Фармакогностическое изучение растений рода тимьян (Thymus L.) как перспективного источника получения фитопрепаратов

антиоксидантном действии травы исследуемых тимьянов. Максимальное содержание флавоноидов отмечено для извлечений на спирте этиловым 70%, а сумма фенольных соединений – на спирте этиловым 50%. Данные результаты показывают перспективность применения экстракционных фитопрепаратов на основе растений рода тимьяна для коррекции патологий, которые возникают при активации процессов свободно-радикального окисления.

Существенное значение для применения растений рода тимьян в научной медицине имеет и установленная нами антибактериальная активность настоев и эфирного масла, полученных из них. Антимикробная активность настоев травы тимьяна блошиного, тимьяна мелового, тимьяна Маршалла, тимьяна Черняева была либо выше, либо сопоставимой с таковой официнального вида – настоем тимьяна ползучего. Несколько ниже, однако, близкая к таковой тимьяна ползучего антимикробная активность была у настоев травы тимьяна Палласа и тимьяна двуликого.

Проведено совершенствование технологии получения жидкого экстракта чабреца с применением метода вакуум-фильтрационного экстрагирования, обеспечивающее истощения сырья по содержанию флавоноидов на 87%. С целью унификации методик контроль качества жидкого экстракта и растительного сырья проводили определение флавоноидов с использованием спектрофотометрической методики, разработанной нами для сырья и адаптированной для жидкого экстракта.

Таким образом, проведенный комплекс фармакогностических, фармакологических, технологических исследований растений рода тимьян флоры средней полосы Европейской части России показал перспективность и возможность использования в научной медицине России растений данного рода наряду с тимьяном ползучим (рисунок 202).

Научная новизна исследований подтверждена патентом на изобретение «Способ получения олеаноловой кислоты» №2538213. Разработана и утверждена фармакопейная статья «Чабреца трава», включенная в

389

1. Выбор объектов исследования

Изучение сопутствующих малоизученных веществ

2.2 Проведение морфолого-анатомического изучения с целью установления макро-и-микро диагностических признаков сырья и отличительных особенностей видов

Рисунок 234 - Схема научно-методического обоснования перспективности использования растений рода тимьян в научной медицине

390

Государственную фармакопею РФ XIII издания, а также «Инструкция по заготовке сырья чабреца», утвержденная комиссией по стандартизации Федерального государственного бюджетного научного учреждения

«Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений».

Разработан проект нормативного документа «Тимьяна Маршалла трава»,

согласованный с ООО фирма «Здоровье».

Результаты диссертационной работы внедрены в научный и учебный процесс кафедры фармакогнозии Пятигорского филиала ГБОУ ВПО

«Волгоградский государственный медицинский университет»,

фармацевтического факультета «Северо-Осетинского государственного университета им. К.Л. Хетагурова», а также в работу ООО фирма «Здоровье».

Материалы диссертации опубликованы в 60 публикациях, в том числе 1

монографии «Тимьяны флоры Центрального Черноземья».

391

ВЫВОДЫ

1.Обоснована необходимость и перспективность использования в качестве новых сырьевых источников близкородственных видов рода Тимьян средней полосы России к официнальным видам (тимьяну обыкновенному и тимьяну ползучему); в качестве таковых предложены для заготовительного процесса тимьян Маршалла, тимьян Палласа, тимьян блошиный, тимьян меловой, тимьян Черняева.

2.Проведено комплексное фитохимическое исследование 7 видов тимьянов,

произрастающих на территории средней полосы России - тимьяна

Маршалла, тимьяна Палласа, тимьяна блошиного, тимьяна мелового,

тимьяна Черняева, тимьяна двуликого. Установлено наличие и количественное содержание эфирного масла, жирных кислот,

тритерпеновых и фенольных соединений, углеводов, аминокислот и органических кислот, минеральных элементов, из которых в качестве основных групп биологически активных веществ на этапе оценки качества сырья, получения и стандартизации лекарственных препаратов предложено рассматривать флавоноиды и фенилпропаноиды.

3.С использованием различных хроматографических методов (тонкослойной,

бумажной, ВЭЖХ, газожидкостной хромато-масс спектрометрии)

идентифицировано 27 веществ фенольной природы, большинство из которых впервые. Методами селективной экстракции, хроматографии,

кристаллизации в индивидуальном состоянии выделено 20 фенольных соединений, для которых установлена структура и изучены физико-

химические характеристики. Выделенные соединения представлены

флавонам и представлены агликонами и их 7-моногликозидами.

392

4.Установлено содержание эфирного масла: от 0,15±0,01% до 1,72±0,04%.

Исследование его компонентного состава позволило идентифицировать более 100 соединений, среди них определены доминирующие компоненты.

В большинстве изученных видов установлено наличие специфических для растений рода тимьян тимола и карвакрола, которые не всегда являются

преобладающими. По преобладанию компонентов в эфирном масле выделено 6 хемотипов: 1- α – терпинеола (тимьян Палласа, тимьян ползучий); 2- неролидола, карвакрола, тимола (тимьян меловой); 3-

карвакрола, кариофиллена, тимола, метилкарвакрола (тимьян блошиный); 4-

карвакрола, борнеола, тимола, β –бисаболена (тимьян Маршалла); 5-

цитраля (тимьян двуликий); 6 – тимола, карвакрола (тимьян Черняева).

5.В сырье тимьянов качественными реакциями и методом тонкослойной хроматографии установлено наличие тритерпеновых сапонинов, среди которых идентифицированы урсоловая и олеаноловая кислоты, а также проведено их выделение с установлением структуры. Разработан патентозащищенный способ получения олеаноловой кислоты из травы тимьяна Палласа с выходом 0,6%.

6.Из групп биологически активных веществ, имеющих сопутствующее значение для использования исследуемых растений, изучен жирнокислотный состав: установлено содержание 20 жирных кислот, среди насыщенных жирных кислот доминируют пальмитиновая и бегеновая кислоты, ненасыщенные кислоты представлены преимущественно линолевой, линоленовой, арахидоновой и олеиновой кислотами.

Установлено наличие свободных и связанных аминокислот,

идентифицировано 14 органических кислот и 19 минеральных элементов. В

составе углеводных комплексов обнаружены как свободные, так и связанные сахара. В свободном виде обнаружены ксилоза, галактоза,

глюкоза. Связанные сахара представлены в виде гликозидов и

полисахаридов. Проведено выделение водорастворимых полисахаридных

комплексов и пектиновых веществ, выход которых составил:

393

водорастворимые полисахариды - от 3,10±0,12% до 7,58±0,18%, пектиновые вещества - от 8,21±0,37% до 17,78±0,38%. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав.

7.Проведено морфолого-анатомическое изучение 7 видов тимьянов,

произрастающих на территории средней полосы России, позволяющие проводить диагностику сырья морфологически близких видов.

Морфологическими отличиями являются поперечное сечение стебля,

опушение стебля, форма листьев, наличие или отсутствие черешка,

строение соцветия, направление волосков на цветоножке, характеристика зубцов верхней губы чашечки, опушение чашечки. Наиболее важные микродиагностические признаки сырья - это опушение стебля, листа,

чашечки и венчика простыми и головчатыми волосками. Диагностическое значение имеют также выросты клеток эпидермиса и наличие кристаллов в трубке венчика.

8.Разработаны для сырья чабреца методики качественного и количественного определения флавоноидов в траве и жидком экстракте; методики спектрофотометрического определения гидроксикоричных кислот в вариантах прямой и дифференциальной спектрофотометрии для травы тимьянов - тимьяна Маршалла, тимьяна мелового, тимьяна Палласа,

тимьяна блошиного, тимьяна Черняева. Для них экспериментально обоснованы параметры качества. Разработана фармакопейная статья

«Чабреца трава», включенная в ГФ РФ XIII издания и нормативный документ «Тимьяна Маршалла трава».

9.При проведении фармакологических исследований изучены острая токсичность и фармакологические свойства сырья растений рода Тимьян.

Для всех исследуемых видов установлены отхаркивающая,

противовоспалительная, ангиопротекторная, антибактериальная активности.

Экспериментально установлена антиоксидантная активность водно- и

водно-спиртовых извлечений из исследуемых растений, при этом наиболее

выраженная активность характерна для извлечений, получаемых с помощью

394

спирта этилового 70%, и содержание флавоноидов в данных извлечениях

так же наибольшее.

10.Комплекс проведенных экспериментальных исследований позволил выявить оптимальные параметры технологического процесса для получения жидкого экстракта чабреца с использованием вакуум-фильтрационного способа экстрагирования, обеспечивающим истощение сырья по флавоноидам до 87%.

Рекомендации

Проведенные исследования могут явиться основой для поиска новых источников растительного сырья из растений рода Тимьян и расширения номенклатуры отечественных лекарственных средств на их основе.

Перспективы дальнейшей разработки темы

Перспективы дальнейшей разработки темы диссертационного исследования включают направления, имеющие важное практическое и теоретическое значение: введение в отечественную номенклатуру перспективных видов сырья тимьянов, произрастающих на территории средней полосы России, углубленное изучение их фармакологической активности, а

также проведение доклинических и клинических испытаний новых лекарственных препаратов на основе видов рода Тимьян.

395

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Абдулаев, Ш.В. Химия ароматических соединений семейств бобовых и губоцветных: автореф. дис. … д-ра химических наук: 15.00.02; 02.00.10 / Ш.В. Абдулаев. – Харьков, 1992. – 62 с.

2.Айнабекова, Б.А. Об использовании препарата чаги как антиоксиданта / Б.А. Айнабекова // Клинич. геронтология. - 2001. - Т.7, №3/4. -

С. 59-60.

3.Акашкина, Л.В. Теоретические и прикладные аспекты стандартизации некоторых лекарственных средств (субстанции и препараты, получаемые из лекарственного растительного сырья): автореф. дис. … д-ра фармац. наук: 15.00.02 / Л.В. Акашкина. – СПб, 2000. – 72 с.

4.Алаева, Н.А. Рациональное использование сырья в производстве экстракта чабреца жидкого / Н.А. Алаева // Актуальные вопросы фармации и экспериментальной медицины: Тез. докл. науч. конф. молодых ученых и специалистов Пятигорского фармац. ин-та. – Пятигорск, 1985. – С.41.

5.Алаева-Зыкова, Н.А. Разработка ресурсосберегающей технологии экстракта чабреца жидкого / Н.А. Алаева-Зыкова, Ю.Г. Пшуков // Фармация. –

1989. - №5. – С.22-25.

6.Алексеева, Л.И. Фенольные соединения Thymus Talyevii Klok. et Schost. / Л.И. Алексеева, Л.В. Тетерюк // Химия растит. сырья. – 2008. - №4. – С. 65-68.

7.Алексеева, Л.И. Розмариновая кислота и антиоксидантная активность представителей семейства Lamiaceae / Л.И. Алексеева, В.А. Канев

//Вопр. биол., медицинской и фармацевтической химии. – 2014. - №2. – С.3135.

8.Алексеева, Л.И. Розмариновая кислота и антиоксидантная активность Prunella grandiflora и Prunella vulgaris (Lamiaceae) / Л.И. Алексеева, Е.В. Болотник // Растительный мир азиатской России. – 2013. - № 1. – С. 121125.

396

9.Аль-Гифри, С.К. Фармакогностическое изучение растений рода Дурнишник: автореф. дис. …канд. фармац. наук: 14.04.02 / С.К. АльГифри. – Курск, 2010. - 21 с.

10.Аминокислотный состав и ноотропные свойства полиноофита / И.Г. Николаева, Л.Д. Дымшеева, С.М. Николаев, Г.Г. Николаева // Хим.-

фармацевт. журн. – 2011. – т.45, №8. – С.45-48.

11. Аминокислотный, жирнокислотный и углеводный состав сока некоторых видов рода Betula / Т.А. Шуляковская [и др.] // Раст. ресурсы. 2006. -

Вып. 2 – Т. 42 - С.69-77.

12.Андреева, В.Ю. Исследование химического состава надземной части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.S.L. / В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина // Химия растит. сырья. – 2000. - № 2. – С. 79-85.

13.Антиоксидантная активность - показатель качества эффективности фитопрепаратов / Е.И. Шкарина [и др.] // Фармация на современном этапе -

проблемы и достижения: сб. науч. тр. НИИФ. - М., 2000. -Т. 39, ч. 2. - С. 168-

174.

14.Антиоксидантная активность вводно-спиртовых извлечений листьев крапивы двудомной / О.В. Тринеева, Е.Ф. Сафонова, С.С. Воропаева, А.И. Сливкин // Фармация. – 2013. - №1. – С. 11-12.

15.Антиоксидантное действие эфирного масла тимьяна ползучего

(Thymus serpyllum L.) / Л.Р. Варданян, С.А. Айрапетян, Р.Л. Варданян, А.Э. Аветисян // Химия растительного сырья. – 2013г. - №3. – С. 143-148.

16.Арзамасцев, А.П. Оценка показателей антиоксидантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев, Е.И. Шкарина, Т.В. Максимова // Хим. - фармац. журн. - 1999. - №11. - С. 17-20.

17.Архипова, О.В. Изучение содержания аскорбиновой кислоты в цветках и листьях боярышников, произрастающих на территории Российской Федерации / О.В. Архипова, Е.А. Клейненберг // Молодежная наука и современность: материалы 74-й межвуз. Итоговой науч. конф. Студентов и

397

молодых ученых, посвящ. году молодежи в России (21-22 апр. 2009 г.). – Курск,

2009. – Ч.2. – С.161.

18.Бабаян, Т.О. Применение антиоксидантов в комплексном лечении онкологических больных / Т.О. Бабаян, А.П. Арзамасцев, Н.Е. Кушлинский // Фармация. - 1998. - №3. - С. 39-40.

19.Багдаа, Д. О биологической ценности некоторых видов разнотравья

/Д. Багдаа, И.В. Кобозев // Сб. трудов Моск. с-х, акад. им. К.А.Тимирязева.-

М. - 1981. - С. 127-128.

20.Багирова, В.Л. Совершенствование экспертизы и стандартизации

лекарственных средств на современном этапе в РФ / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, К.С. Шахназаров // Всерос. Съезд фармац. работников (5-7 июня 2005; Сочи). - Сочи, 2005. - С. 49-50.

21.Баландина, И.А. Совершенствование принципов и методов фармакопейного анализа в системе стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на его основе: автореф. дис. … д-ра фармац. наук: 15.00.01; 15.00.02 / И.А. Баландина.- М., 2004. – 38 с.

22.Банаева, Ю.А. Исследование химического состава эфирного масла представителей рода Thymus L., произрастающих на Алтае / Ю.А. Банаева, Л.М. Покровский, А.В. Ткачев // Химия растит. сырья. - 1999. - №3.- С. 41-48.

23.Бандюкова, В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге / В.А. Бандюкова // Раст. ресурсы. - 1965. - Т. 1, вып. 4. - С. 391.

24.Бандюкова, В.А. Каталитическое ацетилирование флавоноидов / В.А. Бандюкова, В.Д. Пономарев // Химия природ. соединений. - 1971. - №4. - C. 215-219.

25.Бандюкова, В.А. Методы исследования природных флавоноидов / В.А. Бандюкова. – Пятигорск : Бальнеологич. ин-т, 1977. - 72 с.

26.Бандюкова, В.А. Тонкослойная хроматография флавоноидов: методические рекомендации / В.А. Бандюкова, А.А. Шинкаренко. – Пятигорск,

1973. – 16 с.

398