Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии

и становится доступной для агглютинирующего действия неполных антител только после обработки протеолитическими ферментами.

Ген En редкий, известно лишь несколько несвязанных родством индивидов,

имеющих генотип En / En [75, 76, 111, 116, 171, 179, 192, 244, 255].

Mk

Символ Mk предложен в 1964 г. Heiken и соавт. [92] для обозначения молчащего аллеля в локусе MN. В присутствии гена Mk синтеза антигенов М, N, S и s не происходит. Найдены лица гетеро- и гомозиготные по гену M k (Hodson и соавт. [94], Metaxasисоавт. [159,162,163],Okuboисоавт.[178],Tokunagaисоавт.[248]).

На эритроцитах гомозигот Mk / Mk гликофориныAи B отсутствуют. В серологических реакциях эритроциты M k ведут себя так же, как и эритроциты En(a −) (Metaxas и соавт. [159], Norling и соавт. [176]).

Присутствие редких генов Mk и En может быть причиной ошибок при экспертизе спорного родства. Как правило, супружеская пара M × N, не может иметь детей M и N, а супружеская пара S × s не может иметь детей S и s, поскольку генотип лиц, имеющих фенотип М, N, S и s, расценивается как M / M, N / N, S / S и s / s. Присутствие молчащего гена у одного из родителей может сопровождаться феноменом, именуемым судебными медиками как противоположная гомозиготность. РодителиM / − ×N / N могутиметьребенкаN,ародителиS/ −×s / s –ребенкаs,что может послужить основанием для исключения родства родителя М и S.

Все лица M k и En(a −) были соматически здоровы, каких-либо аномалий эритроцитов у них не выявлено (Walker и соавт. [255]).

Причиной возникновения гена Mk является сочетанная делеция экзонов 2–7 гена GYPA, экзонов 1–6 гена GYPB и экзона 1 гена GYPE (Huang и соавт. [97], Reid [199]).

Обозначение анти-En a является собирательным и распространяется на антитела, направленные к различным участкам гликофорина А. В зависимости от устойчивости антигенного субстрата к действию трипсина и фицина антитела анти-En a подразделяют на анти-En aTS (трипсинчувствительные), анти-En aFS (фицинчувствительные) и анти-En aFR (фицинрезистентные).

Аллоиммунные анти-En a-антитела описаны как причина посттрансфузионной гемолитической реакции (Postoway и соавт. [189]). Аутоантитела анти-En a обнаруживали у больных аутоиммунной гемолитической анемией.

GPВ-дефицитные фенотипы

U −

Антиген U описали в 1953 г. Wiener и соавт. [262], обнаружившие соответствующие анти-U-антитела. Обозначение U (universal) было дано этому антигену из-за его универсальной встречаемости среди представителей разных рас. У 1 % негроидов этот антиген отсутствовал (Hoekstra и соавт. [95], Lowe и соавт. [152], Wiener и соавт. [262]).

461

В1954 г. Wiener и соавт. [262] нашли 2-й образец антител анти-U. Серологические реакции показывали, что антиген, открываемый указанными антителами, ассоциирован с системой MNS. Все U-отрицательные лица не имели также антигенов S и s. Стало очевидным, что фактор U – еще один серологический продукт локуса Ss (Wiener и соавт. [262]).

Антитела анти-U имеют, как правило, иммунное происхождение и считаются клинически значимыми, поскольку были причиной как трансфузионных реакций, так и ГБН, в ряде случаев с летальным исходом (Giblett и соавт. [81], Pillay [184], Rothman и соавт. [211, 212], Smith и соавт. [231], Taliano [242], Wiener и соавт. [262]).

Вотличие от антител к антигенам M, N, S и s анти-U-антитела сохраняют свою активность и специфичность в тестах с энзимированными эритроцитами. Эффекта дозы у антигена U не отмечено (Issitt и соавт. [117]).

Лица, не имеющие антигена U (все фенотипы S −s −), встречаются почти исключительно в негроидных популяциях (Allen и соавт. [12], Francis и соавт. [71], Hoekstra и соавт. [95], Reid и соавт. [208], Sanger и соавт. [222], Wiener и соавт. [261]). Фенотип S −s −U − среди европеоидов регистрируют крайне редко (Moores

исоавт. [168], Sondag-Thull и соавт. [232]). Примерно 42 % негроидов S −s − со-

держат слабый антиген U (U var), обнаруживаемый адсорбцией – элюцией (Allen и

соавт. [12], Francis и соавт. [71], Reid и соавт. [208], Storry и соавт. [239]).

Проблема поиска совместимой крови для реципиентов с антителами анти-U актуальна для стран, где диаспора негроидов значительна по численности. Так, в США наиболее частыми запросами в регистр редких доноров Американского Красного Креста являются заявки на U-отрицательную кровь. Например, с сентября 1995 г. по август 1996 г. запросов на U-отрицательную кровь было почти в 4 раза больше, чем заявок на эритроциты редких фенотипов Vel − и Yt(a −) – 49 и 13 соответственно. При лечении ГБН, обусловленной антителами анти-U, из-за редкой встречаемости U-отрицательных доноров в США прибегают к обменному переливанию U-положительной крови. Для получения удовлетворительного клинического эффекта достаточно 2–4 доз донорской крови (Reid и соавт. [208]).

При сравнительном изучении образцов анти-U-антител выявлена их гетерогенность. Для обозначения вариантов антигена U и анти-U-антител предложены обозначения U A, U B, U X U Z (Issitt, Anstee [113], Mentor и соавт. [158], Read и

соавт. [193], Storry и соавт. [238]). Результаты дальнейших исследований показали, что перечисленные антигены и соответственно антитела отличаются друг от друга по количественным, но не качественными параметрам (Issitt [112]).

Помимо аллоиммунных, описаны также аутоантитела анти-U (Bell и со-

авт. [24], Chiofolo и соавт. [42], Kessey и соавт. [129], Marsh и соавт. [155], Nugent и соавт. [177], Roush и соавт. [214], Sacher и соавт. [216]).

Эритроциты S −s −U − лишены гликофорина В, клетки S −s −U var + содержат его в следовых количествах (Blanchard [26]).

462

Фенотип S −s −U − является следствием делеции экзонов 2–6 GYPB и 1 GYPE

(Huang и соавт. [101], Reid, Lomas-Francis [202]). Возникновение фенотипа

S −s −U var + связывают с эффектом GYPB-подобного гена, экзон 2 которого содержит кодон для антигена Не (MNS6) (Huang и соавт. [99]). Этот фенотип обозначают как GP.He(P2) (см. Гибридные гликофорины).

Варианты антигенов М и N

Специфичность и экспрессия антигенов М и N обусловлена последовательностью аминокислот в пептидных цепях гликофорина А, а также характером гликозилирования 5 терминальных аминокислотных остатков (Dahr и соавт. [52, 54, 55]).

Mg (Gilfeather)

Впервые редкий антиген M g и антитела к нему описали Allen и соавт. в 1958 г. [11]. Эритроциты больного по фамилии Gilfeather агглютинировались сывороткой крови одного из доноров. Позднее лица, имеющие антиген M g, были найдены среди представителей итальянской диаспоры в Швейцарии (обследовано 6530 доноров) и Бельгии (6300 обследованных) (Metaxas и соавт. [160, 161]). Интересно, что 3 из 4 итальянцев M g + были выходцами с острова Сицилия (Brocteur [34]). Двоих человек M g + выявили среди 9000 жителей Индии (Joshi и соавт. [123], двоих среди американцев (Winter и соавт. [264]). Несмотря на исключительную редкость гена Mg, найден 1 человек, гомозигот-

ный по этому гену – Mg / Mg (Issitt иAnstee [113]).

Специфичность антигена M g обусловлена валином в позиции 6 и метионином в позиции 8 гликофорина А. Экспрессию антигена обеспечивает гибридный гликофорин GPA N(1-4)-GPB(5)-GPA(6-13). Характер мутации в контролирующем гене GYP(AN-B-A) окончательно не расшифрован (Furthmayr и соавт. [74], Green и соавт. [86], Reid, Lomas-Francis [202]).

Антитела анти-M и анти-N как ксеногенные (кроличьи), так и аллогенные (полученные от человека) с антигеном M g не реагируют.

Эритроциты M g + несут еще 1 редко встречающийся антиген – DANE (MNS32). В противоположность исключительной редкости антигена M g естественные антитела к нему встречаются очень часто: примерно в 1 случае на 70 образцов сывороток крови здоровых лиц. Большинство антител представляет собой IgM и непосредственно агглютинирует эритроциты в солевой среде. Анти-M g-антитела, относящиеся к IgG, проявляли активность при 37  оС в непрямом антиглобулиновом тесте. Трансфузионных реакций и ГБН, обусловленных анти-M g-антителами, не описано. Антитела анти-M g были получены также иммунизацией кроликов (Ikin [108]).

Как и в случаях с En и M k , присутствие редкого гена M g может привести к ошибкам при экспертизе спорного отцовства. У родителей Mg / M × N / N возможно рождение детей с генотипом M g / N. Эритроциты таких лиц имеют группу

463

M −N +. Поскольку генотипы лиц с группами M + N − и M −N + судебные медики обычно интерпретируют как M / M и N / N, отцовство может быть ошибочно исключено (Прокоп, Гёллер [7]).

Mc (Common)

Несмотря на то что антиген M c внесен в номенклатуру ISBT под индексом MNS8, специфические антитела, распознающие его, не выделены. Этот антиген идентифицируют как промежуточный между M и N, поскольку он реагирует с определенными образцами антител анти-М и анти-N.

Mc как редкий аллель M и N впервые обнаружен в 1953 г. у членов английской семьи. Эритроциты M c + агглютинировались большинством сывороток анти-М, в то время как с сыворотками анти-N реагировали редко (Figur и соавт. [70]). В результате посемейных исследований идентифицированы гаплоти-

пы Mcs и McS (Daniels [56]).

ХарактерреагированияэритроцитовM c +всерологическихтестахудалосьобъяс-

нитьв1981 г.McDougallисоавт.[156]иFurrthmayrисоавт.[74].Исследователями была расшифрована последовательность аминокислот в терминальной части гликофорина А лиц M c +. Оказалось, что в положении 1 присутствует серин (формирующий М-антиген), в то время как позицию 5 занимает глютаминовая кислота (формирующая N-антиген). Антиген М с присущ особому гликофорину – GPA M(1-4)- GPB(5)-GPA(6-13),егосинтезконтролируетгибридныйгенGYP(A-B-A).

Лица с фенотипом M c выявлены только среди европеоидов. Поскольку специфические анти-M c-антитела отсутствуют, соответственно нет данных о частоте этого антигена у европеоидов и представителей других рас.

He (Henshaw)

Антиген получил свое обозначение по имени мужчины, у которого он был впервые обнаружен, – Henshaw. Антитела анти-He были найдены как дополнительный компонент в иммунной кроличьей сыворотке анти-М. Позднее были получены моноспецифические сыворотки анти-He иммунизацией кроликов эритроцитами Henshaw (Ikin и соавт. [109], MacDonald и соавт. [153]).

Marsh и соавт. [155] описали анти-He-антитела аллогенного происхождения. Получено также несколько образцов моноклональных анти-He-антител (Reid и

соавт. [201], Rouger и соавт. [213]).

Антиген He выявляли с частотой 2,0–3,08 % почти исключительно в негроидных популяциях (Nijenhuis и соавт. [175]). Ген He в разных семьях был ассоциирован с разными гаплотипами: MS, Ms, Ns, однако в пределах одной семьи сцепление гена He наблюдали с одним и тем же гаплотипом. Антиген Не антитетичен по отношению к антигену ′N′ (MNS30), имеющемуся почти у всех лиц

S + и s + (Greenwalt [87]).

Антиген Не присутствует у 23–25 % лиц (исключительно негроидной расы), имеющих редкий фенотип S −s −U var + (Francis и соавт. [71]). Эритроциты таких

464

лиц содержат пониженное количество гликофорина В. Данных о клинической значимости антител анти-Не нет.

Вещество Не формируется под действием варианта гена GYPB, в котором короткий сегмент, включающий часть экзона 2 заменен гомологичным участком гена GYPA (Huang и соавт. [99]) (см. Гибридные гликофорины).

Ме

В 1961 г. Wiener и Rosenfield [260], изучая сыворотку, полученную от иммунизированного кролика, обнаружили, что, помимо M-положительных эритроцитов, она агглютинировала некоторые образцы N +. Последующие исследования показали, что эритроциты М −, реагирующие с антителами сыворотки содержали антиген He. Антитела анти-М и анти-Не не удавалось разделить перекрестной адсорбцией. Позднее Levene и соавт. [143] нашли анти-М- и анти-М е-антитела, которые могли быть разделены адсорбцией эритроцитами М + Не − и М −Не +.

Биохимические исследования позволили объяснить результаты серологических тестов. Антиген Не является продуктом аллелей S и s. Антиген М на гликофорине А детерминирован глицином в позиции 5. Вариант Ssсиалогликопротеина, несущий антиген Не, детерминирован триптофаном в позиции 1. Моноклональные антитела анти-М, реагирующие с эритроцитами М −Не +, распознают глицин в положении 1. Некоторые образцы этих антител способны выявить глициновый остаток на гликофорине В в позиции 5 (Dahr и соавт. [52, 54, 55]). Фенотипически это выражается наличием антигена Не.

ENEV

Антитела, открывающие часто встречающийся антиген ENEV, описаны Lomas-Francis и соавт. [150] в 2005 г. Они найдены у больного с редким фенотипом MNS: −45. Молекулярно-генетическими исследованиями установлено, что обладатель антител был гомозиготным по точковой мутации, которая привела к замене валина на глицин в положении 81 внутри цепи гликофорина А. Данных о клиническом значении антител анти-ENEV нет.

MNTD

Антитела к редкому антигену MNTD выявлены в 2006 г. Uchikawa и соавт. [250] у здоровых лиц – японских доноров. Среди указанного контингента эти антитела встречались с частотой 0,02 % и, по-видимому, имели естественное происхождение. Молекулярно-генетическими исследованиями было показано, что лица MNTD + являются гетерозиготами по точковой мутации внутри гена GYPA. Последняя приводит к замене треонина на аргинин в положении 36 внутри цепи гликофорина А.

465

Подсистема Мильтенбергер

Подсистема Мильтенбергер представляет собой серию редких антигенов и фенотипов, ассоциированных с антигенами системы MNS и друг с другом. Антитела, реагирующие с антигенами подсистемы, иногда дают пере-

крестные реакции (Chandanyingyong и соавт. [36–38], Giles и соавт. [84]).

Систематизация антигенов Мильтенбергер начата в 1966 г. с выделения первых четырех классов антигенов, вошедших в указанную подсистему (Cleghorn [44]). В последующие десятилетия идентифицировано еще 7 классов подсистемы

(Akane и соавт. [10], Anstee и соавт. [16], Blackall и соавт. [25], Blanchard и соавт. [27], Broadberry и соавт. [32, 33], Chandanayingyong и соавт. [36– 38], Crossland и соавт. [51], Dahr [53], Giles и соавт. [84], Johe и соавт. [121], Langley и соавт. [141], Skov и соавт. [229], Vengelen-Tyler и соавт. [254], Webb и соавт. [258]).

Редкие антигены, входящие в подсистему, присутствовали преимущественно у монголоидов (Akane и соавт. [10], Baldwin и соавт. [19], Judd и соавт. [125], Konugres и соавт. [131], Kornstad и соавт. [132], Lewis и соавт. [146], Lin и соавт. [147], Lin-Chu и соавт. [148], Metaxas-Buhler и соавт. [163], Nguen Thi Huingh и соавт. [174]).

Выделение классов в подсистеме Мильтенбергер основывалось на различиях, улавливаемых серологическими методами, другие методы исследования в те годы не применяли. В настоящее время ряд специалистов считают способ обозначения антигенов Мильтенбергер устаревшим и не находят целесообразным выделение в ней новых классов (Dahr [53], Reid и соавт. [209], Tippett и соавт. [247]). Предложен другой способ обозначения гликофоринов: после аббревиатуры GP пишут сокращенное имя первого пробанда (табл. 6.6). Например, старое обозначение Mi.III пишут как GP.Mur, обозначение GP(B-A-B)Mur соответствует варианту гликофорина, обозначение GYP(B-A-B)Mur – варианту гена, контролирующего фенотипические проявления (Reid и соавт. [209]).

Гибридные гликофорины и ассоциированныес ними антигены

В 1978 г. Anstee и соавт. [17], изучая серологические свойства антигена GP.Hil (Mi.V), предположили, что он является фенотипическим проявлением гена, образовавшегося в результате кроссинговера между GYPA и GYPB. При этом, как полагали авторы, образуются 2 новых гибридных аллеля: GYP(A-B) и GYP(B-A), контролирующих синтез реципрокных гликофоринов, – GP(A-B) и GP(B-A) соответственно.

Последующие серологические и молекулярно-генетические исследования, проведенные Huang и соавт. [97, 99, 101–107], подтвердили предположение указанных выше авторов. Гибридные гликофорины были обнаружены и подразделены на типы Lepore и анти-Lepore.

Иногда образуются более сложные гибридные гены: GYP(A-B-А) и GYP(B- A-В). Полагают, что такая рекомбинация является результатом повторного

466

кроссинговера (Huang и соавт. [102]). Новые последовательности приводят к заменам аминокислот в различных участках пептидных цепей гликофоринов, что соответственно сопровождается появлением новых антигенов и их сочетаний (табл. 6.6 и 6.7). Включение в структуру GYPB активных сайтов сплайсинга из GYPA делает возможной трансляцию псевдоэкзона ΨВ3 гена GYPB (Huang и соавт. [103], Reid, Lomas-Francis [202]). В других случаях рекомбинация способствует образованию стоп-кодонов, прерывающих считывание генетической информации. Фенотипически это проявляется в виде ослабленных антигенов и нулевых фенотипов, таких как M k и En(a −)UK.

Таблица 6.6

Гибридные гликофорины и ассоциированные с ними антигены системы MNS

467

468

Антигены GP(A-B) (группа Lepore)

Рекомбинантные А-В-гликофорины GP.Mur (Mi.III) и GP.Hil (Mi.V) содержат антигены Mur (MNS10) и Hil (MNS20), которые идентифицируются соответствующими антителами – анти-Mur и анти-Hil. Экспрессия антигенов M или N на эритроцитах Mur + и Hil + ослаблена, отсутствует антиген ′N′ (MNS30). В то же время выраженность антигена s повышена. Найдены варианты А-В-гликофорина (GP.Hil) с необычным антигеном S, выявляемым лишь некоторыми образцами антител. Позднее было установлено, что все несущие антиген S гибридные А-В-гликофорины экспрессируют еще один редкий антиген – TSEN (MNS33) (Reid и соавт. [204]). Молекулярногенетические исследования последних лет позволили подразделить ген

GYP (A-B) на аллели GYP (A-B) Hil и GYP (A-B) JL. Помимо гибридиза-

ции эти гены претерпели точковую мутацию в экзоне 4 с заменой треонина на метионин в положении 29 (Huang и соавт. [101], Reid и соавт. [204]). Аминокислотная замена в этом участке определяет специфичность антигенов S и s.

Гибридный гликофорин А-В несет также редкий антиген SAT  (MNS36), открытый в 1991 г. Daniels и соавт. [60]. Этот гликофорин обозначен GP (A-B) TK. В отличие от других гибридных А-В-гликофоринов, описанных выше, GP(A-B) TK не экспрессирует антигены S, s и U. Молекулярно-генетический анализ позволил установить, что контролирующий этот гликофорин ген образовался в результате слияния экзонов 1–4 GYPA и 5–6 GYPB и кроссинговера внутри интрона 4. Таким образом, антитела анти-SAT распознают вновь образовавшуюся последовательность аминокислот Ser-Glu-Pro-Ala-Pro-Val, кодируемую частью экзонов 4 GYPA и 5 GYPB. Возникновение указанной редкой антигенной детерминанты Daniels и соавт. [60] связывают также со вставкой в молекулу гликофорина А последовательностиAla-Pro-Val.

Другим проявлением гибридного гена GYP(A-B) является гликофорин-А- дефицитный фенотип En (a −). Он является результатом неполного кроссинговера между участком GYPA, кодирующим антиген М, и фрагментом GYPB, контролирующим экспрессию фактора S (Huang и соавт. [105, 107]). Некоторые образцы антител анти-М, распознающие серин в положении 1, реагируют с эри-

троцитами лиц En(a −)UK (Daniels [56]).

В отличие от GP(A-B) рекомбинантные гликофорины GP(B-A) несут другие антигены, которые отнесены в группу анти-Lepore [см. Антигены GP(B-A)].

Антигены GP(В-A-B)

Эритроциты, несущие гибридные гликофорины GP.Mur и GP.Bun, содержат антигены Mur, Hil, MUT, MINY и отличаются друг от друга по нали-

чию редкого антигена Hop (MNS26), открытого в 1977 г. Reid и Lomas-Francis [202]. Эритроциты, несущие GP.Bun, имеют фенотип Hop +, а эритроциты, несущие GP.Mur, – фенотип Hop–. Оба фенотипа ассоциированы с антигеном s.

469

Последний отличается от обычного антигена s, поскольку некоторые высокоактивные образцы антител анти-s не выявляют его на эритроцитах Mur +. Посемейные исследования показали, что гликофорин GP.Mur синтезируется при гаплотипах Ns и Ms, а гликофорин GP.Bun – только при гаплотипе Ms (Daniels [56], Reid, Lomas-Francis [202]).

Известны также 3 других гибридных В-А-В-гликофорина.

Первый из них, обозначенный как GP.Hop, отличается от гликофоринов GP.Mur и GP.Bun тем, что на нем отсутствует антиген Hil (MNS20), однако име-

ется TSEN (MNS33).

Второй гликофорин, получивший обозначение GP.HF, включает антигены

MUT (MNS35) и MINY (MNS34), в то время как факторы Mur (MNS10), Hut (MNS19), Hop (MNS26) и TSEN (MNS33) отсутствуют. Он ассоциирован с га-

плотипом Ms.

Третий редкий гликофорин – GP.Kip, найденный в Германии и Австралии, напоминает GP.Mur. Отличия проявляются в реакции с антителами анти-Нор

ианти-Nob: указанных антигенов эритроциты, несущие гликофорин GP.Kip, не содержат. Редкий (менее 0,01 %) антиген Nob (MNS27) был идентифицирован с помощью антител, выделенных из сывороток анти-Нор (Reid, LomasFrancis [202]).

Серологически определяемым продуктом некоторых гибридных генов GP(B- A-B) является антиген Не (Henshaw, MNS6), описанный выше. Гибридные гены GP(B-A-B), как полагают Reid и соавт. [203], возникают вследствие вставок фрагментов GYPA различной длины в ген GYPB (см. табл. 6.7).

Антитела анти-Mur нередко присутствуют в сыворотках анти-Mi a в качестве компонента, который может быть выделен адсорбцией эритроцитами Mi a + Mur −. В некоторых случаях эти антитела выявляли и как моноспецифические (Blackall и соавт. [25]). Они вызывали посттрансфузионные реакции

иГБН (Broadberry и соавт. [33]). В связи с этим в некоторых странах ЮгоВосточной Азии, где антиген Mur не является редким, эритроциты Mur + включены в скрининговые панели для выявления антител анти-Mur (Broadberry и

соавт. [33]).

Антигены GP(A-B-А)

DANE и ENDA

Гликофорин GP.Dane (Mi.IX) содержит антигены Mur (MNS10) и DANE (MNS32). Последний обнаружен Skov и соавт. в 1991 г. у членов четырех датских семей. Изучение молекулярной структуры антигена DANE показало, что небольшой фрагмент молекулы GPA заменен сегментом GPB, что, вероятно, явилось результатом кроссинговера небольших фрагментов GYPA и GYPB. Фрагмент GYPB, включающий псевдоэкзон ΨВ3, заменяет некоторые участки GYPA, при этом образуются 2 гибридных фрагмента внутри экзона 3.

470