно применять РСК и РТГА.

     Молекулярно-генетический метод. Используют полимеразную цепную реакцию, молекулярную гибридизацию. 

     Профилактика. Специфическая профилактика не разработана. Проводимая повсеместно вакцинация от полиомиелита позволяет в значительной степени (вплоть до полной невосприимчивости) снизить восприимчивость вакцинированных к ЕСНО-вирусам за счет наличия перекрестно реагирующих антигенов. Неспецифическая профилактика сводится к выявлению, изоляции и санации больных и носителей и общесанитарным мероприятиям.

     Лечение включает симптоматическую и патогенетическую терапию.