Задание 1. Анаэробное разложение клетчатки.
Методические указания.
Занятие первое.
Приготовить питательную среду следующего состава (%): KNH
HPO
- 0,2; CaCl
- 0,3; пептон – 0,1; MgSO
- 0,05; CaCO
-
0,5.В круглую плоскодонную колбу (150-20 мл) вносят 1-2 фильтрованной бумаги, нарезанной полосками, и заливают питательной средой доверху. В колбу вносят небольшое количество почвы и закрывают корковой пробкой с отверстием для выхода газа.
Колбу ставят в термостат при температуре 30-35°С на 2-3 недели. Фильтровальная бумага по мере сбраживания желтеет, и постепенно разрушаются бактериями.
Занятие второе.
Извлекают со дна колбы кусочек фильтровальной бумаги и размазывают на предметном стекле без добавления воды. Мазок сушат, фиксируют, красят фуксином и микроскопируют с иммерсионным объективом.
Записать в тетрадь результаты микроскопического изучения возбудителей брожения клетчатки, зарисовать длинные тонкие палочки с круглой спорой на конце – Клостридиум Омелянского.
Задание 2. Аэробное разложение клетчатки.
Методические указания.
Занятие первое.
Приготовление гелевых пластин. Раствор Na SiO (удельный вес 1,10) и соляную кислоту смешивают в соотношение 1:1 и разливают по 15-20 мл в чашки Петри. Через 12 ч. выпадает плотная студенистая масса (гель), состоящая из кремневой кислоты.
Промытые и прокипяченные гелевые пластины пропитывают 2-3 мл питательной среды следующего состава: на 200 мл дистиллированной воды добавляют в граммах KNO - 2,5; K HPO - 1,0; MgSO - 0,5; NaCl – 0,5; FeSO - 0,01; MnSO - 0,01.
Поверхность геля покрывают стерильным кружком фильтрованной бумаги раскладывают до 50 комочков почвы (диаметром 1 мм).
Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термостат при температуре 28-30°С на 8-10 дней.
Занятие второе.
Отметить появление вокруг комочков почвы колоний в виде розовых, зеленых, желтых, буровато-желтых пятен.
Приготовить окрашенные препараты из выросших колоний и промикроскопировать их с иммерсионным объективом.
Найти в препаратах разные виды целлюлозоразрушающих бактерии: Цитофага – бактерии со сложным циклом развития, относящиеся к миксобактериям (молодые клетки слегка заостренные, колонии в виде желтых, розовых и коричневых пятен); Полиангиум и Сорангиум – молодые клетки палочковидные, при старении укорачиваются и образуют микроцисты, которые собраны по 12-14 клеток в цисты. Из них формируется плодовые тела. Их колонии образуют слизистый налет желтого, оранжевого или темно-коричневого цвета. Активно разлагают клетчатку и отдельные представители грибов, а также дрожжей.
Зарисовать в тетради результаты микроскопирования.
Вопросы по собеседованию (уо-1) и самоконтролю
Что называется чистой культурой микроорганизмов?
2. Каково назначение чистых культур микроорганизмов?
3. Как устанавливается чистота культуры в колонии?
4. Чем могут различаться колонии различных видов бактерий?
Какие морфологические признаки используются для определения вида бактерий?
Как выявить подвижность бактерий?
Зачем производят посевы бактерий на различные питательные среды?
Как установить тип дыхания бактерий?
Как обнаруживается амилаза у бактерий?
Какие культуральные признаки используются для установления названия бактерий?
Чем отличаются гомоферментативное и гетероферментативное брожения?
Что является элективной средой для получения молочнокислых бактерий?
Как выявляют накопление гнилостных микроорганизмов в белковой среде?
Какого цвета налет на вареном картофеле при развитие на нем картофельной палочки?
Какие ферменты выделяют липолитические микроорганизмы для расщепления жиров?
Как установить накопление уксуснокислых бактерий?
Какой тип дыхания у уксуснокислых бактерий?
Как обнаружить в опыте продукты жизнедеятельности маслянокислых бактерий?
Какую форму имеют маслянокислые бактерии?
Какой тип дыхания у маслянокислых бактерий?
Назовите бактерии, сбраживающие целлюлозу.
Назовите микроорганизмы, разлагающие целлюлозу в аэробных условиях.