1.2. Реакция с дифениламином.

Дезоксирибонуклеиновую кислоту обнаруживают по ее реакции с дифениламином. В пробирку переносят немного осадка ДНК и растворяют его в 1-2 мл 0,4%-ного раствора гидроксида натрия. К раствору добавляют равный объем раствора дифениламина и смесь нагревают в кипящей водяной бане около 10-15 мин. Появляется синее окрашивание раствора.

2.Хромопротеины.

Представителем хромопротеинов является белок эритроцитов крови млекопитающих гемоглобин. Его белковой частью глобин, а небелковой – гем (протопорфирин, пиррольные кольца которого связаны с атомом железа).

2.1. Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина.

В пробирку наливают 0,5 мл сильно разведенной крови и кипятят несколько минут, затем охлаждют. Добавляют 0,5 мл раствора бензидина и несколько капель 3% раствора пероксида водорода. Появляется зеленая, переходящая в синюю окраска. При действии на гемоглобин концентрированной уксусной кислоты гем переходит в гемин, который и катализирует окисление бензидина пероксидом водорода.

Бензидиновая проба применяется при клинических и судебно-медицинских исследованиях для обнаружения минимальных количеств крови в биологических объектах.

Контрольные вопросы

1. Перечислите функции хромопротеинов в организме.

2. Укажите строение белковой части гемоглобина.

3. Почему гемоглобин зародыша и ребенка обладает разным сродством к кислороду?

4. После пожара обнаружен труп. Каким простым способом можно определить, погиб ли человек во время пожара или он умер до пожара?

5. Охарактеризуйте химический состав нуклеопротеинов и их функции в организме.

6. Что лучше растворяется в воде: нуклеиновые кислоты или нуклеопротеины? Почему?

Работа 4. Ферменты

1. Открытие пероксидазы в картофеле.

Картофель натирают на терке. Небольшое его количество переносят в пробирку, добавляют 1 мл 1%-ного раствора пирогаллола и 2 капли 2%-ного раствора пероксида водорода. При стоянии выпадает желто-бурый осадок пурпурогаллина:

Многократное дегидрирование (окисление) пирогаллола и ряда промежуточных продуктов до образования пурпурогаллина происходит с участием пероксидазы, передающей атомы водорода с субстрата на пероксид водорода.

2. Открытие пепсина в желудочном соке.

В пробирку наливают 5 мл молочноацетатной смеси и помещают ее в термостат при температуре 25°С. После того как пробирка прогреется до указанной температуры, в нее добавляют 0,1 мл желудочного сока и перемешивают. Следят за моментом появления на стенке пробирки первых сгустков казеина. Этот момент свидетельствует о завершении реакции перехода растворимого казеиногена в нерастворимый казеин под действием протеолитического фермента — пепсина.

3. Гидролиз крахмала α-амилазой слюны

Рот ополаскивают 2—3 раза водой для удаления остатков пищи. Отмеряют 50 мл дистиллированной воды и ополаскивают ею рот в течение 3-5 мин в несколько приемов. Собранную жидкость фильтруют через вату и фильтрат используют для работы.

Готовят 2 водяные бани с температурой 37-40 и 100°С. В пробирки наливают растворы в соответствии с таблицей. Помещают пронумерованные пробирки в бани. Через каждые 2 минуты наносят на стеклянную пластинку стеклянной палочкой каплю раствора Люголя, а затем чистой палочкой - каплю раствора из пробирки. Отмечают окрашивание, возникшее при смешивании двух капель. Опыт продолжают 10-15 минут. Результаты опыта и выводы о протекании гидролиза (полный, частичный, не протекает) заносят таблицу (таблица 1).

Таблица 1. Результаты гидролиза крахмала.

№	Содержимое пробирки	Температура, °С	Время, мин.	Цвет в реакции с йодом	Наличие гидролиза
1	3 мл р-ра крахмала + 2 мл 10% H2SO4	37	2 4 …
2	3 мл р-ра крахмала + 2 мл 10% H2SO4	100	2 4 …
3	3 мл р-ра крахмала + 3 мл р-ра амилазы	37	2 4 …
4	3 мл р-ра крахмала + 3 мл р-ра амилазы + 1 мл 2 н НС1	37	2 4 …
5	3 мл р-ра крахмала + 3 мл прокипяченного р-ра амилазы	37	2 4 …

Схема гидролиза крахмала α-амилазой слюны:

(С6Н10О5)n крахмал		(С6Н10О5)m амилодекстрины
	(С6Н10О5)k эритродекстрины
(С6Н10О5)l ахродекстрины		(С6Н10О5)x мальтодекстрины
	С12Н22О22 мальтоза