Сизенцов А.Н. Общая вирусология с основами таксономии вирусов позвоночных

мы.

Инфекция, вызванная CTFV характеризуется у людей внезапной лихорадкой,

ознобом, головной и ретроорбитальной болями, светобоязнью, миальгиями и общим недомоганием. Абдоминальные боли встречаются в 20 % случаев. Сыпь проявляется редко (менее 10 %). Двухили трехфазная лихорадка может сохраняться до10 су-

ток. Тяжелые формы болезни, включающие признаки поражения ЦНС или геморра-

гической лихорадки встречаются редко, в основном у детей до12 летнего возраста.

В некоторых случаях это заканчивается фатально. Может происходить внутриут-

робное заражение CTFV, однако риск аборта или смерти плода не известен.

CTFV сопровождается лейкопенией у взрослых хомяков , ипримерно, у 2/3

инфицированных людей. У мышат-сосунков, обычно погибающих на 6-8 сутки по-

сле заражения, обнаруживаются некроз миокарда, некробиотические изменения мозжечка, широкие очаговые некрозы и периваскулярные воспалительные процессы в коре мозга; отмечается дегенерация мышечной ткани, некрозы печени, сильная инволюция тимуса, некрозы ретины и бурого жира. У человека проявляется сходная патолого-анатомическая картина: менингит, менингоэнцефалит, энцефалит, крово-

течения в желудочно-кишечном тракте, пневмония, миокардит.

Инфекция, обусловленная CTFV, встречается у лесных обитателей горRocky Mountain, на высоте от 4000 до 10000 футов, в Северной Америке. Антитела к виру-

су были обнаружены у зайцев Ontario,в а выделение вируса регистрировалось в

Long Island и New York. Eyach virus широко распространен в Европе. Изоляты BAV

были выделены в 1987 г из цереброспинальной жидкости и сыворотки крови паци-

ентов с признаками лихорадки и энцефалита. Индонезийские изоляты были выделе-

ны исключительно от москитов. Хотя клиническое проявление инфекций, вызван-

ных BAV и KDV, документировано не так хорошо, как для CTFV, предполагается широкое их распространение в странах Юго-Восточной Азии.

Критерии подразделения на виды внутри семейства. Также как и в отноше-

нии представителей других родов семейства, определяющим критерием для класси-

фикации по видам является доказательство способности к реассортации генетиче-

ских сегментов при коинфекции, с образованием жизнеспособного потомства. Од432

нако на данный момент недостаточно сведений о реассортации между изолятами, и

в основе методов идентификации отдельных изолятов лежат серологические иссле-

дования в совокупности с анализом нуклеотидных или аминокислотных сиквенсов.

Представители отдельных видов данного рода могут быть идентифицированы по следующим признакам:

1) способность к обмену генетическим материалом путем реассортации сег-

ментов генома во время коинфекции, с образованием жизнеспособных вирионов;

2)результаты анализов на основе методов перекрестной гибридизации(northern или dot-blot, с зондами из РНК или кДНК);

3)серологический анализ с использованием реакции связывания комплемента

(РСК) и реакции нейтрализации. Изоляты CTFV проявляют высокий уровень пере-

крестной нейтрализации. Перекрестная нейтрализация между видами CTFV и EYAV

(подгруппа А) детектируется только в РСК. Вирусы подгрупп А и В не проявляют значимой перекрестной активности;

4) сравнительный анализ сиквенсов (сегментов от 7 до 12). Внутри одного ви-

да проявляется высокий уровень сходства сиквенсов по консервативным сегментам,

например, по сегменту 12 вариабельность не превышает 11 %; 5) сравнительный анализ аминокислотных сиквенсов продуктов сегмента12,

показывает вариабельность между видами более 50 %;

6) сравнительный анализ электрофоретипа вAGE. Внутри одного вида про-

филь электрофоретипа достаточно стабилен. Однако в случае делеций или вставок

(в сегментах 7 и 9) электрофоретип может изменяться; 7) сравнительный анализ консервативных концевых последовательностей

РНК. Данные последовательности проявляют консервативность на уровне вида. Си-

квенс 3'-концов некоторых сегментов может быть консервативным уразных видов

(например, BAV и KDV);

8) анализ G + C состава вирусной РНК. Виды, принадлежащие одной под-

группе, имеют сходный G + C состав. Сегменты РНК видов CTFV и EYAV, принад-

лежащих подгруппе А, имеют состав G + C от 48 % до 52 %, тогда как сегменты ви-

дов BAV и KDV, принадлежащих группу В, имеют G + C состав от 37 % до 39 %. 433

ного протеина (VP7).

Критерии подразделения на виды внутри рода. Как и в отношении предста-

вителей других родов семейства, определяющим критерием для классификации по видам является доказательство способности к реассортации генетических сегментов при коинфекции, с образованием жизнеспособного потомства. Однако на данный момент для аквареовирусов таких данных нет. Поэтому, наиболее употребительны-

ми являются методы на основе перекрестной РНК-гибридизации и серологические тесты.

Представители отдельных видов данного рода могут быть идентифицированы по следующим признакам:

1)способность к обмену генетическим материалом путем реассортации -сег ментов генома во время коинфекции, продуцируя жизнеспособные вирионы;

2)результаты анализов на основе методов перекрестной гибридизации(Northern или dot-blot, с зондами из РНК или кДНК). Например, при гибридизации по

Northern, при условиях (stringency), не дающих более17 ошибочных спариваний,

будет наблюдаться только внутривидовая гибридизация; 3) сравнительный анализ сиквенсов сегментов. Например, геномный сегмент

10, кодирующий мажерный капсидный протеинVP7, проявляет вариабельность по нуклеотидному составу более 45 % между вирусами разных видов. По аминокис-

лотному составу (VP7) вариабельность достигает 64 %;

4) серологический анализ на основе реакции нейтрализации (или других мето-

дов) с использованием полиили моноклональных антител, специфичных консерва-

тивным антигенам. Результаты перекрестной нейтрализации совпадают с результа-

тами перекрестной гибридизации;

5) сравнительный анализ электрофоретипа вAGE. Внутри одного вида про-

филь электрофоретипа достаточно стабилен. Могут наблюдаться сходные электро-

форетипы отдельных сегментов разных видов. Однако в случае делеций или вставок

(в сегментах 7 и 9) электрофоретип может изменяться; 6) сравнительный анализ консервативных концевых последовательностей сег-

ментов геномной РНК. Некоторые близкородственные виды имеют идентичные

436

концевые последовательности у некоторых сегментов.

На основе перекрестной РНК-гибридизации выделено6 видов, и пять видов предполагаемых.

Род: Cypovirus

Типовой вид: Cypovirus J (CPV-1).

Характерные особенности. Вирусы данного рода инфицируют и патогенны только для членистоногих определенных видов. К культурам клеток адаптировать не удалось. При температуре выше 35 °С репликация вируса прекращается. Распро-

странение вируса происходит в составе полиэдров, попадающих в корм. Большинст-

во вирусов вызывают хронические болезни с поражением пищеварительного тракта,

нарушением развития личинок, но редко сопровождается их смертностью.

Диаметр частиц от 55 нм до 69 нм. Вирион имеет только одну капсидную обо-

лочку с поверхностными выступами(спайками). Геном представлен 10 сегментами dsRNA. Геном кодирует 5 протеинов. Для проникновения в клетку и инициации транскрипции не требуется модификации вириона, так как транскриптазные и кэпи-

рующие энзимы активны без модификации част, иц также сохраняют РНК-

полимеразную активность при разрушении(при многократном замораживании-

оттаивании) частицы. Вирусные частицы могут концентрироваться при участии ви-

русного протеина, формируя полиэдры в цитоплазме клеток. Для идентификации видов используются методы анализа электрофоретипа геномныхdsRNA структур-

ных и полиэдринового протеинов. Изоляты с одинаковым электрофоретипом РНК проявляют высокий уровень антигенной перекрестной реактивности по данным про-

теинам.

В настоящее время официально зарегистрировано14 основных и 2 предпола-

гаемых вида.

Род: Fijivirus

Типовой вид: Fiji disease virus (FDV).

Характерные особенности. Инфицируют только насекомых(Nilaparvata lugens reovirus, NLRV) или (Fijiviruses) еще и растения определенных видов семей-

ства Graminae или Liliaceae. Фидживирусы широко распространены в природе, но

437

не обнаружены в Северной Америке, об их обнаружении в Африке и Индии точных данных нет.

Вирионы имеют икосаэдральную симметрию, с двумя оболочками, больше округлой, чем угловатой, формы (d от 65 нм до 70 нм), с короткими отростками

(спайками типа А). Геном представлен 10 сегментами dsRNA. Идентифицировано 6

вирусных протеинов.

Официально идентифицировано 8 видов фидживирусов, разделенных на пять групп (по анализу нуклеотидных и аминокислотных сиквенсов).

Род: Phytoreovirus

Типовой вид: Wound tumor virus (WTV).

Характерные особенности. Основными хозяевами являются растения. Меж-

ду восприимчивыми растениями вирусы распространяются цикадами, в которых ви-

рус также репродуцируется и передается трансовариально. Механической передачи вирусов не отмечается.

Вирионы икосаэдральной симметрии, имеют угловатую поверхность(d 70 нм). Геном представлен 12 сегментами dsRNA. Идентифицировано 7 структур-

ных вирусных протеинов. Антигенного родства по внешним капсидным протеинам у вирусов разных видов нет.

Всего официально идентифицировано 3 вида вирусов и 1 вид предполагаемый.

Род: Oryzavirus

Типовой вид: Rice ragged stunt virus (RRSV).

Характерные особенности. Основными хозяевами являются растения(се-

мейства Graminae). Между восприимчивыми растениями вирусы распространяются определенными видами насекомых, в которых вирус также репродуцируется(тран-

совариально не передается). Механической передачи вирусов не отмечается. Рас-

пространены в странах Юго-Восточной Азии и Дальнего Востока, в Тайване; нано-

сят значительный ущерб в рисоводстве (потери урожая от 20 % до 100 %).

Интактные вирионы икосаэдральной симметрии, с 2 белковыми оболочками

(диаметр от 75 нм до 80 нм), имеют выросты (спайки) типов А и В. Геном представ-

лен 10 сегментами dsRNA. Идентифицировано 5 структурных и 3 неструктурных

438

вирусных протеина. Выражено значительное антигенное родство по некоторым про-

теинам обоих видов вирусов.

Всего официально идентифицировано 2 вида вирусов.

Неклассифицированные вирусы семейства.

Описано 7 видов вирусов, выделенных от насекомых, 3 вида – от ракообраз-

ных и 1 вид – от паукообразных.

14.2.2 Семейство: Birnaviridae

Род: Aquabirnavirus, Avibirnavirus, Entomobirnavirus

Характеристика вириона. Вирион безоболочечный, икосаэдральной симмет-

рии (диаметр 60 нм) с одним протеиновым чехлом. Капсид образован 260 тример-

ными субъединицами (решетка Т13), внутренний слой состоит из200 тримерных субъединиц, производных VP3 и VP4 по внутренним пятиосным вершинам.

Mr (вирион) 55 ´ 106, плавучая плотность в CsCl 1,33 г/см3 (1,30 г/см3 – де-

фектные интерферирующие частицы).

Вирусные частицы стабильны при рН от 3 до 9, нагревании до 60 °С в течение

1 часа, устойчивы к воздействию эфира и 1 %-го додецилсульфата натрия при 20 °С,

рН 7,5 в течение 30 минут.

Геном представлен 2 сегментами двуспиральной РНК (от 9 % до 10 % массы вириона). Размер большего сегмента А вируса инфекционного некроза поджелудоч-

ной железы рыб (IPNV) варьирует в пределах 2962 bр (штамм SP), 3092 bр (штамм

Jasper) и 3104 bр (штаммы N1 и DRT). Размер сегмента В варьирует от2731 bр

(штамм DRT) до 2784 bр (штамм Jasper). У вируса инфекционной бурсальной болез-

ни (IBDV) размер сегмента А составляет от3063 bр (штамм Farragher) до 3261 bр

(штамм Р2). Сегмент В данного вируса имеет размер от2715 bр (штамм UK661) до

2922 bр (штамм QC-2). У Drosophila X virus (DXV) сегмент А имеет длину 3360 bр.

Несмотря на различия в размере сегмента А среди членов одного рода, продуктом кодирующего участка генома является полипротеин из972 (IPNV), 1012 (IBDV) и 1032 (DXV) аминокислотных остатков. Также репортерный участок кодирует ви439