3 курс / Микробиология / инт06 (Общие свойства вирусов)

Общие свойства вирусов, влияющие на специфику диагностики вирусных инфекций

 

Вирусы – это облигатные внутриклеточные паразиты, не имеющие клеточного строения, собственного аппарата синтеза биополимеров. Проникая в клетку,  вирус эксплуатирует её. Зараженная клетка начинает функционировать не по программе собственного, а по программе вирусного генома, т.е. отличается паразитизмом на генетическом уровне.

Размножаются вирусы путем репродукции – дисъюнктивный (разобщенный) способ, когда в разное время  и в  разных участках клетки синтезируются компоненты вирусов, а затем происходит их сборка.

Вирусы находятся на грани живого и неживого: внутри клетки это существо, вне клетки -  вещество. Находящийся вне клетки вирус называется вирионом. Вирусы относятся к царству Virae.

Строение вирусов. По тому, как устроены вирусы, они подразделяются на простые и сложные. Простые вирусы состоят из нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) окруженной капсидом (лат. сapsa – футляр). Капсид представляет собой белковую оболочку,  включающую в себя повторяющиеся морфологические субъединицы – капсомеры, видимые в электронном микроскопе. Количество капсомеров постоянная величина для определенных вирусов и учитывается  при идентификации вируса. Ассоциация вирусных протеинов капсида вируса с нуклеиновой кислотой называется нуклеокапсидом. Сложные вирусы, кроме нуклеиновой кислоты и капсида, имеют еще одну липопротеиновую оболочку – суперкапсид или пеплос. На ней расположены  гликопротеиновые шипы или шипики (пепломеры). Капсид и суперкапсид защищают вирусы от неблагоприятных факторов окружающей среды, обеспечивают избирательное взаимодействие своими рецепторными белками с определенными клетками, а также антигенные и иммуногенные свойства вирусов.

Генетический материал вируса представлен либо ДНК, либо РНК. У многих РНК-содержащих вирусов и некоторых ДНК-содержащих геном часто представлен несколькими молекулами (частями), в связи с чем   он называется сегментированным.

Вирусные геномы независимо от типа нуклеиновой кислоты бывают либо одноцепочечными, либо двухцепочечными. Двухцепочечный геном включает пару комплементарных цепей нуклеиновой кислоты, а одноцепочечный – только одну цепь.

Для большинства РНК-содержащих вирусов и некоторых вирусов с одноцепочечной ДНК определяют полярность нуклеиновой кислоты в зависимости от того, комплементарна ли она вирусной матричной или  информационной РНК (мРНК или иРНК). Молекула РНК с положительной полярностью (плюс – цепь) имеет ту же последовательность нуклеотидов, что и мРНК, поэтому какая – то  её часть может незамедлительно начать транслироваться клеткой – хозяином на рибосомах. РНК с отрицательной полярностью (минус  - цепь) комплементарна мРНК, но не содержит необходимой для трансляции на рибосомах последовательности нуклеотидов и генов. Поэтому до начала трансляции на ней должна быть синтезирована положительная РНК при помощи фермента РНК-зависимой РНК-полимеразы. Названия цепей ДНК для вирусов, содержащих одноцепочечную ДНК, сходны с таковыми для  РНК: кодирующая цепь комплементарна мРНК (минус – ДНК-нить), а некодирующая является её копией  (плюс - ДНК – нить).

В вирусах имеются структурные и неструктурные белки. Структурные белки обусловливают строение вирусов,  а неструктурные белки принимают участие в репродукции вирусов. В состав суперкапсида входят липиды и полисахариды.

Размеры вирусов исчисляются в нм (1 нм = 1/1000мкм). Определить размеры вирусов можно с помощью электронного микроскопа, путем фильтрации через фильтры с известным диаметром пор, а также  путем ультрацентрифугирования. Различают мелкие вирусы (до 70 нм), средние (до 150 нм), крупные (до 350 -400 нм).

Форма вирусов. Вирусы отличаются формой вириона.   Это также учитывается при идентификации обнаруженных в исследуемом материале вирусов. Они могут быть сферической формы (вирусы полиомиелита, вирусы иммунодефицита человека, ротавирусы),  палочковидной (вирус мозаичной болезни табака), пулевидной (вирус бешенства), сперматозоидной (бактериофаги) и неправильной формы (коронавирус).

Культивирование вирусов. Поскольку вирусы не растут на питательных средах и для их репродукции нужна живая клетка, культивирование можно проводить в организме чувствительных лабораторных животных, курином эмбрионе и  в культурах клеток или культурах тканей.

Культивирование вирусов необходимо для вирусологической диагностики инфекций, изучения вопросов патогенеза, иммунитета  при вирусных заболеваниях, получения вакцин и диагностических препаратов.

Лабораторные животные использовались на первых этапах развития вирусологии, но и теперь возникает необходимость их применения наряду с другими методами культивирования. Преимущество отдается новорожденным животным, которые более чувствительны к вирусной инфекции. В каждом конкретном случае выбирают наиболее чувствительных к предполагаемому вирусу животных, у которых отмечаются четкие клинические проявления, патоморфологические изменения или их гибель.

Существуют различные способы введения исследуемого материала лабораторным животным. Выбор способа зависит от тропизма вируса. Если предполагается,  что в исследуемом материале присутствуют нейротропные вирусы (вирусы бешенства, полиомиелита, арбовирусы) следует выбрать способ заражения в мозг. Интраназальный способ больше подходит для обнаружения вирусов, вызывающих респираторные инфекции. Возбудители оспы и простого герпеса могут быть обнаружены в исследуемом материале от больного при нанесении этого материала на скарифицированную роговицу или кожу.

Куриные эмбрионы. В вирусологическую практику куриные эмбрионы были внедрены в 1931 году и широко используются для культивирования вирусов гриппа, оспы, герпеса и др.

В курином эмбрионе есть следующие образования: аллантоисная полость, хорионаллантоисная оболочка, желточный мешок, амниотическая полость.

Введение материала в аллантоисную полость проводится для культивирования вирусов гриппа, вируса везикулярного стоматита, вируса Ньюкасл. Используют при этом 10-11-дневные куриные эмбрионы. На хорионаллантоисную оболочку вносят материал, содержащий, например, вирус натуральной оспы. Заражение в амниотическую полость используют для культивирования вирусов гриппа и вируса Ньюкасл. В желточном мешке культивируются хламидии, риккетсии, некоторые вирусы. Выбор того или иного образования куриного эмбриона для введения исследуемого материала определяется тропизмом вируса и целью заражения. При заражении вводят 0,1-0,2 мл инфекционного материала.

Независимо от способа введения материала скорлупу яиц перед заражением обрабатывают этиловым спиртом и 2% спиртовым раствором йода. Заражение в полость аллантоиса проводят следующим образом: в скорлупе над воздушным мешком прокалывают отверстие, через которое туберкулиновым шприцем вводят иголку на 2-3 мм ниже границы воздушного   мешка   и    впрыскивают   исследуемый материал  в объёме

 0,1-0,2 мл. Прокол в скорлупе заливают расплавленным стерильным парафином или заклеивают лейкопластырем.

Заражение в полость амниона проводят под контролем овоскопа в затемненном боксе. Материал вводят через прокол в скорлупе с тупого конца вертикально размещенного эмбриона.

При заражении в желточный мешок яйцо кладут на подставку горизонтально так, чтобы тело эмбриона было направлено вниз, а желток находился над ним. Иглой для внутримышечных инъекций (глубина проникновения   2/3 длины иглы) по центру большой оси яйца в скорлупе делают прокол в области воздушного мешка  и шприцем вводят исследуемый материал.

 Заражение в хорионаллантоисную оболочку заключается в том,  что над воздушным мешком вертикально расположенного яйца, ножницами вырезают кусочек скорлупы, создавая оконце, потом отслаивают оболочку под скорлупою, освобождая участок хорионаллантоисной оболочки, на которую наносят исследуемый материал. Отверстие в скорлупе заклеивают лейкопластырем.

После заражения эмбрионы инкубируют в термостате, размещая их тупым концом кверху.  Длительность инкубации и температура зависят от биологических свойств исследуемого вируса. Перед вскрытием эмбрионы охлаждают, достигая максимального сужения кровеносных сосудов. Вскрытие куриных эмбрионов проводят в стерильных условиях. После обработки яйца спиртом и 2% раствором йода, выкраивают в скорлупе над воздушным мешком отверстие. Отрезанную скорлупу убирают, пастеровской пипеткой или шприцем отсасывают аллантоисную, а потом амниотическую жидкость и вносят их в пробирки. Если необходимо исследовать хорионаллантоисную оболочку, то её разрезают, содержимое яйца выливают в чашку Петри, сохраняя хорионаллантоисную оболочку на скорлупе. После ополаскивания физиологическим раствором её  отделяют от скорлупы, помещают в стерильную чашку Петри и рассматривают на темном фоне, отмечая специфические поражения.

Если необходимо исследовать амнион, содержимое яйца выливают в чашку Петри и выделяют амнион. Желточную оболочку разрезают и  освобождают от желтка, промывают физиологическим раствором и исследуют.

Культивирование вирусов в культурах клеток. Важным в истории развития вирусологии было открытие в 1949 году Дж. Эндерсом с соавторами способности вируса полиомиелита размножаться в клетках ткани эмбриона человека. За разработку техники культивирования клеток им была присуждена Нобелевская премия.

 В последние годы культура клеток широко используется в диагностической работе лабораторий, что в значительной степени связано с усовершенствованием техники культивирования, разработкой новых составов питательных сред и аппаратуры для различных режимов инкубирования культур клеток. Этому обстоятельству способствовали также более ранние сроки получения необходимой информации о возбудителе, возможность стандартизации исследований, а также относительная дешевизна работы с культурами клеток. Изолированные клетки получают из различных органов и тканей человека, животных, птиц, других биологических объектов и жизнедеятельность их поддерживают в специальной лабораторной посуде, прибавляя туда питательных для них среды.

Культуры клеток подразделяют на культуру переживающих тканей, в которых клетки не размножаются, а какое-то время сохраняют свою жизнеспособность, и культуры растущих клеток, в которых клетки растут, делятся. Среди последних  чаще используют в вирусологической практике однослойные культуры клеток: первично-трипсинизированные, перевиваемые и полуперевиваемые или диплоидные.

Первично-трипсинизированные культуры клеток получают из тканей человека, животных, птиц (чаще используют эмбриональную ткань, т.к. эмбриональные клетки  быстрее растут и размножаются). Ткань отмывают от крови  сбалансированным солевым раствором Хенкса с антибиотиками, измельчают ножницами на кусочки размером 2-3 мм и погружают в 0,25% раствор трипсина, инкубируют при t 37˚С, постоянно перемешивая с помощью магнитной мешалки. Под действием фермента трипсина клетки разъединяются.

Путем центрифугирования освобождаются от трипсина, к осадку разъединившихся клеток прибавляют питательную среду для культивирования клеток. Клеточную суспензию разводят питательной средой до концентрации 400-800 тыс. клеток в 1 мл, разливают в специальную посуду для культивирования и помещают в термостат при t 37˚С на 48-96 часов. Делясь, клетки образуют монослой на стенках пробирок или флаконов, который обрабатывают затем исследуемым материалом.

Перевиваемые культуры клеток. Называют их так потому, что можно переносить (перевивать) из одной пробирки в другую. Как правило, готовят такие культуры клеток из опухолевой ткани:  HeLa -из карциномы шейки матки; Hep -1, Hep -2 – из опухоли языка, гортани; Detroit -6 – из костного мозга больного раком легких. Такие культуры способны размножаться десятилетиями, выдерживают многочисленные пассажи. Преимущества перед первично-трипсинизированными культурами клеток состоят в следующем: продолжительность их культивирования, высокая скорость размножения, меньшая трудоёмкость, способность культур сохранять свои свойства в замороженном состоянии в течение многих лет.

Полуперевиваемые или диплоидные культуры клеток. Получают из диплоидных клеток эмбриона человека. В процессе пассажей эти культуры сохраняют диплоидный набор хромосом, характерный для соматических клеток исходной ткани, имеют ограниченную продолжительность жизни и выдерживают 40-50 пассажей.

Используют и культуры суспензированных клеток. В такой культуре клетки находятся во взвешенном состоянии в жидкой питательной среде. Емкость размещается в специальном устройстве – вращающемся барабане.

Питательные среды для  культивирования клеток.  Такие среды имеют сложный состав и содержат все аминокислоты, витамины, микроэлементы,  факторы роста, т.е. все то, что необходимо для жизнедеятельности клетки. Промышленность выпускает готовые жидкие среды, например, среду 199, Игла, гидролизат лактальбумина и др., а также сухие  концентрированные, которые перед использованием растворяют в дистиллированной воде.  К таким питательным средам для выращивания культур клеток добавляют сыворотку человека и животных  (эмбриональную телячью сыворотку). Перед использованием среды в неё вносят антибиотики для исключения роста случайно попавших микробов. РН питательных сред поддерживают с помощью буферных систем в пределах 7,2-7,6. В среды добавляют индикатор феноловый красный, который становится оранжево-желтым при закислении  и малиновым при защелачивании.

Культивирование клеток осуществляют в ёмкостях разной формы и размеров, выполненных  из стекла или нетоксичного пластика. Строго придерживаются правил стерильности на всех этапах.

Для обнаружения вируса в исследуемом материале отбирают пробирки с хорошим монослоем.  Из пробирок, в которых культивируются клетки, выливают среду, монослой промывают раствором Хенкса. В пробирку вносят 0,2 мл исследуемого материала и выдерживают в термостате 1 час. После контакта материал сливают, монослой промывают раствором Хенкса, заливают питательную среду и помещают в термостат при t 37˚С на 7-14 дней для изучения результатов. Состояние монослоя просматривают каждый день до развития изменений в клетках.  Морфологические изменения, возникающие во время взаимодействия вируса и клеток, называют цитопатическим действием (ЦПД). Характер цитопатических изменений в инфицированных культурах клеток определяется: 1) свойствами вируса; 2) дозой вируса; 3) свойствами клеток и условиями их культивирования.

Для некоторых вирусов характерным является формирование внутриядерных и цитоплазматических  включений. Их форма, размер, организация, наличие в них вирусоспецифических нуклеиновых кислот и белков имеют важное диагностическое значение, поскольку отличаются в разных таксономических группах. Включения можно выявить в окрашенных или обработанных флюорохромами препаратах. Для этого культуры  клеток выращивают на стеклянных пластинках в пробирках. Потом культуры клеток заражают вирусом и через определенное время инкубации в зависимости от предполагаемого вируса готовят препараты, фиксируют жидкими фиксаторами и окрашивают их красителями (по Романовскому, Павловскому и др.) или флюорохромами (акридином-оранжевым).

Для выявления включений можно приготовить мазки-отпечатки из органов и тканей, гистологические срезы (определяют чаще наличие телец Бабеша-Негри для диагностики бешенства).

В зараженных культурах клеток присутствие вируса возможно выявить по ЦПД, ЦП,  бляшкообразованию, внутриклеточным включениям, в реакции гемадсорбции и гемагглютинации.

Взаимодействие вируса с чувствительной клеткой.  Осуществляется поэтапно. Условно выделяют ранние этапы (адсорбция, проникновение, освобождение генома вируса от оболочек) и поздние, сопровождающиеся экспрессией вирусного генома и синтезом биомолекул специфичных для вируса, сборкой вирусных компонентов и выходом из клетки.

Адсорбция. Прикрепление вирусных частиц к поверхности клетки происходит только при наличии у клеток соответствующих рецепторов, а у вирусов – структурных субстанций, которые узнают эти рецепторы. Распознавание осуществляют капсидные или суперкапсидные белки вирусов (прикрепительные белки).

Процесс адсорбции можно нарушить путем прибавления синтетических пептидов, которые конкурируют с прикрепительными белками и рецепторами клеток, путем нейтрализации рецепторов моноклональными антителами и др.

Проникновение вируса в клетку.  Наиболее распространенный способ проникновения вирусов – рецепторный эндоцитоз. После прикрепления к специфическим рецепторам вирус втягивается в клетку и оказывается в эндоцитарной вакуоли, которая затем сливается с другой внутриклеточной вакуолью. Здесь под действием ферментов вирус освобождается от рецепторов клетки, а один из его поверхностных белков взаимодействует с липидами стенки вакуоли, сливая с ней  суперкапсид. Результатом такого слияния есть выход внутреннего субвирионного компонента в цитоплазму, т.е. наряду с процессом проникновения происходит и раздевание – удаление липопротеиновой оболочки вируса.

Раздевание. Для того, чтобы проникшая в  клетку вирусная частица приобрела инфекционную активность, она должна утратить липопротеиновую оболочку и часть капсидных белков. Раздевание обеспечивает освобождение генома вируса для последующей репродукции.

Последующее взаимодействие вируса с клеткой направлено на синтез вирусных макромолекул  (нуклеиновых кислот, ранних и поздних вирусных белков и ферментов). При этом вирус полностью использует синтетические механизмы клетки-хозяина.

Синтез вирусных белков  и нуклеиновых кислот. Этот процесс разобщен во времени и пространстве. Существует 2 варианта синтеза вирусных белков внутри клеток: 1) синтез очень крупных полипептидных молекул – предшественниц, которые после разрезания клеточными или вирусными протеазами формируют полипептидные фрагменты, являющиеся вирусными белками; 2) непосредственный синтез «зрелых» полипептидных молекул на рибосомах, в результате которого сразу образуются вирусные белки, не требующие дополнительной ферментации перед включением в репродуктивный цикл вируса.

Синтез вирусных белков происходит в инфицированной клетке с образованием 2 групп белков: неструктурных белков, обслуживающих разные этапы репродукции вируса и структурных белков, которые входят в состав вириона (нуклеопротеины, связанные с геномом вируса, капсидные и оболочечные белки). К неструктурным белкам относятся: ферменты синтеза нуклеиновых кислот (РНК- или ДНК-полимеразы), обеспечивающие транскрипцию и репликацию вирусного генома; белки-регуляторы; предшественники вирусных белков, отличающиеся своей нестабильностью в результате  быстрого нарезания на структурные белки; ферменты, модифицирующие вирусные белки (протеиназы, протеинкиназы и т.п.) и др.

Синтез белков в клетке осуществляется в соответствии с хорошо известными процессами транскрипции путем «переписывания» генетической информации с нуклеиновой кислоты в нуклеотидную  последовательность иРНК или мРНК (ДНК → РНК- прямая транскрипция, РНК→ДНК – обратная транскрипция) и трансляции – считывания иРНК на рибосомах с образованием белков (иРНК→ рибосомы → синтез полипептидной цепи).

Наряду с синтезом вирусных белков после освобождения от оболочек вирусной нуклеиновой кислоты начинается  процесс репликации, т.е. накопление копий вирусных геномов.

Следующий этап – сборка или морфогенез вириона. Формирование вирионов возможно только при условии строгого упорядоченного соединения вирусных структурных  полипептидов и их нуклеиновых кислот. В одних вирусах этот процесс происходит в цитоплазме, в других – в ядре клетки хозяина. У сложноорганизованных вирусов, которые имеют внешнюю оболочку, дальнейший сбор осуществляется в цитоплазме во время их выхода из клетки. Так образуется липополисахаридная внешняя оболочка у ортомиксовирусов,  поксвирусов, а у герпесвирусов – при выходе из ядра.

Выход вирусов из клетки является завершающим этапом её инфицирования. Продолжительность цикла вирусной репродукции колеблется от 6-8 часов (вирус гриппа,пикорнавирусы и пр.) до 40 часов и более (герпесвирусы и др.).

Ряд сложных вирусов (миксовирусы и др.) выходят из клетки хозяина «просачиваясь» сквозь её оболочку. В это время нуклеокапсид покрывается суперкапсидом, в состав которого  включаются химические компоненты клетки хозяина (липиды, полисахариды). Простые вирусы (полиомиелит) выходят из клетки через образованные отверстия, при этом клетки погибают.

Выход вирусных частиц из инфицированной клетки может осуществляться 2 путями:

·        взрывной путь, когда из погибшей клетки одновременно выходит большое количество вирионов и клетка разрушается;

·        почкование или экзоцитоз.

В некоторых случаях репродукция вирионов (герпеса) в клетках может осуществляться в течение многих месяцев. Вирусы «просачиваются» через клеточную оболочку,  а жизнедеятельность клетки сохраняется. При делении таких клеток инфекция передается дочерним клеткам. Так происходит формирование персистирующей инфекции.

Инфицирование клетки может иметь следующие последствия.

1.     Разрушение клетки (некроз). В культуре клеток наблюдается цитопатический эффект – клетки округляются, отделяются от соседних клеток, образуются  многоядерные гигантские клетки, вакуоли и включения.

2.     Разрушение клетки (апоптоз) в результате инициации вирусом запрограммированной клеточной гибели.

3.     Разрушение клетки в итоге не самим вирусом, а иммунными реакциями организма.

4.     Вирус находится внутри клетки, но не разрушает её (латентная инфекция).

5.     Вирус трансформирует клетку организма в раковую.

Хорошо изучены 3 основные типа взаимодействия вируса с клеткой:

продуктивный тип, при котором взаимодействие завершается воспроизводством вирусного потомства и часто гибелью зараженных клеток;

абортивный тип взаимодействия не завершается образованием новых вирионов, поскольку инфекционный процесс в клетке прерывается на одном из этапов;  интегративный тип взаимодействия (вирогения) характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместной репликацией.

Устройство вирусологической лаборатории. Вирусологическая лаборатория должна иметь несколько помещений: собственно лабораторию и подсобные помещения для  выращивания культур клеток, обработки  и стерилизации посуды, приготовления жидких питательных сред  для культур клеток, инкубатора, вивария.

Собственно  вирусологическая лаборатория строится по типу бактериологической лаборатории с учетом специфики работы с вирусами – выращивания клеточных и тканевых культур, куриных эмбрионов, ультрацентрифугирования, хранения вирусов при низких температурах и др. Она оборудуется для диагностической работы, для изучения  свойств вирусов, их структуры, проведения генетических исследований. К помещению вирусологической лаборатории предъявляются определенные требования. Оно должно быть светлым и достаточно просторным, легко мыться с применением дезинфицирующих растворов. С этой целью стены красят масляной краской или облицовывают плиткой. Пол не должен иметь щелей. Помещение оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией. Должна быть подводка холодной и горячей воды. Необходимо предусмотреть установку душевых кабин для сотрудников.

В вирусологической лаборатории обязательно наличие отдельного помещения для стерильной работы, состоящего из двух отделений, разделенных стеклянной перегородкой. Внутреннее помещение (бокс) должно быть не большим (6-8 м²), с низким потолком. Дверь должна открываться в предбоксник.  Предбоксник отделяется второй перегородкой от остального помещения и служит для одевания стерильной одежды. Для стерилизации бокса и предбоксника используют бактерицидные лампы. Для этой цели можно использовать лампы БУВ, которые устанавливают из расчета 2-2,5 Вт на 1 м² помещения. В боксе должны находиться лишь необходимые инструменты и посуда, стерилизатор для инструментов, банки с дезинфицирующим раствором, бак с крышкой для зараженного материала.  При работе с возбудителями особо-опасных инфекций в боксе устанавливают дополнительно настольный бокс, в котором стерилизуют  путем фильтрации как поступающий, так и оттекающий воздух. Основные правила работы с особо-опасными возбудителями регламентируются специальной инструкцией.

Помимо обычной бактериологической посуды, в вирусологической лаборатории должны быть гомогенизатор для измельчения тканей, магнитные мешалки, микроскопы, центрифуги различной мощности. Необходимы термостаты, одновременно работающие при различной температуре (от 25 до 40˚С), в том числе с подачей углекислого газа. Вирусологическая лаборатория оборудуется  холодильными камерами с температурой +4, -20 и -40˚С.

В отделениях по приготовлению сред необходимо иметь установки для обработки воды, которая дважды дистиллируется в стеклянных аппаратах или деионизируется на колонках с ионообменными смолами. Для стерилизации растворов, которые нельзя автоклавировать, используют асбесто-бумажные стерилизующие пластины Зейтца.

Рабочий стол вирусолога покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую горелку, банку для пипеток с дезинфицирующим раствором, набор штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы, скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, покровные стекла. Микроскопы хранят под стеклянным колпаком. В лаборатории должна быть раковина с подводкой воды,  над которой на полке размещают бутыль с раствором для дезинфекции рук.

Правила забора и транспортировки материала. Пробы необходимо забирать асептически, не допуская их загрязнения. Каждую пробу необходимо брать в отдельный стерильный флакон. Масса каждой пробы должна быть не менее 5-10 мл или грамм. Все флаконы должны герметически закрываться пробками, продезинфицированы снаружи, высушены и промаркированы. Надписи необходимо делать с указанием Ф.И.О. пациента, названия органа и даты забора материала.

Принципы методов вирусологической диагностики

вирусных инфекций

 

Диагностика вирусных инфекций основана на обнаружении возбудителя в острой стадии болезни и на выявлении  прироста антител  у реконвалесцентов. Для некоторых инфекций разработаны экспресс-методы, которые позволяют обнаружить возбудителя непосредственно в пробах от больного. Используют:

1.     Микроскопический

2.     Вирусологический

3.     Серологический

4.     Экспресс-метод