1.3.2.2. Определение группы крови системы аво
с помощью цоликлонов
Цели работы: освоить методику определения групп крови, определить группу донорской крови.
Объект исследования – кровь человека.
Цоликлон – реагент, действующим началом которого являются моноклональные человеческие антитела. Моноклональные человеческие антитела продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши. Цоликлоны изготовляются из асцитической жидкости таких мышей.
Для определения групп крови системы АВО используются цоликлоны анти- А, анти- В и цоликлон анти- АВ, содержащие смесь анти- А и анти- В антител.
Анти- А и анти- В антитела цоликлона при смешивании с нативной кровью вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих соответствующие А и В антигены. Заключение о присутствии антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.
Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлоны (анти- А, анти-В, анти-АВ), предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.
Проведение работы. Принцип определения группы крови человека системы АВО с помощью цоликлонов такой же, как и со стандартными гемагглютинирующими сыворотками.
Наносят на чашку Петри индивидуальными пипетками цоликлоны анти- А, анти- В и анти- АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями антител помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).
Смешивают кровь с реагентом.
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании чашки Петри в течение 3 минут.
Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов.
Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.
Если агглютинация произошла с цоликлонами анти- А и анти- АВ (I, II капли реагента), то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.
Если агглютинация произошла с цоликлонами анти- В и анти- АВ, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.
Наличие агглютинации с цоликлонами анти- А, анти- В и анти - АВ свидетельствует о присутствии в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе.
Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты, обозначив содержание анти- А, анти- В и анти - АВ антител в чашках Петри и отсутствие или наличие агглютинации, например:
Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать, в каких случаях исследуемая кровь может быть использована как донорская. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО, и схему оценки результатов определения группы крови по цоликлонам.