Добавил:
Nemo_Nemorino
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Генная инженерия / Семинар 1 Полимеразная цепная реакция.pptx
X
- •Полимеразная цепная реакция как инструмент современной
- •Кари Б. Муллис (Kary B. Mullis) – изобретатель полимеразной цепной реакции (ПЦР)
- •Полимеразная цепная реакция: 1-й цикл
- •Полимеразная цепная реакция: 2-й цикл
- •Изменение температуры в типичном трехступенчатом цикле ПЦР
- •Полный температурный профиль полимеразной цепной реакции (25 циклов)
- •ПЦР как молекулярная копировальная машина («молекулярный ксерокс»)
- •Типичный результат амплификации ДНК с помощью ПЦР
- •Современный амплификатор
- •Компоненты, необходимые для проведения ПЦР
- •Структура и свойства Taq-ДНК- полимеразы
- •Критические характеристики ПЦР, наиболее важные для исследователя
- •Критические характеристики ПЦР:
- •ПЦР с «горячим стартом»
- •Влияние концентрации праймеров на специфичность ПЦР
- •Влияние температуры отжига праймеров на специфичность ПЦР
- •Точность синтеза ДНК некоторыми термостабильными ДНК-полимеразами
- •Методы ПЦР
- •Асимметричная ПЦР
- •Множественная ПЦР (Multiplex PCR) – одновременная амплификация нескольких ампликонов в одной пробирке
- •«Гнездовая» ПЦР (Nested PCR)
- •Амплификация больших участков ДНК с высокой точностью (Long PCR, LA PCR)
- •Иммуно-ПЦР (IPCR)
- •Случайная амплификация полиморфных последовательностей (метод RAPD)
- •ПЦР in situ: амплификация участков ДНК или РНК в интактных клетках
- •Недостатки ПЦР, проводимой в обычном формате
- •Обычная ПЦР не позволяет определять количество матричной ДНК или РНК в пробе
- •Количественная ПЦР ПЦР в реальном времени Real-time PCR
- •Устройство капиллярного амплификатора LightCycler
- •Российские производители амплификаторов для проведения ПЦР в
- •Принцип действия зондов TaqMan
- •Принцип действия зондов, основанных на резонансном переносе энергии флуоресценции (FRET - fluorescence resonance
- •Принцип действия зондов – молекулярных маяков (molecular beacon probes)
- •Праймеры, меченые флуорофорами, в ПЦР в реальном времени
- •Мониторинг накопления продуктов ПЦР в реальном времени протекания реакции
- •Калибровочная кривая для определения количества ДНК-матрицы в пробе
- •Цифровая ПЦР (Digital PCR) (на основе эмульсионной ПЦР)
- •Эмульсионная (эм)ПЦР на мирочастицах с
- •Вторая стратегия получения полимеразных колоний в секвенаторах второго поколения
- •Стратегии получения полимеразных колоний в секвенаторах второго поколения
- •ПЦР в прикладных исследованиях
- •Что такое «ДНК-диагностика»?
- •Геном человека в связи его болезнями
- •ДНК-полиморфизмы – основа генетической индивидуальности человека
- •Поиск SNP в генах человека
- •Аллель-специфическая ПЦР
- •Выявление мутации FV Leiden в геноме человека с использованием аллель-специфической ПЦР
- •ПЦР в реальном времени: принцип действия системы TaqMan с аллель-специфическими зондами
- •Выявление мутации FV Leiden c помощью ПЦР в реальном времени и аллель-специфических зондов
- •Будущее ДНК-диагностики – это высокопроизводительное параллельное секвенирование ДНК
Полимеразная цепная реакция как инструмент современной
биотехнологии
Л.И. Патрушев
Институт биоорганической химии
им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, г. Москва
Кари Б. Муллис (Kary B. Mullis) – изобретатель полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Американский биохимик 1944 г.р.
Патент - 1985 г., фирма Cetus Corp. California
Нобелевская премия по химии – 1993 г.
Полимеразная цепная реакция: 1-й цикл
Полимеразная цепная реакция: 2-й цикл
Изменение температуры в типичном трехступенчатом цикле ПЦР
Полный температурный профиль полимеразной цепной реакции (25 циклов)
a – начальная денатурация ДНК
b – собственно реакция
с – достройка цепей ДНК
d – хранение 4°С
Соседние файлы в папке Генная инженерия