4.2 Определение влияния рН –среды на развитие бактерии.

Каждый м.о. может развиваться в определенном интервале рН- среды. При рН ниже минимального и выше максимального жизнедеятельность м.о. прекращается и они отмирают, при оптимальном рН – происходит интенсивный рост. Для большинства бактерий оптимальной является нейтральная среда, для плесеней и дрожжей – слабокислая.

План занятия.

1. Ознакомиться с влиянием рН на м.о.

2. Поставить опыт по выращиванию м.о. на питательных средах с различными значениями рН.

3. Произвести оценку интенсивности роста м.о.

4. Установить вид изучаемых бактерий по морфологически признакам.

Методические указания:

Занятие первое:

1. Приготовить пробирки с МПБ со следующими значениями рН: 3, 5, 7, 9. Произвести посев суспензии бактерий в пробирки бактериологической петлей, стерилизуя ее перед каждым посевом.

2. Пробирки поставить на 48 часов в стакане в термостат при 25^оС, предварительно поместив этикетку с фамилиями студентов и номером группы.

Занятие второе:

3. Оценить рост бактерий в пробирках по степени мутности, предварительно перемешав содержимое пробирок, пользуясь условными обозначениями: - отсутствие роста, + слабый рост, ++ умеренный рост, +++ обильный рост.

4. Из выросших бактерий приготовить и промикроскопировать препараты, окрашенные «простым» способом.

5. Результаты исследований записать по форме:

Название бактерий	Интенсивность развития бактерий.
	Значение рН среды
	3	5	7	9

4.3 Определение влияния температуры на развитие плесневого гриба.

Каждый вид м.о. имеет свой определенный температурный предел для роста и размножения. При температуре меньше минимальной развитие прекращается, но м.о. могут сохраняться живыми, при температурах выше максимальной - рост м.о. прекращается и они гибнут. Температура, при которой происходит наиболее интенсивное развитие м.о. называется оптимальной. Термоустойчивость м.о. различна. Бесспоровые бактерии, вегетативные клетки споровых бактерий, дрожжей и плесеней при температуре 50-70^оС погибают в течение 15-30 мин, а при 80-100^оС – в течение нескольких минут или секунд. Споры большинства дрожжей и плесеней погибают при 65-80^оС. Споры некоторых бактерий выдерживают нагревание при 100^оС несколько часов и погибают быстро лишь при 120-130^оС.

План занятия.

1. Ознакомиться с влиянием температуры на м.о.

2. Поставить опыт по выращиванию плесневого гриба в разных температурных условиях: при 5, 25 и 40^оС.

3. Провести оценку роста плесневого гриба и определить родовое название изучаемого гриба.

Методические указания:

Занятие первое:

1. Приготовить чашки Петри с сусло-агаром. Наклеить на чашки этикетки с указанием температуры, фамилии студента.

2. Посеять споры плесени в центр пластинки сусла-агара (СА) маленькой бактериологической петлей слегка касаясь ребром петли.

3. Засеянные чашки перевернуть кверху дном и поставить выращивать посевы при температурах 5, 25 и 40^оС.

Занятие второе:

4. Оценку влияния температуры на рост плесневого гриба производят по величине диаметра колоний, выросших на СА или по наличию спороношения и его степени (по величине окрашенной зоны колоний и интенсивности окраски). Диаметр измеряют миллиметровой бумагой со стороны дна чашки. Для оценки роста пользуются условными обозначениями: - отсутствие спороношения, + слабое спороношение, ++ умеренное спороношение, +++ обильное спороношение.

5. Приготовить микроскопический препарат «раздавленная капля». Мицелий брать из участка колоний со спороношением. Обнаружить и зарисовать орган размножения гриба и определить его родовое название по «ключу».

6. Результаты внести в таблицу.

Родовое название гриба	Показатель интенсивности роста	Температура выращивания, оС
	Диаметр колони, мм спороношение	5	25	40

4.4 Определение термоустойчивости бесспоровых и споровых бактерий

Задание выполняется на двух занятиях двумя студен­тами совместно. Один из них проводит опыт по выявле­нию термоустойчивости бактерий к 60° С, другой - к 80° С. В дальнейшем результаты опытов обобщаются и сравниваются.

План занятия.

1. Ознакомиться с действием высоких температур на микроорганизмы.

2. Поставить опыт по выявлению действия высоких температур (60 и 80°С) на бесспоровые и споровые бактерии.

3. Выявить и сравнить эффект действия различных высоких температур на бесспоровые и споровые бактерии.

Методические указания

Занятие первое.

1. Установить на штативах две водяные бани с тер­мометрами. Нагреть их до температуры 60 и 80°С и под­держивать эту температуру в течение проведения всего опыта.

2. Расплавить мясо-пептонный агар (4 пробирки) и разлить в 4 чашки Петри, распределяя его вращением чашек по всему их дну. Выдержать чашки в покое на столе до застудневания среды. Пронумеровать чашки: две за № I — они предназначаются для посева бесспоровых палочковидных бактерий; две за № 2—одна для посева споровых бактерий в опыте с температурой 80° С, другая для посева микрококков в опыте с 60° С. На боковую стенку чашки наклеить этикетки с указанием фамилии студента, номера группы и испытуемой температуры. Дно чашек расчертить восковым карандашом на сектора. Один сектор каждой чашки предназначается для посева суспензии бактерий перед ее нагревом (конт­роль), его надо обозначить цифрой 0, два других — для посева суспензий после их нагревания в течение 10 и 30 мин, поэтому один из секторов обозначить цифрой 10, другой — 30.

3. Заготовить для опыта в четырех пробирках с 9 см стерильного физиологического раствора «рабочие» сус­пензии. Надеть на пробирки бумажные ярлыки с номера­ми 1, 2, 3 и 4. В две (№ 1 и 2) пробирки внести стериль­ной пипеткой по 0,1 см суспензии бесспоровых палочко­видных бактерий, в третью (№ 3) пробирку внести другой пипеткой 0,1 см суспензии споровых бактерий, в четвертую (№ 4) пробирку — новой пипеткой 0,1 см суспензии микрококков. Содержимое пробирок с «рабо­чими» суспензиями тщательно перемешать.

4. Для опыта с температурой 80° С посеять в чашку № 1 на МПА в сектор О (в его середину) «рабочую» сус­пензию № 1, а в чашку № 2 (в сектор О) - т«рабочую» суспензию № 3.

Для опыта с температурой 60°С посеять на МПА секторов О чашки № 1 суспензию № 2, а чашки № 2 - суспензию № 4.

Посев производить стерильной бактериологической петлей путем легкого прикосновения ее ребра к среде.

5. Поместить на 10 мин пробирки № 1 и 3 с «рабочими» суспензиями в водяную баню, нагретую до 80°С, а пробирки № 2 и 4 — в баню температурой 60°С. Уровень воды в бане должен быть несколько выше уровня суспен­зий в пробирках.

После нагревания в течение 10 мин сделать посев суспензий бактериологической петлей в секторы чашек, обозначенные цифрой 10.

6. Пробирки с суспензиями снова поместить в те же бани и выдерживать еще в течение 20 мин, а затем вы­сеять суспензии в секторы МПА, обозначенные циф­рой 30.

7. Поставить все чашки в термостат при температу­ре 25°С.

8. Последовательность проведения опыта записать.