4. Цель – изучение биологических свойств чистой культуры бактерий

1. Биохимическая активность

Визуально ТАВК

По Граму

Ориентиров

РА

Подвижность

Чистая культура гл лак мн мл сах

н а МПА или а) углеводолитическая актив-ть

ср.Ресселя

МПБ МПБ МПБ МПС

индо сероводород лак желатин

а)протеолитическая

2. Серологические свойства

ТАВК

Ориентировочная реакция

агглютинации на стекле

Антитела Т, А, В. 1/50 1/100 1/120 1/400 1/800 1/1600… КК КС

К – контроль Развернутая (пробирочная) реакция агглютинация

3. Фагодиагностика

а) Типирование бактериофагами

Т

А

В

К

К

В Т

В жидком МПБ

А

На плотном МПА Т, А, В – б/фаги

К – физ.раствор

б) Чувствительность к поливалентному (Т, А, В) на плотной или жидкой среде

Выполняются также, но со смесью б/фагов, без их разделения.

Дополнение к 3 а

Свежевыделенные (идентифицированные) брюшнотифозные бактерии содержат Vi – антигены, к ним обнаружены 24 типа Vi – фага. Соответственно существует 24 типа брюшнотифозных Vi – штаммов. Кроме того, существует Vi – фаг I типа – универсальный для всех брюшнотифозных бактерий.

Методика фаготипирования по Vi - специфичности

1. Чистую культуру отсеять на МПБ. Выращивать 4 дня при + 37^оС.

2. 25 капель 4-х суточной культуры раздельно раскапать на чашки с МПА. Подсушить.

3. К каждой подсушенной капле добавить один из 24-х Vi –бактериофагов, а к 25-й обязательно Vi – фаг универсального типа. Подсушить.

4. Поместить в термостат при + 37^оС на 2 часа, затем на 8-10 часов на холод (+ 4^оС) и опять в термостат на 4 часа при + 37^оС.

5. Учет результатов. Лизис культуры Vi – фагом I типа свидетельствует о её принадлежности к брюшнотифозным микробам.

Лизис одним из 24 типов фага указывает на принадлежность штамма к этому типу моно- Vi – фага.

3. Чувствительность к лекарственным веществам антибиотикам

Метод лекарственных 1/5 1/10 1/20 1/40 1/80 Контроль Контроль

дисков (диффузионный Метод серийных разведений культуры антибиотика

на МПА)

Зона отсутствия роста - Среда без помутнения говорит о чувствительности, с ним –

у чувствительных к-р, об её отсутствии.

наличие его – у устойчивых.

5. Заключение об идентификации микробного вида

На основании изученных свойств: морфологических, структурных,

тинкторальных, подвижности, биохимических (углеводо- и протеолитических) серологических (антигенный состав), чувствительности к бактериофагу – делаем заключение о виде возбудителя – идентифицируем микробный вид фаготип культур.

На основании чувствительности к лекарственным веществам и бактериофагам, даем заключение, чем надо лечить больного.

Приложение № 2