Программа ИБП

облегчают поглощение в апк (антигенпредставляющие клетки). Липосомы используются для создания виросом, целиком заключенных в липосомы разнообразной структуры. Такой подход используется для изменения тропизма вирусов с целью направленной доставки векторных молекул при генотерапии (тканевая и клеточная специфичность)

PLG:

Поверхностно-заряженные поли (лактид-со-гликолид) (PLG) микрочастицы с адсорбированным поверхностным антигеном, также может быть используемый для доставки антигена в АПК. Микрочастицы PLG эффективны для индукции клеточного иммунитета.

Адъюванты на основе нк:

Бактериальная ДНК показывает прямое иммуностимулирующее действие на иммунные клетки in vitro. Этот ммуностимулирующий эффект обусловлен присутствие неметилированных CpG повторов. CpG-мотивы распознаются Toll-подобным рецептором в клетках млекопитающих, индуцирующие секрецию интерферонов клетками врожденной иммунной системы, провоцируя т-клеточный ответ. CpG-содержащие молекулы на основе ДНК широко используются для терапевтических применений, а также в к ачестве адъювантов для различных вакцин (вакцина от гепатита B).

18. Муконазальные иммуноадъюванты, хитозан, карбопол, цитокины.

Основная функция муконазальных адъювантов - индуцирование иммунного ответа при воздействии на слизистые оболочки организма. Хитозан, карбопол – биоадгезивы.

Хитозан — это производный продукт хитина. Карбопол – высокомолек. полимер акриловой кислоты.

Цитокины представляют собой небольшие белки, которые высвобождаются в ответ на иммунологические стимулы (влияние антигена) и функции в регуляции иммунных активности и гомеостаза. Например, GM-CSF, IL-12, IL-2, IL-4, IL-15, 1L-7, интерфероны,ФНО-α. Гранулоцитарно-макрофагоцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) усиливает иммунный ответ, активируя и связываясь с АПК. Однако практическое применение GM-CSF в качестве адъюванта было ограничено требованием использования большого количества доз, что вызывало системную токсичность и иммуногенность. С другой стороны, прямое применение IL-12 и других цитокинов в качестве растворимых белков оказались эффективными, в качестве муконазальных адъювантов.

Никитин 1. Вирусы и вызываемые ими инфекции. Основные понятия. Способы борьбы.

Вирусы (от латинского — virus, т.е. «яд») — неклеточные формы жизни. Состоят из нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и белковой оболочки (капсида).

ВИЧ рнк, Гепатит Б днк, Вирус Эбола рнк, Аденовирус днк (ОРВИ), Вирус гриппа рнк, Норовирус рнк (желуочно-кишечные), вирус кори рнк.

Противовирусные препараты - лекарственные средства, предназначенные для лечения и профилактики различных вирусных заболеваний.

ВИЧ (саквинавир, ритонавир, индинавир, рибавирин и др.)

Герпес (ацикловир, римантадин)

Грипп (осельтамивир, занамивир, римантадин, амантадин)

Гепатит В (ламивудин, адефовир)

Гепатит С (ИФ+рибавирин)

Респираторно синцитиальный вирус (рибавирин)

Клещевой энцефалит (римантадин)

Бешенство (рибавирин, амантадин, мидазол)

2.Бактерии и вызываемые ими инфекции. Основные понятия. Способы борьбы.

Бактерии – одноклеточные м/о.

Юстианова чума – чумная палочка г/о –сем.во энтеробактерия Брюшной тиф – салмонела тифи – сем.во энтербоактерии Туберкулез – микобактерии Дифтерия – бацилла леффлера г/п

Стобняк – клостридиум тетани (стобнячная палочка) г/п Коклюш – коклюшная палочка бактерия Борде Жангу, г/о

Факторы патогенности:

Факторы адгезии (прилипания) и колонизации (образование микробного слоя)

Факторы инвазии (проникновение и размножение, связанное с внедрением в живые ткани за счет различных ферментов)

Антифагоцитарные факторы (за счет капсулы, протеина М у стрептококка, протеина А у стафилококков, кордфакторов туберкулеза)

Факторы, нарушающие иммунную защиту

Токсические факторы (эндотоксины, экзотоксины)

Способы борьбы: вакцины, антибиотики, бактериофаги

3. Вакцины. Основные понятия. Классификация. Состав вакцин.

Вакцины - Препараты, получаемые из живых аттенуированных или убитых штаммов и их антигенов, предназначенные для создания активного иммунного ответа в организме привитых людей и животных.

Классификация по способу приготовления:

•Живые (аттенуированные) – основу препарата составляют ослабленные м/о (возбудители болезней). Выработка адекватного иммунного ответа (корь, грипп, туберкулез, полиомиелит, нат. и ветр. оспа).

•Убитые (инактивированные) – в составе мертвые бактерии или их фрагменты. Инактивируют температурой, радиацией, уф-лучами (физически) и химически (спирт, ацетон, формальдегид). Против гриппа, гепатита а, полиомиелита, холера, герпес, коклюш.

•Расщепленные (сплит-вакцины) - содержат разрушенные инактивированные вирионы, при этом сохраняя все белки вируса (против гриппа).

•Субъединичные (химические) - состоят из отдельных антигенов, способных обеспечить надежный иммунный ответ у привитого. На белковом носителе – коклюш, гепатит б, полисахаридные - менингококковая, пневмококковая, конъюгированные - менингококковая, пневмококковая.

•Анатоксины – инактивированные или убитый токсин бактерий. Вызывается иммунный ответ на действие токсина. Анатоксин адсорбируется на соли алюминия, чтобы увеличить иммунный ответ (столбняк, дифтерия) .

•Рекомбинантные - применяют методы генной инженерии, встраивая генетический материал микроорганизма в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген (впч, гепатит б).

•Комбинированные (поливакцины) - комбинация антигенов в одной и той же инъекции с целью профилактики различных заболеваний или защиты против множественных штаммов инфекционных агентов, которые вызывают одно и то же заболевание (например, комбинированная вакцина АКДС включает антигены дифтерии, коклюша и столбняка).

Состав: Антиген, адъювант, консервант, стаблизаторы, криопротекторы и тд. Остаточные: антибиотики, белок куриного яйца, дрожжевые белки.

4.Роль вакцин в жизни человека.

Одно из величайших достижений общественного здравоохранения в истории человечества.

Благодаря вакцинации человек приобретает иммунитет, или становится невосприимчивым к инфекционной болезни.

Вакцинация позволяет ежегодно предотвращать от 2 до 3 миллионов случаев смерти.

Это один из самых эффективных с точки зрения стоимости видов инвестиций в здравоохранение с проверенными стратегиями, которые обеспечивают доступность иммунизации даже для самых труднодоступных и уязвимых групп населения.

5.Понятия охвата и эффективности вакцинации.

Охват вакцинации – показатели документированной привитости. Показатели охвата позволяют косвенно оценить возможное состояние популяционного иммунитета.

Иммунологическая эффективность отвечает на вопрос, работает ли вакцина, а эпидемиологическая эффективность — на вопрос, помогает ли прививка людям. Иммунологическая эффективность вакцины и эффективность иммунизации профилактического мероприятия — разные понятия. Под иммунологической эффективностью вакцины понимают ее способ-ость вызывать выработку иммунитета у привитого, а эффективность иммунизации представляет собой различие в заболеваемости привитых и непривитых.

6. Безопасность применения вакцин.

Инактивированные вакцины не содержат живых вирусов и поэтому не могут вызвать заболевания. Так как вакцинация проводится в осенний период, когда наиболее распространены респираторные заболевания, вакцинируемый может после вакцинации заболеть – это является совпадением и никак не связано с прививкой.

Безопасность однократного применения превышенной дозы. Для каждого из рекомендуемых способов применения следует дать по одной превышенной дозе наиболее восприимчивой категории животных, для которых будет предназначена вакцина, включая животных в самом раннем возрасте и беременных животных, если возможно.обычно превышенная доза представляет собой 10 доз живой вакцины или 2 дозы инактивированного продукта. Животные должны наблюдаться и обследоваться на наличие признаков местных и соматических реакций. Следует вести записи других объективных критериев, таких как ректальная температура (у млекопитающих), и измерения характеристик животного. Наблюдение и обследование животных должно вестись в течение не менее 14 дней после приема вакцины.

Безопасность повторного применения одной дозы. Для выявления каких-либо отрицательных воздействий повторного применения одной дозы необходимо дать наиболее восприимчивой категории животных, для которых предназначена вакцина, повторную дозу, используя рекомендуемый способ применения. Животных следует наблюдать и исследовать в течение не менее 14 дней после последнего применения для выявления признаков соматических и местных реакций. Следует вести записи других объективных критериев, таких как ректальная температура (у млекопитающих), и измерения характеристик животного.

Остаточные вещества. Обычно нет необходимости в исследованиях наличия остаточных веществ. Однако если в производстве ветеринарных вакцин применяются вспомогательные лекарственные средства и/ или консерванты, следует учитывать вероятность попадания остаточных веществ в продукты питания. При необходимости следует исследовать воздействие этих остаточных веществ. Кроме того, в дополнение к исследованиям распространения микроорганизмов, описанным ниже, в случае с живыми вакцинами от установленных зоонотических заболеваний может потребоваться определение остаточных организмов вакцины в месте инъекции.

7. Типы и поколения вакцин. Сравнение эффективности и безопасности.

1 поколение – цельновирионные. Содержат целые вирусы гриппа, ослабленные или прошедшие инактивацию и незначительную очистку. Высокая имунногенность и высокая реактогенность. К первому поколению вакцин против гриппа относятся цельновирионные акцины двух типов – живые и инактивированные. Они представляют собой вирус гриппа искусственно ослабленный (живая вакцина) или убитый, т.е. прошедший инактивацию и очистку (инактивированная вакцина).

2 поколение – расщепленные. В вакцинах второго поколения стали использовать уже не цельный вирус гриппа (вирион), а очищенные поверхностные антигены вируса гриппа и внутренних белков. Такие вакцины представляют собой «убитый» (инактивированный) вирус гриппа, разрезанный на отдельные части. Эти части содержат и антигены, необходимые для защиты организма от гриппа, и другие элементы, которые не являются необходимыми для формирования имунного ответа - элементы мембраны, внутренние белки, РНКструктуры вируса. Средняя иммуногенность и средняя реактогенность.

3 поколение – субъединичные. Вакцины этого поколения остались инактивированными (не содержат частиц живого вируса), однако, в отличие от сплит-вакцин, в субъединичных вакцинах присутствуют только антигены вируса гриппа (высокоочищенные поверхностные белки гемагглютинин и нейраминидаза). Средняя иммуногенность и реактогенность ниже средней.

4 поколение – адъювантные. поиск безопасного адъюванта, способного усилить иммунный ответ, увеличить скорость его развития и длительность. Сами антигены слишком малы, чтобы организм их увидел и выработал необходимую защиту. Использование адъюванта в субъединичной противогриппозной вакцине дает возможность уменьшить содержание в ней количество антигенов, сохраняя при этом высокий уровень безопасности и эффективности прививки. Высокая иммуногенность и низкая реактогенность.

8. Живые вакцины. Состав. Получение. Преимущества и недостатки.

Содержат ослабленные живые вирусы, созданные на основе апотагенных возбудителей, аттенуированных в искусственных или естественных условиях путем инактивации генов или за счет их мутаций. Корь, свинка, краснуха, полиомиелит, туберкулез, грипп, желтая лихорадка, нат.оспа, вет. оспа.

Схема производства живых вакцин (вирусы): культивирование вакционного штамма вируса на культуре клеток или курином эмбрионе; концентрирование и очистка (диафильтрация, ультрацентрифугирвание); получение готового препарата, лиофильное высушивание в присутсвии стабилизаторов.

Схема производства живых вакцин (бактерии): культивирование бактерий на питательной среде; концентрирование и очистка (диафильтрация, ультрацентрифугирвание); получение готового препарата, лиофильное высушивание в присутсвии стабилизаторов.

Плюсы: вызывают гуморальный и клеточный иммунитет; высокая напряженность и длительность иммунитета; однократная иммунизация; низкие дозы.

Минусы: возможная реверсия патогенов; контаминация; поствакцинальные осложнения; проблемы при вакцинации пациентов с иммунодефицитом; беременность.

9. Убитые вакцины. Состав. Получение. Преимущества и недостатки.

Готовятся из инактивированных вирулентных штаммов вирусов и содержат убитый целый вирион, обладающий полным набором необходимых антигенов. Методы инактивации: физические (тем-ра, радиация, Уф-лучи) и химические (спирт, ацетон, формальдеги, бетапропиолактон). Против полиомиелита, гепатита а, грипп, герпес, бешенство, холера, брюшной тиф, коклюш, дифтерия и сотлбняк.

Схема производства вирус: культивирование вакционного штамма вируса на культуре клеток или курином эмбрионе; концентрирование и очистка (диафильтрация, ультрацентрифугирвание); инактивация, хроматографическое выделение антигенов; приготоволение глф (жидкая, либо криогенное высушивание).

Схема производства бактерии: культивирование бактериальной биомассы; концентрирование и очистка (диафильтрация, ультрацентрифугирвание); инактивация, хроматографическое выделение антигенов; очистка (хроматография), получение препарата.

Плюсы: потеря репликативной активности и отсутствие реверсии к патогенной форме, следовательно нет риска возникновения заболевания; вызывает гуморальный иммунитет; могут применяться у пациентов с синдромом иммунодефицита.

Минусы: могут не всегда вызывать иммунный ответ после введния первой дозы; несколько доз.

10. Расщепленные вакцины. Состав. Получение. Преимущества и недостатки.

Содержат разрушенные инактивированные вирионы, при этом сохраняя все белки вируса (как поверхностные так и внутренние). Грипп.

Схема производства: культивирование вакционного штамма вируса на культуре клеток или курином эмбрионе; концентрирование биомассы (диафильтрация, ультрацентрифугирвание); дезинтеграция, хроматографическое выделение антигенов; приготоволение глф (жидкая, либо криогенное высушивание). С целью разрушить вирусные частицы их подвергают действию детергента (пав=додецилсульфат натрия), а затем выделяют специфические антигены тонкой хроматографией.

Преимущества: отсутствие патогена в составе вакцины; безопасность, тк есть разрушение пространственной структуры вируса; низкая реактогенность; достаточная иммуногенность.

Недостатки: более низкая эффективность по сравнению с цельновирионной вакциной; как правило, несколько ревакцинаций.

11. Субъединичные вакцины. Состав. Получение. Преимущества и недостатки.

Состоят из отдельных антигенов, способных обеспечить надежный иммунный ответ у привитого.

Преимущества: отсутствие патогена в составе вакцины; безопасность; высокая стабильность.

Недостатки: низкая эффективность по сравнению с цельновирионной вакциной; значительно слабее Т-клеточный ответ; всегда требуются адъюванты; дорого; несколько доз.

12. Вакцины на основе анатоксина. Состав. Получение.

Анатоксин - инактивированный или убитый токсин (отравляющее вещество), используемый в производстве вакцин. Вакцина, произведенная из анатоксина, который стал безвредным, но который вызывает развитие иммунного ответа на действие токсина. Токсин обезвреживается и используется в качестве антигена в вакцине, чтобы вызвать иммунитет. Чтобы увеличить иммунный ответ, анатоксин адсорбируется на соли алюминия или кальция, которые служат адъювантами. Методы дезактивации вредного воздействия токсинов: химический (обработка спиртом, ацетоном или формальдегидом) и физический (нагрев)

Схема производства: культивирование бактериальной биомассы на питательной среде; концентрирование и очистка надосадочной культуральной жидкости (диафильтрация); инактивация токсина (получение анатоксина); приготовление глф.

Плюсы: не вызывает заболевания; местные и систематические реакции крайне редки; высокая стабильность и длительность действия.

Минусы: несколько доз; использование адъювантов.

13.Понятие идеальной вакцины будущего.

Поливалентная

Безопасная

Не нуждающаяся в холодовой цепи

Пероральный способ введения

Формирует пожизненный иммунитет у 100%привитых при однократном введении.

14.Вспомогательные компоненты вакцин.

Стабилизаторы - хлорид магния, сульфат магния, сорбитол-желатин, человечекский сывороточный альбумин.

Консерванты – тиомерсал, производные формальдегида или фенола. Криопротекторы в лифолизатах – сахароза, пвп, желатин. Антибиотики - гентамицин Адъюванты - гидроксид алюминия, фосфат алюминия

15. Этапы разработки вакцин. Доклинические испытания.

Очень важен подход к выбору животных Изучаются следующие показатели:

соотношение доза–ответ путем исследования эффекта комбинации различных доз адъюванта с различными дозами антигена вакцины;

тип и интенсивность иммунного ответа (гуморальный или клеточный);

сравнительные исследования новой вакцины с адъювантом в сравнении с вакциной без адъюванта или вакциной с уже известным адъювантом;

оценка защитного или лечебного эффекта в отношении соответствующего патогена путем использования моделей заболевания на животных или тестов in vitro;

оценка интенсивности и длительности вызванного иммунного ответа.

Типы токсикологических исследований:

Систематические токсикологические исследования

Исследования приема однократной дозы

Исследования приема многократной дозы

Исследования репродуктивной токсичности

Исследования воздействия на оплодотворяющую способность самцов

Исследования воздействия на репродуктивную систему самок и развитие плода

Местные токсикологические исследования

Исследования гиперчувствительности

Исследования генотоксичности

Исследования канцерогенности

Животные:

Мыши, хомяки, крысы - токсикология, фармакология, большой спектр модельных заболеваний;

Морские свинки - токсичность, модельные заболевания, связанные с гиперреактивным иммунным ответом;

Песчанки, песчаные крысы - фармакология, для моделирования инсульта, диабета, ожирения, язвы желудка, воспалительных заболеваний;

Дегу - фармакология. Используют для моделирования болезни Альцгеймера, сахарного диабета;

Кролики – токсикология, фармакокинетика, фармакология. Для наработки антител;

Карликовые свиньи – токсикология, иммуногенность препаратов, фармакокинетика, фармакология;

Хорьки - токсикология, канцерогенность, фармакология.Для моделирования инфекционных заболеваний(грипп, корь).

16.Этапы разработки вакцин. Клинические испытания.

Проводятся с участием человека в качестве субъекта для выявления или подтверждения клинических и/или фармакологических эффектов исследуемых лекарственных средств с целью выполнения оценки безопасности и эффективности.

Является неотъемлемым этапом разработки препаратов, который предшествует его регистрации и широкому медицинскому применению.

На основании полученных данных в ходе клинических исследований принимается решение о регистрации препарата или отказе в регистрации.

Виды:

Пилотное исследование

Рандомизированное

Контролируемое или неконтролируемое (несравнительные)

Параллельные или перекрестные исследования

Открытое или слепое (замаскированное)

Проспективное или ретроспективное (историческое)

Одноцентровое или многоцентровое

Параллельные исследования (дизайн независимых групп)

Когортное исследование

Исследование сходных случаев (случай-контроль) ФАЗЫ:

Фаза I - Испытания ЛС на здоровых добровольцах (не менее 10). Задачи: безопасность, переносимость, иммуногенность. Открытые испытания.

Фаза II - Оцениваются эффективность и безопасность препарата у пациентов с конкретным заболеванием. Задачи: определение оптимальных возрастных дозировок и схем иммунизации по показателям: реактогенности, безопасности и иммуногенности. Контролируемые испытания «слепой метод».

IIа - оценка краткосрочной безопасности лекарственного средства

IIb - доказательство клинической эффективности лекарственного средства и определение дозы. Фаза III - Испытание ЛС на больших группах пациентов (тысячи испытуемых).

Решение о регистрации или отказе в регистрации ЛС. Задачи: определение иммунологической и профилактической эффективности, побочного действия и реактогенности. Контролируемые испытания «слепой метод»

Фаза IV - Постмаркетинговые (пострегистрационные) исследования. Задачи: эпидемиологическая эффективность (влияние на заболеваемость), побочное действие, экономическая эффективность вакцинации, сравнение эффективности однонаправленных препаратов, расширение и уточнение показаний к применению. «Открытые» и/или контролируемые испытания.

18. Противовирусные препараты.

Противовирусные препараты отличаются от вакцин, в первую очередь, тем, что они (фактически) являются лекарством против вирусного заболевания, вирусной инфекции. В отличие от вакцин, действие которых основано на подготовке иммунной системы ко встрече с вирусом, действие противовирусных препаратов связано с их непосредственным влиянием на различные этапы жизненного цикла вируса, такие как проникновение вируса в клетку, его размножение или выход из клетки. Применение противовирусных препаратов возможно уже после заражения человека и начала инфекции.

ВИЧ (саквинавир, ритонавир, тенофовир, ритонавир и др.). Делятся на: нуклеозидные ингибиторы обратной трарнскриптазы; ненуклеозидные ингибиторы обратной трарнскриптазы; ингибиторы рецепторов; ингибиторы слияния и тд.

Герпес (ацикловир, римантадин)

Грипп (осельтамивир и занамивир – ингибиторы нейраминидазы; римантадин и амантадин – ингибиторы м2; балоксавир и марбоксил – ингибиторы эндонуклеазы; рибавирин - ингибитор рнк-зависимой рнк-полимеразы)

Гепатит В (ламивудин, адефовир)

Гепатит С (ИФ+рибавирин)

Респираторно синцитиальный вирус (рибавирин)

Клещевой энцефалит (римантадин)

Бешенство (рибавирин, амантадин, мидазол)

19.Бактериофаги. Фаговая терапия.

Лечение и профилактика с помощью бактериофагов носят специфический характер, так как направлены на уничтожение определенных (лизис) бактерий. Бактериофаги применяют наряду с другими ИБП в случае эпидемических вспышек инфекционных болезней для предупреждения их распространения, а также для лечения больных с точно установленным диагнозом и фаготипированным возбудителем.

Бактериофаги получают культивированием пораженных фагом бактерий на питательных средах и выделением из культуральной жидкости фильтрата, содержащего фаги. Этот фильтрат подвергают леофильному высушиванию и таблетированию. Возможно также получение бактериофага в виде суспензий. Активность бактериофага устанавливают путем титрования на соответствующих, чувствительных к фагу, культурах бактерий, выращенных на плотных или жидких питательных средах, и выражают числом частиц фага, содержащихся в 1 мл суспензии или в одной таблетке.

Важным является идентификация и определение чувствительности возбудителя к бактериофагу с целью выбора эффективного препарата.

По составу препараты на основе бактериофагов различают:

поливалентные (активные по отношению к различным видам и серотипам одного возбудителя)

комбинированные (содержат фаги к нескольким возбудителям)

Олиго-человек 1.Современный олигонуклеотидный синтез. Принципы основных подходов.

Олигонуклеотид – короткий фрагмент ДНК или РНК, получаемый либо путем химического синтез, либо расщеплением более длинных нуклеотидов. В настоящее время принято считать, что олигомерная форма нуклеиновой кислоты может содержать до 20-200 нуклеотидов.

Области применения:

-Молекулярная биология

-ПЦР

-Сборка генов

-Секвенирование

-Терапевтические средства

-ДНК-вакцины

-Адъюванты

-Аптамеры (это олигонуклеотид, который как-то связывается и взаимодействует с белками и ДНК)

Необходимо вводить защитные группы, снимая их мы получаем «живую структуру». Используют легко уходящие защитные группы, чтобы под воздействием, например, кислот или щелочей не разрушить основную структуру соединений. Классический подход синтеза от 3’ к 5’.

Циклы синтеза:

Детритилирование - Изначально на стеклянные шарики с помощью специальных лтнкеров присоединяют нуклеозид, который защищают по 5’ положению сахара пентозы диметокситритильной защитой (ДМТ). Детритилирование – отщепление 5’ диметокситритильной группы с помощью трихлоруксусной кислоты. Тритилометр – прибор, который регистрирует желтый цвет реакции на стадии детритилирования, это говорит, что реакция идет. Там, где сняли защиту теперь весит гидроксильная группа и туда под действием катализатора тетразола присоединяется защищенный нуклеозид, т.е. наращиваем цепочку.

Присоединение - Там, где сняли защиту теперь весит гидроксильная группа и туда под действием катализатора тетразола присоединяется защищенный нуклеозид, т.е. наращиваем цепочку.