1.3. Плазма крови. Антигенные свойства крови

1.3.1. Определение скорости оседания эритроцитов (соэ)

по Панченкову

Цель работы: освоить методику определения скорости оседания эритроцитов.

Объект исследования – кровь человека.

При стоянии стабилизированной крови эритроциты в силу тяжести оседают. При этом кровь делится на два слоя: верхний (бесцветный, прозрачный) - плазму и нижний (красный, непрозрачный) - эритроциты.

Скорость оседания эритроцитов сильно колеблется в зависимости от состояния организма.

Рис. 4. Прибор Панченкова

Для определения СОЭ применяют прибор Панченкова (рис.4). Прибор представляет собой штатив, в котором могут быть укреплены в вертикальном положении специальные капилляры. Капилляры градуированы в миллиметрах. Метка «О» стоит на расстоянии 100 мм от нижнего конца. На капилляре есть еще две метки: «К» (кровь) - на уровне «нуль» и метка «Р» (реактив) - на уровне 50 мм.

Для работы необходимо: прибор Панченкова, часовое стекло, вата, 5% раствор лимоннокислого натрия (цитрат).

Проведение работы

1. Капилляр промывают 5% раствором цитрата. Затем набирают цитрат до метки «Р» (реактив) и выдувают его на часовое стекло.

2. В тот же капилляр двукратно набирают донорскую кровь до метки «К».

3. Обе порции крови смешивают на часовом стекле с имеющимся цитратом.

4. Полученную таким образом смесь крови с цитратом (в соотношении 4:1) набирают в капилляр до метки «О» и ставят капилляр в штатив.

Следует иметь в виду, что капилляр держат горизонтально, погрузив его кончик в основание капли, при этом кровь по закону капиллярности сама заполняет капилляр. Через час смотрят, скольким миллиметрам равна высота образовавшегося вертикального столбика плазмы в капилляре. Число миллиметров плазмы и является мерой СОЭ.

Норма СОЭ от 1 до 10 мм/час у мужчин, от 2 до 15 мм/час у женщин, до 45 мм/час у беременных женщин.

Обратите внимание, что СОЭ нельзя вычислять, измеряя сколько плазмы образовалось за 30 минут и умножая на 2, т.к. процесс оседания протекает во времени неравномерно.

Оформление протокола. Зарисовать прибор Панченкова и отдельно капилляр с метками. Отметить чем и в каком соотношении разводится кровь.

Вывод. Указать нормальные величины СОЭ у мужчин, женщин (детей), сравнить с ними полученные результаты. Объяснить предполагаемый механизм СОЭ, как влияет на СОЭ увеличение содержания глобулинов, фибриногена.

Определение группы крови

В клинической практике применяют два способа определения групп крови: с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток и цоликлонов – специальных реагентов, содержащих аналогичные антитела.

1.3.2. Определение группы крови системы аво

1.3.2.1. Определение группы крови с помощью стандартных

гемагглютинирующих сывороток

Цели работы: освоить методику определения групп крови, определить группу донорской крови.

Объект исследования – кровь человека.

На основании реакции агглютинации эритроцитов установлено, что кровь каждого человека принадлежит к одной из четырех групп. Кровь различных групп отличается наличием агглютининов и агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие вещества) находятся в плазме. Агглютиногены – вещества, способные склеиваться, содержатся в эритроцитах.

Имеются два вида агглютиногенов – А и В и соответственно два вида агглютининов –  и . Реакция агглютинации, т. е. склеивание эритроцитов, наступает лишь при смешении одноименных агглютининов и агглютиногенов, например  и А или  и В. Агглютинацию нельзя смешивать с процессом свертывания крови – выпадением фибрина в виде нерастворимых нитей.

Определение группы крови имеет практическое значение для переливания крови. При этом учитывают, прежде всего, свойства эритроцитов донора, так как плазма вводится в малом количестве и, разводясь в крови реципиента, теряет свои агглютинирующие качества. Однако при переливании значительного количества крови, учитывают и агглютинины донора.

Для работы необходимы: донорская кровь, стандартные сыворотки I, II и III групп двух разных серий, предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины.

1. На чистые чашки Петри в обозначенные участки наносят по 1 капле сыворотки I, II и III групп двух серий, содержащих соответственно агглютинины: I –  и , II –  и III – .

2. В каждую каплю сыворотки, с помощью стеклянных палочек или разных углов предметных стекол, вносят небольшое количество донорской крови и тщательно размешивают кровь в капле сыворотки палочкой до тех пор, пока смесь не примет равномерного розового цвета.

3. Покачивают чашку Петри в течение 5 минут. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.

4. По мере наступления агглютинации, но не раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь добавляют по одной капле физиологического раствора для предупреждения образования «монетных столбиков» из эритроцитов.

5. Определяют наличие агглютинации в каждой капле и устанавливают группу крови.

• Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.

• Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащих соответственно агглютинины  и , то, следовательно, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.

• Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащих агглютинины  и , то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.

• Наличие агглютинации в сыворотках всех трех групп указывает на присутствие в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе. Однако в этом случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV). Отсутствие агглютинации в этой капле позволит считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).

Источниками ошибок могут быть:

1. Оценка реакции отрицательной при фактическом наличии агглютинации. Это может быть обусловлено:

   1. Поздней или слабовыраженной агглютинацией в связи с малой активностью стандартных сывороток;

   2. Нарушением соотношения 1:10 при взятии большого количества крови;

   3. Наличием температуры воздуха большей, чем 25^оС. В таких случаях исследования проводят при охлаждении стекла.

2. Оценка реакции положительной при практическом отсутствии агглютинации. Это может быть обусловлено:

   1. Образованием «монетных столбиков»;

   2. Наличием панагглютинации, которая развивается при t=15 ^о С; для

   3. ее исключения следует повторить определение при более высокой температуре;

   4. Подсыханием сывороток и образованием по краям капель «зернистости», принимаемой за агглютинацию. Это может быть в тех случаях, когда чтение результатов производится более чем через 5 минут.

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты: обозначить номер группы крови, агглютинины стандартных сывороток и отсутствие или наличие агглютинации, например.

группа крови

агглютинины

сывороток

неизвестная кровь (эритроциты)

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать, в каких случаях исследуемая кровь может быть использована как донорская. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО.