4.7 Влияние антибиотиков на развитие бактерий

Многие микроорганизмы в процессе жизнедеятельности вырабатывают активные вещества, обладающие губительным действием в отношении микроорганизмов – антагонистов. Эти вещества называются антибиотиками и обладают избирательностью действия. Одни из антибиотиков только подавляют развитие, другие уничтожают определенные виды микроорганизмов.

Антибиотики применяют для удлинения соков хранения пищевых продуктов.

План проведение занятия.

1. Изучение антибактериального действия антибиотиков методом бумажных дисков.

2. Оценка антибактериального действия антибиотиков.

Методические указания.

Первое занятие.

1. Нанести пипеткой на поверхность пластинки агара в чашке Петри каплю взвеси бактерий и тщательно растереть ее по всей поверхности стерильным шпателем.

2. Обожженным пинцетом перенести на поверхность агара диски, пропитанные одним из антибиотиков (пенициллином, стрептомицином, левомицетином, биомицином).

3. Расположить диски на чашке.

4. Перевернуть чашки вверх дном и поместить в термостат при температуре 37^оС.

Второе занятие.

5. Рассмотреть чашку с посевом культуры и оценить антибактериальное действие антибиотиков по зонам вокруг дисков, свободных от роста микробов.

6. Измерить с помощью линейки или миллиметровой бумаги зону задержки роста вокруг каждого диска. При зонах диаметром до 15 мм микроб обладает малой чувствительностью к данному антибиотику, диаметром свыше 25 мм – высокой чувствительностью. Отсутствие зоны задержки указывает на устойчивость к данному антибиотику.

Результаты записать по форме:

Название бактерий	Величина зоны задержки роста в диаметре (мм) при действии				Заключение о степени чувствительности
	пеницилина	стрептомицина	левомицитина	биомицина

4.8 Определение влияния ультрафиолетового облучения на бактерии

Устойчивость микроорганизмов к губительному дейст­вию УФ-лучей различна.

Эффективность воздействия УФ - лучей определяется как устойчивостью микроорганизмов, так и дозой облу­чения. Доза облучения зависит от мощности источника УФ - лучей, от расстояния между ним и облучае­мыми микроорганизмами и от продолжительности об­лучения.

УФ - лучи имеют слабую проникающую способность, поэтому эффективность облучения микроорганизмов зависит еще и от свойств среды, в которой они нахо­дятся.

Источником коротковолновых УФ - лучей (длина вол­ны около 260 нм)_, обладающих наибольшим бактерицид­ным действием, в настоящее время служат бактериоцид­ные лампы (БУВ-15 и др.).

План занятия.

1. Ознакомиться с влиянием УФ - лучей на микроорга­низмы.

2. Произвести высев на МПА опытной суспензии бак­терий до и после ее облучения для определения количества живых клеток и эффективности облучения.

3. Установить эффективность действия УФ - лучей на изучаемые бактерии.

4. Определить по морфологическим признакам, какие изучаются бактерии (микрококки, сарацины, бациллы или бесспоровые палочки).

Методические указания.

Занятие первое.

1.Подготовить стерильные чашки Петри для проведения опыта. На три чашки одинакового диаметра, пред­назначенные для облучения в них опытной водной сус­пензии бактерий, наклеить этикетки с указанием време­ни облучения; на четыре другие, в' которые будит делаться посевы бактерий, наклеить этикетки с указанием времени облучения, фамилии студента и номера группы.

2. Определение числа живых клеток бактерий в опыт­ной суспензии до и после облучения производится мето­дом счета колоний.

Для определения количества бактерий в суспензии до облучения 1 см ее внести в пробирку с 9 см стерильно­го физиологического раствора и тщательно перемешать. 1 см полученной разбавленной суспензии перенести в соответствующую чашку Петри, залить расплавленным и остуженным МПА, перемешать и дать застыть среде.

3. В три чашки Петри одинакового диаметра внести по 20 см опытной суспензии после тщательного переме­шивания ее и произвести облучение в течение 30 сек, 1 и 2 мин. Поочередно подставить чашки под бактери­цидную лампу на одно и то же место и держать их от­крытыми в течение указанного времени. Время замерять секундомером. Для предохранения глаз от УФ - лучей не­обходимо надевать светозащитные очки.

4. Сделать высевы облученных суспензий в МПА по 1 см³ их (после перемешивания) в соответствующие чашки Петри.

5. Чашки с засеянной средой поставить в термостат при 25° С.

6. Последовательность проведения опыта записать.

Занятие второе.

7. Для установления эффекта действия УФ - лучей на бактерии следует просчитать колонии на всех чашках. Вычислить количество погибших клеток после каждого периода облучения и выразить его в про­центах исходного числа живых клеток в опытной суспен­зии. При этом учесть разведение необлученной суспензии, сделанное перед ее высевом.

8. Для распознавания бактерий приготовить препарат, окрашенный «простым» способом. Бактерии брать из любой изолированной колонии.

9. Результаты исследований записать по форме таблице:

Название бактерий	Время облучение
	0	30 сек	1 мин	2 мин
	Число колоний на чашке
	Число погибших клеток, %