1.2.2. Определение количества гемоглобина в крови
по методу Сали
Цель работы: ознакомиться с методикой определения содержания гемоглобина крови по методу Сали, определить содержание гемоглобина в донорской крови
Объект исследования – кровь человека.
Гемоглобин (Hb) – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам и обеспечивающий ткани кислородом, состоит из белка – глобина и гема – соединения протопорфирина IX с железом. Последний придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски. На этом основано определение концентрации гемоглобина крови.
Для определения содержания Hb в крови предложено много различных методов. Наибольшее распространение получили колориметрические методы, основанные на колориметрии производных гемоглобина. В настоящее время принят унифицированный гемиглобинцианидный метод определения количества гемоглобина. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием; образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически с помощью фотоэлектроколориметра, счетчика и гематологического автомата.
Наиболее распространенным в прошлом было определение количества гемоглобина по методу Сали. Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. Он основан на колориметрии солянокислого гематина. При смешивании крови с соляной кислотой Hb превращается в солянокислый гематин, имеющий коричневый цвет. Полученную смесь разбавляют дистиллированной водой до цвета раствора в стандартных пробирках, находящихся в крайних гнездах гемометра. Этот раствор имеет интенсивность окраски, соответствующую содержанию гемоглобина, равному 166,7 г/л.
В норме в крови содержится около 140 г/л гемоглобина (у женщин 120-140 г/л, у мужчин 130-160 г/л, у новорожденных – 217 г/л).
Рис. 3. Гемометр Сали
1 - пробирки со стандартным раствором; 2 – пробирка для исследуемой крови; 3 - пипетка для крови; 4 - пипетка для воды
Для работы необходимо: донорская кровь, гемометр Сали (рис.3), 0,1N раствор соляной кислоты, дистиллированная вода.
Проведение работы
В градуированную пробирку гемометра наливают до первой метки 0,1N раствор соляной кислоты.
Капиллярной пипеткой набирают кровь точно до метки 20 мм и осторожно выдувают ее на дно пробирки. Не вынимая пипетки из пробирки, промывают ее соляной кислотой, встряхивая пробирку, тщательно перемешивают ее содержимое. Для завершения реакции смеси дают постоять не менее пяти минут.
Специальной пипеткой прибавляют к смеси по каплям дистиллированную воду, перемешивая содержимое палочкой. Это продолжается до тех пор, пока цвет исследуемой жидкости не сравняется с окраской стандартного раствора.
Отмечают по шкале, на каком делении стоит уровень верхнего края мениска, полученного раствора солянокислого гематина. Если по шкале пробирки единица измерения Hb г %, то, чтобы выразить результат в системе СИ, умножают найденную цифру на 10. Например, Hb = 13,2 г % 10 = 132 г/л.
Источниками ошибок могут быть: выцветшие стандартные растворы в старых гемометрах; неточное соблюдение пятиминутной выдержки перед началом разведения; попадание воздуха в капилляр с кровью.
Оформление протокола. Назвать принцип метода определения количества Hb, отметить, чем разводится кровь и почему. Записать найденное количество гемоглобина и нормальное содержание гемоглобина у мужчин, женщин и новорожденных; зарисовать гемометр Сали и капилляр для взятия крови.
Вывод. Сравнить полученные результаты с нормой, указать соответствует ли норме найденное количество гемоглобина.