Отбор пептидов из библиотеки методом фагового дисплея
Бактериальный дисплей (E. coli)
Разработан также для грамположительных бактерий и дрожжей
Рибосомн
ый
дисплей
мРНК-дисплей
Новый цикл
Р - пуромицин
Соединение строящегося полипептида с мРНК
Пуромицин
ДНК- линкер
мРНК
Пуромицин
Пуромицин проникает в пептидил- трансферазный центр рибосомы и соединяется с синтезируемым белком
Белок
Получение экстремозима (субтилизин S41) методом направленной эволюции
Остаточная активность
Комнатная |
Высокая т- |
т-ра |
ра |
|
7 замен АК |
2 замены АК
Исходно
взят
субтилизин
антарктиче
ской
бактерии
(психрофил
)Исходные клоны (дикий тип)
Ar - оставшаяся активность Ai - начальная активность
Исследование белок- белковых взаимодействий в дигибридной системе
Принцип работы дрожжевой дигибридной системы
Промотор Энхансер Нормальная активация
Дигибридный скрининг
Ген-репортер
Дигибридная активация
BD – ДНК-связывающий домен AD – активирующий домен
X – белок-”приманка” (“bait”) Y – белок-”добыча” (“prеy”) Basal complex – базальный комплекс, содержит РНК- полимеразу II и основные факторы транскрипции
Результат скрещивания клеток дрожжей в дигибридной системе
n-Гибридные дрожжевые системы
AD
X Y AD
DBD |
Дигибридная |
DBD |
Моногибридная |
|
|
AD
AD
X Y
Тригибридные
DBD |
DBD |