Схема постановки развернутой реакции агглютинации с целью определения вида микроба (титр агглютинирующей неадсорбированной сыворотки 1:12800)
Ингредиенты в |
|
|
|
|
|
|
Номера пробирок |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
мл |
1 |
|
2 |
|
3 |
|
4 |
|
5 |
|
6 |
|
7 |
|
8 |
|
9 |
|
10 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
к.к. |
|
к.с. |
Раствор NaCl |
1,0 |
|
1,0 |
|
1,0 |
|
1,0 |
|
1,0 |
|
1,0 |
|
1,0 |
|
1,0 |
|
1.0 |
|
- |
0,85% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Агглютинирую |
1, 0 → |
|
1,0 → |
|
1,0→ |
|
1,0→ |
|
1,0→ |
|
1,0→ |
|
1,0 |
|
1,0↓* |
|
- |
|
1,0 |
щая сыворотка, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
→ |
|
|
|
|
|
|
разведенная |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1:50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Взвесь |
1 |
|
1 |
|
1 |
|
1 |
|
1 |
|
1 |
|
1 |
|
1 |
|
1 |
|
- |
исследуемых |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
микробов в |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
каплях |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Конечное |
1:100 |
|
1:200 |
|
1:400 |
|
1:800 |
|
1:1600 |
|
1:3200 |
|
1:6 |
|
1:1280 |
|
- |
|
1:50 |
разведение |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
400 |
|
0 |
|
|
|
|
сыворотки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
* - Из пробирки выливают 1 мл, чтобы объем во всех разведениях был одинаковым
Пробирки инкубируют в термостате при 37ºС 18-24 часа
Учет результатов реакций агглютинаций в пробирках
«система четырех плюсов»
++++ полная агглютинация (100% бактерий соединились с АТ)
+++ большой осадок (75% бактерий вступили в реакцию с АТ)
++ осадок небольшой + осадок маленький
- реакция отрицательная Реакции считаются положительными при 3-4 плюсах
Характер агглютината зависит от наличия или отсутствия жгутиков у бактерий. При наличии Н- и О-АГ агглютинат крупнохлопчатый, неподвижные бактерии дают мелкозернистый агглютинат (имеют только О-АГ)
РАЗВЕРНУТАЯ РЕАКЦИЯ АКГГЛЮТИНАЦИИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНОГО типа реакции Видаля
Необходимые ингредиенты:
исследуемая сыворотка, полученная от больного из локтевой вены
диагностикум (убитая культура бактерий в физиологическом растворе)физиологический раствор
ДИАГНОСТИКУМ
ВЗВЕСЬ УБИТЫХ МИКРОБОВ
Схема постановки реакции агглютинации с целью обнаружения антител в сыворотке крови человека (р. Видаля)
Ингредиенты в |
|
|
Номера пробирок |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
мл |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 к.д. |
7 к.с. |
|
|
|
|
|
|
|
|
Физиол.р-р |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
- |
|
|
|
|
|
|
|
|
Исследуемая |
1,0→ |
1,0→ |
1,0→ |
1,0→ |
1,0↓* |
- |
1,0 |
сыв 1:50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Диагностикум |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
- |
(взвесь уби-тых |
капля |
капля |
капля |
капля |
капля |
капля |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
бактерий) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Конечное |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
1:1600 |
- |
1:50 |
разведение |
|
|
|
|
|
|
|
сыворотки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
*- выливают 1,0 мл, чтобы объем во всех пробирках был одинаков
ПРОБИРКИ ИНКУБИРУЮТ В ТЕРМОСТАТЕ ПРИ 37ºС 18-24 ЧАСА
Цель реакции – обнаружение антител в сыворотке крови больных
Реакцию ставят в лунках планшетов для иммунологических реакций. При положительной реакции – осадок склеившихся эритроцитов в виде
«перевернутого зонтика», при отрицательной – осадок «пуговкой»
ОБРАЗЦЫ
ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РПГА\РНГА
Схема постановки РПГА для обнаружения антител в сыворотке крови человека
Ингредиенты |
|
|
|
Номера лунок |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
2 |
3 |
|
4 |
|
5 |
6 к.д. |
7 к.с. |
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Физиологический |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
|
0,05 |
|
0,05 |
0,05 |
_ |
|
|
|
|||||||
раствор |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Исследуемая сыво- |
0,05→ |
0,05→ |
0,05→ |
|
0,05→ |
|
0,05↓* |
_ |
0,05 |
|
|
|
|||||||
ротка в рабочем |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
разведении 1:50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Разведения |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
|
1:800 |
|
1:1600 |
|
1:50 |
|
|
|
|
||||||
сыворотки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Эритроцитарный |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
|
0,05 |
|
0,05 |
0,05 |
_ |
|
|
|
|||||||
антигенный |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
диагностикум |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Конечное разве- |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
|
1:1600 |
|
1:3200 |
|
1:50 |
|
|
|
|
||||||
дение сыворотки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ПЛАНШЕТЫ ИНКУБИРУЮТ В ТЕРМОСТАТЕ ПРИ 37ºС 1-2 ЧАСА
РЕАКЦИЯ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ (РЛА)
Применяется для обнаружения антител в сыворотке крови больных и антигенов бактерий в исследуемом материале
Реакция латекс-агглютинации (РЛА) является одним из видов реакции агглютинации, в которой в качестве носителя антигена или антитела используются синтетические полимерные (латексные) частицы диаметром 0,5-1, 2 мкм
РЕАКЦИЯ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ
Для постановки РАЛ применяютсенсибилизирован- ные частицы полистирольного латекса, которые в присутст- вии гомологичного реагента склеиваются. Реакция быстрая (3…8 мин), что позволяет применить ее в качестве экспресс-метода для выявления антигенов и антител.
