Принципы классификации возбудителей микозов (III)

Выделяют 4 уровня, BSL 1-4 (четвертому соответствует наибольшая биологическая опасность)

Распределение микробов по уровням BSL определяется рядом характеристик:

1.известные факторы патогенности (тип роста, литические ферменты, токсины)

2.экологические особенности вида возбудителя (естественная среда обитания и приспособленность к среде макроорганизма

3.механизм передачи (например, ингаляционный или гематогенный)

4.предрасполагающие факторы, на фоне которых развивается инфекция

5.чувствительность или устойчивость к существующим методам терапии

Вцелом решение о внесении болезнетворного гриба в ту или иную групп BSL принимается на основе анализа известных случаев контакта с грибом и случаев вызванного им заболевания.

Принципы микробиологической диагностики микозов

Лабораторная диагностика микозов основана на следующих этапах:

1.сбор материала, его хранение и транспортировка в лабораторию

2.микроскопия патологического или биопсийного материала

3.выделение возбудителя с его последующей идентификацией

Сбор материала

Для исследования в микологической лаборатории может быть взята практически любая ткань или биологическая жидкость из организма человека. Наиболее часто материалом для исследования служат кожа, волосы, ногти, выделения из дыхательных путей, тканевые биоптаты, СМЖ, кровь.

Микроскопия (I)

•Первичная, или непосредственная (прямая) микроскопия, когда исследуется сам материал от пациента. Прямая микроскопия позволяет быстро поставить диагноз микоза, что дает возможность сразу начать лечение, она может показать, на какие среды следует посеять полученный материал; ее положительный результат может оставаться единственным лабораторным подтверждением микоза при отрицательном ответе в культуре

•Вторичная микроскопия, когда изучают культуру возбудителя, полученную из этого материала

Микроскопия (II)

•Добавление капли 10-20% раствора щелочи (KOH или NaOH) к препарату на предметном стекле позволит растворить кератин и остатки клеток эпидермиса, оставляя неповрежденными клетки гриба (этот процесс называют просветлением материала, или «мацерацией»). Препарат накрывают покровным стеклом, слегка надавливая, отжимают излишнюю жидкость и высушивают на слабом пламени горелки, микроскопируют препарат через 10-15 минут

•Иногда для придания большей контрастности добавляют каплю лактофеноловой синьки. При использовании лактофенола подогревания препарата не требуется

•Препараты, приготовленные в щелочи, не хранятся долго – их следует микроскопировать в течение двух часов с момента приготовления

•Микроскопия с KOH – самый распространенный, быстрый и доступный метод. Он позволяет обнаружить в чещуйках кожи, ногтей, в волосах возбудителей дерматофитоза, разноцветного лишая, кандидоза, черной и белой пьедры, tinea nigra, а также многих возбудителей глубоких микозов в мокроте, образцах ткани, взятых при биопсии.

Микробиологический метод (I)

•Среда Сабуро – основная, наиболее простая и самая распространенная среда, применяемая для получения первичной культуры большинства патогенных грибов. Декстрозный агар Сабуро – плотная среда, содержащая пептон и глюкозу (декстрозу), или мальтозу

•Среда Сабуро - не селективная, поэтому на ней может идти рост других микроорганизмов, содержащихся в исследуемом материале.

•Для подавления роста посторонней бактериальной микрофлоры в среду Сабуро добавляют антибиотики. Наиболее часто используют хлорамфениколы, гентамицин.

•На среде Сабуро могут расти не только интересующие лабораторию патогенные, но многие сапрофитирующие грибы – контаминанты культуры. Для подавления роста в среду Сабуро добавляют препарат циклогексимид (актидион). Среда Сабуро с циклогексимидом применяется в основном для выделения дерматофитов, поскольку на ней не растут такие патогенные грибы, как некоторые Candida, Cryptococcus neoformans, Pseudallescheria boydii, многие Aspergillus, Fusarium, Penicillium marneffei. Циклогекисмид может быть использован для идентификации видов Candida, поскольку подавляет рост C.krusei и C.tropicalis.

Микробиологический метод (II)

•Оптимальная температура роста для большинства патогенных грибов - 30ºС. Термостатами, необходимыми для инкубации при 30ºС, оборудованы не все лаборатории. Поэтому распространенной при инкубации большинства грибов остается комнатная температура, в 22- 25ºС

•Инкубация при 37ºС проводится в основном при подозрении на диморфные возбудители. При 37ºС хорошо растут и некоторые другие дрожжевые и плесневые грибы (Cryptococcus neoformans, Candida spp., зигомицеты). Как правило, при получении первичной культуры без подозрения на диморфный микоз не используют одновременную инкубацию при 25-30ºС и 37ºС

•Для большинства культур грибов продолжительность инкубации не превышает 4 недель, после чего лаборатория дает отрицательный ответ. При дрожжевых поражениях слизистых влагалища и полости рта культур выдерживают не дольше недели

•При подозрении на диморфный микоз (и отсутствии роста) культура выдерживается в течение 8 недель, и только после этого лаборатория может дать отрицательный ответ

•У пациентов с иммунодефицитом с подозрением на грибковую инфекцию важно выделение любого гриба из исследуемого материала. В этих случаях при отсутствии роста грибов на питательной среде культуру выдерживают дополнительно 2-4 недели. Это делают, чтобы не пропустить выделения медленно растущих грибов

Дерматомикозами обычно называют микозы собственно кожи, трихомикозами – грибковые инфекции волос, а онихомикозами – ногтей