Правила работы с биологическим микроскопом.

1. Микроскоп переносят держа двумя руками за ручку и ножку штатива, при этом нельзя наклонять, т.к. может выпасть окуляр.

2. На рабочем столе микроскоп должен стоять на расстоянии 5 см от края стола. Перед работой его протирают от пыли мягкой сухой тканью.

3. Настройка освещения производится с объективом 8. После зрения микроскопа должно иметь форму круга, равномерно и хорошо освещенного.

4. Исследуемый препарат закрепляют на предметном столике.

5. Препарат рассматривают с объективом 8, а затем переходят к нужному увеличению. При работе с объективом 8 расстояние от объектива до препарата около 9 мм, с объективом 40 – 0,6 мм, с объективом 90 – 0,15 мм. Тубус опускают макровинтом до соответствующих рабочих расстояний, пока не появится изображение изучаемого объекта. После с помощью микрометрического винта фокусируют объектив до четкого изображения. При работе с иммерсионным объективом на препарат наносят иммерсионное масло и, осторожно опуская кончик объектива в каплю масла, находят изображение объекта и микрометрическим винтом устанавливают четное изображение.

6. При работе с разными объективами требуется различная освещенность, что регулируется соответствующим положением конденсатора: объектив 90-конденсор поднят до предела, объектив 40 – конденсор немножко опущен и объектив 8 конденсор опущен еще ниже.

7. Передвигая предметный столик с препаратом боковыми винтами, просматривают весь мазок.

8. Во время микроскопирования необходимо держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно.

9. После окончания работы снимают препарат с предметного столика, ставят объектив 8, опускают конденсор, вытирают иммерсионное масло с линзы объектива 90 и убирают микроскоп.

Приготовление препаратов микроорганизмов

Для микроскопирования препараты готовят на предметном стекле, нередко требуется и покровное стекло. Препараты бывают следующих типов: «раздавленная капля», «висячая капля» и окрашенные препараты.

Препарат «раздавленная капля» готовится для рассмотрения микроорганизмов в живом состоянии. На середину предметного стекла наносят каплю воды или физраствора и в нее вносят бактериологической иглой немного исследуемого микроорганизма и перемешивают. Каплю накрывают покровным стеклом, и излишек жидкости удаляют фильтровальной бумажкой. Бактерии и дрожжи микроскопируют с объективом 40, иногда 90, а грибы – с объективом 8 и 40.

Препарат «висячая капля» применяется при изучении подвижности микроорганизмов и прорастания спор. Предметное стекло для «висячей капли» имеет углубление посередине. На покровное стекло наносится очень маленькая капля с исследуемым микроорганизмом и переворачивается на предметное стекло так, чтобы капля свисала в углубление, не касаясь краев и дна. Края покровного стекла для герметичности смазывают вазелином.

Окрашенные препараты делятся на простые и сложные по способу окраски.

Препараты с простым способом окраски применяется для ознакомления с морфологией бактерий. Методика состоит из приготовления мазка, его высушивания, фиксации и окраски.

1. Для приготовления мазка на середину предметного стекла наносят каплю воды, вносят в нее микроорганизмы и после перемешивания размазывают по поверхности предметного стекла на площади 2-3 см².

2. Высушивают мазок на воздухе или над спиртовкой, не давая нагреваться стеклу.

3. Фиксируют мазок проводя 3-4 раза над пламенем горелки или фиксаторами. Цель фиксации – убить клетки бактерий, т.к. мертвые прокрашиваются лучше живых и зафиксировать их.

4. На фиксированный мазок наносят 1-2 капли карболового фуксина Циля. Фуксин готовят смешиванием 190 см³ 5% раствора фенола и 10 см³ насыщенного спиртового раствора фуксина. Выдерживают мазок 20-40 секунд в краске, смывают слабой струей воды и высушивают. На препарат наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом 90.

Сложные способы окраски применяют для выявления деталей строения микроорганизмов и их дифференциации.

К сложным способам окраски относится окраска бактерий по методу Грама. Одни виды окрашиваются по Граму и называются грамположительными; другие не окрашиваются и называются грамотрицательными.