Лабораторная работа Задание 1. Термолабильность ферментов

Приборы и реактивы: Штатив с пробирками, стакан со льдом, водяная баня, спиртовка, термометр, 0,5% р-р крахмала.

Ход работы: В 3 пробирки отмерить по 1 мл слюны. Первую пробирку поместить в кипящую водяную баню, вторую на лед, третью – в термостат при температуре 37º. Через 5 минут добавить в каждую по 2 мл 0,5% р-ра крахмала и оставить на 10 минут. Содержимое каждой пробирки разделить на 2 части и провести пробу на крахмал (Люголя) и на сахар (Троммера). Данные занести в таблицу:

№ пробирки	Субстрат	Температура	Проба с J	Реакция Троммера

Задание 2. Влияние рН на активность амилазы

О влиянии рН среды на активность фермента судят по изменению интенсивности окрашивания раствора крахмала с йодом. Для амилазы слюны оптимум рН=6,8, а в кислой и щелочной среде активность снижается.

Приборы и реактивы: Штатив с пробирками, термостат, буферные растворы, слюна, р-р крахмала, KCL, KJ.

Ход работы: В 3 пробирки внести по 3 мл буферного раствора с рН: 1.2, 6.3, 10.0. Добавить в каждую по 3 мл разведенной слюны и по 2 мл 0,5% крахмала. Смешать и инкубировать при 37ºС 10 минут. Подкислить содержимое 2-ой и 3-ей пробирок добавлением соответственно 1 и 2 мл соляной кислоты (реакция на крахмал положительна только в кислой среде) и провести пробу Люголя. Сравнить интенсивность распада крахмала в зависимости от рН и сделать вывод.

Результаты занести в таблицу:

№ пробирки	Субстрат	Среда, рН	Проба с J

Задание 3. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы.

О влиянии ингибиторов и активаторов на активность амилазы судят по степени гидролиза крахмала под влиянием фермента в присутствии NaCl и CuSO₄ .

Приборы и реактивы: Штатив с пробирками, термостат, дистиллированная вода, р-р NaCl , р-р CuSO₄ , р-р крахмала.

Ход работы: Готовят 3 пробирки. В первую наливают 2,5 мл воды, во вторую 2 мл воды и 0,5 мл раствора NaCl, в третью 2 мл воды и 0,5 мл раствора CuSO₄. Во все пробирки вносят по 2,5 мл раствора слюны, перемешивают и добавляют по 2,5 мл раствора крахмала, затем снова перемешивают и ставят в термостат при 38ºС. Через 5 минут добавить 5 капель раствора йода. Жидкость в первой пробирке окрашивается в красный или фиолетовый цвет, во второй – в красный или желтый, в третьей – в синий.

Полученные результаты свидетельствует о том, что активатором амилазы является NaCl (вторая пробирка), а ингибитором CuSO₄ (третья пробирка).

Результаты записать в таблицу

№ пробирки	Субстрат	Посторонние вещества	Проба с J

Задание 4. Специфичность действия ферментов

Приборы и реактивы: Штатив с пробирками. Водяная баня с термометром. Пипетки, разбавленная слюна, сахараза, крахмал 1%-ный раствор на 0,3% - ном растворе хлористого натрия. Сахароза, 2%-ный раствор. Реактив Фелинга.

Ход работы: Берут четыре пробирки, в пробирки №1 и №3 наливают по 4-5 мл раствора крахмала, а в пробирки №2 и №4 по 4-5 мл раствора сахарозы. Затем в пробирки №1 и №2 приливают по 2 мл разбавленной слюны, а в пробирки №3 и №4 по 2 мл раствора сахаразы. Содержимое каждой пробирки тщательно перемешивают. Пробирки помещают в водяную баню при 38ºС. Через 20 мин содержимое каждой пробирки делят на две части: с одной из них проводят реакцию Фелинга, с другой – пробу с йодом. Полученные результаты занести в таблицу по следующей форме:

№ пробирки	Субстрат	Фермент	Реакция Фелинга	Проба с йодом
			(положительная или отрицательная)
1	Крахмал	Амилаза
2	Сахароза	Амилаза
3	Крахмал	Сахараза
4	Сахароза	Сахараза

Контрольные вопросы

1. Каталитические процессы в живой природе?

2. Дайте определение ферментов?

3. История открытия и изучения ферментов?

4. Химическое строение ферментов?

5. Что такое апофермент, кофермент, холофермент, профермент?

6. Как влияет активность реакции среды (рН) на активность фермента?

7. Как влияет температура на активность фермента?

8. При какой температуре наблюдается оптимум действия фермента?

9. В чем заключается специфичность действия фермента?

10. Что такое абсолютная, групповая стереохимическая специфичность?

11. Что такое активаторы и парализаторы ферментов?

12. Современная классификация и номенклатура ферментов

13. На чем основана классификация ферментов? О чем говорит шифр фермента?

14. Оксидоредуктазы, назовите ферменты, относящиеся к этому классу. 15. Приведите примеры химических реакций, катализируемых ферментами класса оксидаз.

16. Напишите уравнение реакции окисления следующих веществ:

А) этилового спирта

Б) молочной кислоты

В) аскорбиновой кислоты

17. Характеристика класса трансфераз. Напишите формулу пиридоксальфосфата. Какова роль его в обмене веществ?

18. Характеристика класса гидролаз.

19 Липолитические ферменты – эстеразы, где содержится липаза? Напишите уравнение реакции, катализируемой липазой

20. Амилолитические ферменты. Напишите схему ферментативного гидролиза крахмала . 21. Напишите уравнение химической реакции, катализируемой ферментами:

- мальтазой (глюкоамилазой),

- сахаразой,

- лактазой.

Укажите, где содержатся данные ферменты

22.Назовите протеолитические ферменты (протеиназы, пептидазы).

Напишите уравнение реакции гидролиза следующих депептидов:

фенилаланин-метионин,

лизил-треонин,

гистидил-лейцин.

23.Характеристика класса лиаз.

24.Напишите формулу тиаминпирофосфата, что это за вещество? Какова его роль в обмене веществ?

25.Назовите ферменты, катализирующие следующие химические реакции:

• декарбоксилирование пировиноградной кислоты

• декарбоксилирования лизина

• декарбоксилирования орнитина

• превращение фруктозо-1,6-дифосфата в фосфоглицериновый альдегид и фосфодиоксиацетон.

26.Характеристика класса изомераз. Напишите уровнение химической реакции превращения фосфодиоксиацетона в фосфоглицериновый альдегид. Назовите фермент

27.Напишите уравнение реакции превращения глюкозо -6-фосфат в глюкозо–1-фосфат. Назовите фермент и кофермент этого элемента.

28.Характеристика класса лигаз (синтетаз).

29.Что называется активным центром ферментов. Значение ферментов для ветеринарной и медицинской практики.