Фармакогностическое изучение растений рода тимьян (Thymus L.) как перспективного источника получения фитопрепаратов

Полученный коэффициент корреляции 0,99939, что соответствует требованиям.

Проведенные исследования позволили установить, что в диапазоне измеряемых концентраций (начиная с оптической плотности 0,25) зависимость содержания гидрооксикоричных кислот от массы навески сырья тимьянов

имеет линейный характер (рисунок 197, таблица 52).

Повторяемость методики была определена одним исследователем на

одном образце сырья тимьяна в шести повторностях.

Таблица 53 - Содержание суммы гидрооксикоричных кислот в траве тимьяна Маршалла

Определенная величина относительного стандартного отклонения,

которая составила 3,74%, говорит о том, что разработанная методика прецизиозна в условиях повторяемости (таблица 53).

Воспроизводимость разработанной методики была выполнена 2

сотрудниками кафедры на 3 образцах сырья тимьяна в 3 повторностях (таблица

54).

Таблица 54 – Результаты определения воспроизводимости разработанной методики

341

Результаты проведенных исследований показали, что величина относительного стандартного отклонения не превышает 4 % (а не должна превышать 15%). Соответственно, методика в указанных условиях воспроизводима.

При определении правильности методики устанавливали содержание гидроксикоричных кислот в растворах, которые получали при добавлении к изучаемому извлечению раствора кислоты розмариновой стандартного для того, чтобы получить концентрации 115%, 130%, 145%. При этом средний процент восстановления, скорректированный на 100%, должен варьировать в пределах 100±5%.

Таблица 55 – Результаты определения правильности разработанной методики (опыты с добавками)

342

В разработанной нами методике определенный процент восстановления варьирует от 97,16% до 103,28% (таблица 55). Средняя величина процента восстановления составила 100,78%. Относительная ошибка с 95%

вероятностью не превышает 4,79%.

Валидация методики количественного определения суммы

гидрооксикоричных кислот в варианте дифференциальной

спектрофотометрии

Валидацию разработанной методики определения суммы гидрооксикоричных кислот в варианте дифференциальной спектрофотометрии проводили по тем же показателям: линейности, повторяемости,

воспроизводимости и правильности [77].

Для установления линейности предложенной методики готовили водно-

спиртовые извлечения из различных навесок сырья тимьяна Маршалла массой

0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 и 0,8 г (точные навески). Навески сырья заливали 100 мл спирта этилового 50% и получали извлечения по разработанной нами методике.

По 1,0 мл исследуемых извлечений переносили в мерные колбы на 10 мл,

приливали по 2,0 мл раствора кислоты хлористоводородной 0,5 М, 2,0 мл раствора, приготовленного следующим образом: 10,0 г натрия нитрита и 10,0 г

натрия молибдата, растворенных в 100,0 мл воды очищенной, вносили также

2,0 мл натрия гидроксида 10% раствора и к полученнойю смеси приливали воды очищенной до 10,0 мл. Измеряли оптическую плотность исследуемого раствора при длине волны 505 нм и в кювете с толщиной слоя 10,0 мм. В

качестве раствора сравнения использовали раствор, содержащий 1,0 мл исходного извлечения, 2,0 мл раствора кислоты хлористоводородной 0,5 М, 2,0

мл разведенного натрия гидроксида и доведенной в мерной колбе на 10,0 мл до метки водой очищенной.

343

Зависимость оптической плотности растворов (Y) от концентрации сырья

(X) приведена на рисунке 231 и выражается уравнением Y=A+BX, где А –

-0,0054, В – 1,141693, коэффициент корреляции R=0,999877.

г

Рисунок 231График зависимости оптической плотности извлечений из травы тимьяна

Маршалла от концентрации розмариновой кислоты

Таблица 56 - Статистическая обработка данных, которые получены при

изучении линейной зависимости вида y=bx+a

Проведенные исследования позволили установить, что в диапазоне исследуемых концентраций зависимость оптической плотности (от 0,3 до 0,7)

от концентрации имеет линейный характер (рисунок 231).

Кроме того, найденное значение коэффициента А (-0,0054) (таблица 56)

свидетельствует о статистически незначимом влиянии остальных фенольных соединений, содержащихся в сырье и полученном извлечении, в содержание гидрооксикоричных кислот, что позволяет сделать вывод о том, что разработанная методика достаточно специфична.

При определении повторяемости методики изучение проводил один

344

исследователь, был использован один образец сырья и исследование проводили

в 6 повторностях.

Таблица 57 - Содержание суммы гидрооксикоричных кислот в траве

тимьяна Маршалла

Определенная величина относительного стандартного отклонения, составила 6,58%, что подтверждает то, что методика в условиях повторяемости

прецизионна (таблица 57).

Воспроизводимость методики определяли 2 сотрудника кафедры,

которые проводили исследование на 3 образцах сырья в 3 повторностях (таблица 58).

При этом величина относительного стандартного отклонения (RSD), не

должна превышать 15%.

Таблица 58 – Результаты определения воспроизводимости методики

345

отклонение в разработанной методике, которое не превышает 7,54%, что подверждает то, что разработанная методика в условиях воспроизводимости прецизионна.

Определение правильности методики проводили при измерении содержания суммы гидроксикоричных кислот в извлечениях, к которым добавлено необходимое количество раствора кислоты розмариновой стандартного для создания различных концентраций. При этом средний процент восстановления должен быть, скорректирован на 100%, средняя величина обычно колеблется в диапазоне 100±5%.

Таблица 59 – Результаты определения правильности разработанной методики

(опыты с добавками)

Разработанная методика показала процент восстановления от 97,88% до

103,57% (таблица 59), средняя величина его составила 100,76%. Относительная ошибка определения с 95% вероятностью не превышает 4,86%.

Таким образом, было установлено, что разработанные методики спектрофотометрического определения суммы гидрооксикоричных кислот в вариантах прямой и дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на розмариновую кислоту могут быть использованы для определения

346

гидроксикоричных кислот в сырье тимьянов, так как установлено, что разработанные методики легко воспроизводимы, доступны, занимают небольшое количество рабочего времени, для их проведения не требуется дорогостоящих реактивов.

Содержание суммы гидроксикоричных кислот в сырье

растений рода тимьян

Для установления возможности использования разработанных методик спектрофотометрического определения суммы гидроксикоричных кислот методами прямой и дифференциальной спектрофотометрии по разработанным методикам проанализированы образцы травы тимьяна Маршалла и других видов растений рода тимьян, заготовленных в Курской, Воронежской,

Брянской, Орловской областях в различные годы (таблица 60).

Таблица 60 - Содержание суммы гидрооксикоричных кислот в сырье растений рода тимьян

347

Проведенное определение количественного содержания суммы гидрооксикоричных кислот в траве растений рода тимьян двумя методами:

прямой спектрофотометрии и дифференциальной спектрофотометрии (таблица

60) показало, что максимальное количество суммы гидрооксикоричных кислот наблюдается при использовании метода прямой спектрофотометрии и составляет от 2,62% до 10,83%; методом дифференциальной спектрофотометрии определено от 1,04% до 7,84% суммы гидрооксикоричных кислот. Недостаток первого метода заключается в невысокой избирательности и точности методики, так как в этой области спектра способны поглощать и другие фенольные соединения, содержащиеся в растениях рода тимьян, в

частности флавоноиды, что приводит к получению завышенных результатов.

Таким образом полученные результаты позволяют сделать вывод о рациональности количественного определения суммы гидрооксикоричных кислот методом дифференциальной спектрофотометрии, предложенным европейской фармакопеей.

Наибольшее содержание гидроксикоричных кислот накапливается в траве тимьяна блошиного (6,34%-7,84%).

5.4 Разработка фармакопейных статей на растительное сырье тимьянов

348

350