Контрольные вопросы:
Как установить тип дыхания бактерий?
Как обнаруживается амилаза у бактерий?
Какие культуральные признаки используются для установления названия бактерий?
3.2. Определение состава микрофлоры исследуемого объекта путем получения элективных культур микроорганизмов.
Культуру микроорганизмов, обогащенную одним определенным видом или определенной физиологической группой, называют элективной.
Микроорганизмы, находящиеся в пищевых продуктах в очень малых количествах, при определении состава микрофлоры часто не выявляются. С целью их определения проводят предварительно элективное культивирование микроорганизмов испытуемого материала, которое обеспечивает преимущественное развитие искомых микроорганизмов.
Из выращенных элективных культур можно получить чистые культуры данных микроорганизмов методом Коха.
Элективные культуры широко используются во многих отраслях промышленности.
Элективный метод выращивания применяется и для выявления микроорганизмов, которые не растут на стандартных средах. В этом случае посев проводится на дифференциально - диагностической среде. Метод получения элективных культур был разработан русским ученным С.Н. Виноградским.
Получение элективной культуры молочнокислых бактерий.
Молочнокислые бактерии широко распространены в природе. Они бывают шариковидной (кокки) и палочковидной формы, не образуют спор, являются факультативными анаэробами и вызывают процесс молочнокислого брожения, при котором сахара разлагаются с образованием молочной кислоты. Различают гомоферментативное брожение (образуется в основном молочная кислота) и гетероферментативное (кроме молочной образуется также уксусная кислота, углекислый газ, водород и др.). Палочковидные образуют больше молочной кислоты, чем шариковидные. Оптимальная температура для различных видов молочно-кислых бактерий неодинакова: например, Streptococcus lactis – 30-35C°, Streptococcus thermophilus – 40-45C°, Lactobact acidophilum - 40C°.
Элективной средой для получения молочнокислых бактерий служит молоко. Если пастеризованное молоко заквасить простоквашей или сметаной, то происходит прокисание молока за счет преимущественного развития молочнокислых бактерий, подавляющих развитие гнилостных микробов.
План занятий.
Ознакомиться с морфологическими и физиологическими признаками молочнокислых бактерий.
Поставить опыт для получения элективной культуры данных микроорганизмов.
Установить образование сгустка и его характер.
Сравнить микрофлору молока, заквашенного чистой культурой молочнокислых бактерий, и молока, подвергшего самоокислению.
Методические указания.
Первое занятие.
В две колбочки (объемом около 50 см
)
налить молоко на ¾ их объема и закрыть
ватными пробками. Одну колбочку
пастеризовать в течение 10 мин на водяной
бане при 80C°,
затем охладить до 30C°
и заразить чистой культурой молочнокислых
бактерий (стрептококков) в количестве
0,3 мл. Вторую колбочку оставить на
самозакисание.Поместить обе колбочки в термостат на 30C°.
Занятие второе.
Отметить консистенцию (плотная, сметанообразная), наличие сыворотки, пузырьков газа.
Приготовить препараты окрашенные «простым» способом из обеих колбочек. Зафиксировать мазки смесью спирта с эфиром (1:1), обмывая несколько раз мазок (происходит фиксация и освобождение от жираывая несколько раз маокк.ов газа.а 30йбане при 80турой молочно-кислых бактерийактерий, подавляющих развитие гнилостных микроб), и окрасить метиленовой синью в течение 2-3 мин. Микроскопировать с иммерсионным объективом и выявить преобладание коротких цепочек или диплококков.
Результаты опыта записать.