(Чашечный метод)

При посеве определенного количества исследуемого продукта в чашки Петри с плотной питательной средой с каждой клетки м.о. при выращивании образуется обособленная колония. Таким образом, количество колоний, выросших на чашках Петри, соответствует содержанию их живых, активных форм в количестве исследуемого продукта, взятого для посева. Для получения обособленных колоний делают разведения анализируемой пробы.

Для плесневых грибов и дрожжей в качестве питательной среды используется сусло- агар, для бактерий применяют мясо-пептонный агар. Учитываются только сапрофитные м.о., не учитываются анаэробы. Посевы бактерий выращивают при температуре 24-25^оС в течение 48 часов, посевы плесневых грибов и дрожжей- при 25^оС в течение 3-5 суток. Для учета определенных бактерий делают посевы на элективные питательные среды.

План занятия.

1. Ознакомиться с правилами отбора средней пробы.

2. Ознакомиться с методами счета колоний.

3. Отобрать пробу исследуемого объекта (или сделать смыв с исследуемого объекта) и подготовить ее к анализу.

4. Сделать разведения и посевы с них в чашки Петри с МПА.

Методические указания:

1. Средние пробы пищевых продуктов выдаются студентам в готовом виде. 1г исследуемого продукта перетирают в ступке и переносят в колбу со 100 см стерильного физраствора. Навески круп, пряностей, пюре, соли вносят в колбу со 100см³ стерильного физраствора без растирания. Содержимое колбы 5 мин взбалтывают. Смыв м.о. в колбе является исходным разведением. С него высевают в первую чашку и используют для получения второго разведения. Из средней пробы жидких и полужидких продуктов стерильно отбирают 1см³ вносят в пробирку с 9см³ или в колбу со 100см³ физраствора. При этом получается первое разведение.

Схема посева микроорганизмов по методу счета колоний

Для проведения посева необходимы 3 стерильные чашки Петри, три стерильные пипетки, колбы (1-2) и пробирки (1-3) со стерильным физиологическим раствором и три пробирки с МПА.

2.1. Стерильной пипеткой из первого разведения (колба) вносят 1 см³ в первую чашку Петри и 1см³ в первую пробирку с 9 мл стерильного физраствора (получается второе разведение)

2.2. Из второго разведения после перемешивания переносят 1 см³ во вторую чашку Петри и 1 см³ во 2 пробирку (получается третье разведение).

3. Из второй пробирки после перемешивания внести 1 см³ в третью чашку Петри.

4. В 3 чашки Петри из 3-х пробирок вылить расплавленный и остуженный до 45-50^оС МПА и тщательно перемешать вращательным покачиванием. После застудневания, чашки надписать (фамилию, номер группы и разведение) и поместить верх дном в термостат при температуре 24-25^оС.

1. Подсчет выросших колоний произвести с помощью лупы. Если в 1см² число колоний больше нескольких десятков, то дно чашки надо расчертить на секторы равного размера и подсчитать колонии в 2-х, 3-х из них и пересчитать на всю чашку. Для определения числа бактерий в единице веса, объема, поверхности необходимо число колоний в чашках умножить на соответствующие разведения и вычислить среднее арифметическое. По полученным данным рассчитывают содержание бактерий в 1г, 1см³ или 100см³ поверхности исследуемого объекта.

2. Для определения преобладающих бактерий приготовить препарат из обособленной колонии преобладающего типа, окрасить «простым» способом и промикроскопировать.

3. Если требуется видовой состав, то из колоний разного типа выделяют чистые культуры и идентифицируют.

4. Результаты исследований вносят в таблицу:

Наименование объекта	Проба для анали-за	Разве-дение	Кол-во колоний в чашках	Кол-во бактерий во взятой пробе	Среднее кол-во бактерий в единице измерения или на всем объекте	Преобладающие бактерии
«Твердый» продукт, г.		1)…. 2)…. 3)….
Жидкий продукт, см3		1)…. 2)…. 3)….