Морфология и ультраструктура актиномицетов

Ультраструктура

Как у грамположительных бактерий:

клеточная стенка,

цитоплазматическая мембрана,

цитоплазма, нуклеоид,

рибосомы,

мезосомы,

включения

Отличие

от бактерий

В составе пептидогликана клеточной стенки обнаружены: арабиноза, галактоза,

мадуроза, ксилоза

Морфология

1. Имеют вид палочек или нитей (гиф), которые, переплетаясь, образуют мицелий:

а) субстратный – вросший в питательную среду;

б) воздушный – располагающийся над питательной средой

2. На концах воздушного мицелия располагаются спороносцы (орган плодоношения), несущие одну или несколько спор

3. Спороносцы могут быть прямые, волнистые, спиральные

4. Споры могут быть круглые, овальные, цилиндрические с гладкой, волнистой, шиповидной или бородавчатой поверхностью

5. В тканях макроорганизма образуют друзы (скопление мицелия) = серовато-желтые зерна или песчинки.

Центр друз бесструктурен, пропитан солями кальция, по Граму окрашивается в фиолетовый цвет. Периферия имеет колбовидные вздутия, которые по Граму окрашиваются в розовый цвет

Тип

Proteobacteria

Chlamydiaе

Класс

Alphaproteobacteria

Chlamydiae

Род

Ricketsia

Chlamidia

Представитель

R. provazekii

R. typhi

(возбудители сыпного тифа)

C. psittaci

(возбудитель орнитоза)

C. trachomatis

(возбудитель трахомы и урогенитального хламидиоза)

Ультраструктура

Типичная структура грамотрицательных бактерий: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид, рибосомы, структуры, напоминающие мезосомы; у некоторых видов есть наружная мембрана; нет жгутиков, спор, капсул

Морфология

Полиморфные организмы кокковидной или шаровидной формы

Ультраструктура

Типичная структура для грамотрицательных прокариотических организмов: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид, рибосомы

Морфология

Строгие внутриклеточные паразиты.

Вне клеток – элементарные тельца = спороподобные сферические клетки (являются инфекционной формой).

В клетках – ретикулярные тельца = делящиеся формы, образуют микроколонии в клетках

Тип

Firmicutes

Класс

Mollicutes

Род

Mycoplasma

Ureaplasma

Представитель

M. pneumoniae

возбудитель пневмонии

U. urealiticum

возбудитель заболеваний мочеполовой системы

Ультраструктура

Типичная структура прокариотических организмов. Но:

1) отсутствует клеточная стенка;

2) покрыты трехслойной эластичной мем-

браной, состоящей из липопротеиновых

соединений, фосфолипидов, стеринов;

3. снаружи расположен капсулоподобный слой;

жгутиков не имеют, спор не образуют

Морфология

Полиморфные организмы: кокки, нити, палочки, элементарные тельца, шары, кольца, аморфные массы

Виды

Принципы

Иммерсионная

Применяют микроскопы марок МБИ и Биолам, предназначенные для изучения структуры, формы, размеров и других признаков организмов, величина которых не менее 0,2-0,3 мкм. Предельная разрешающая способность иммерсионного микроскопа 0,2 мкм. Общее увеличение определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра

Темнопольная

Основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц. Это достигается при помощи параболоид- или кардиоид-конденсора. Препарат выглядит светлым на темном фоне

Фазово-контрастная

Используют обычный микроскоп и фазово-контрастное устройство КФ-1 или КФ-4 и специальные осветители ОИ-7 или ОИ-19, что дает возможность увидеть прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной (темное изображение объекта на светлом фоне) или негативной (светлое изображение объекта на темном фоне)

Люминесцентная

Основана на явлении фотолюминесценции (люминесценции объекта под влиянием света). Первичная (собственная) люминесценция наблюдается без предварительного окрашивания объекта, вторичная (наведенная) – после обработки препаратов люминесцирующими красителями – флюорохромами. Дает возможность исследовать живые организмы и обнаруживать их в материале в небольших концентрациях

Виды

Принципы

Электронная

Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм): вирусы, молекулярные структуры. Световые лучи заменяет поток электронов, имеющий при определенных ускорениях длину волны около

0,005 нм, т.е. почти в 100000 раз меньше длины видимого света. Разрешающая способность составляет 0,1-0,2 нм и позволяет получить полезное увеличение до 10⁹ крат

Порядок работы

Ошибки при работе

1. С помощью зеркала установить освещение

2. На препарат нанести каплю иммерсионного масла и поместить стекло на предметный столик, укрепив зажимами

Капля масла должна быть оптимального объема: слишком большая растечется в слой, маленькая – не позволит добиться четкого изображения

3. Повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива х90

4. Под контролем зрения сбоку медленно погрузить иммерсионный объектив в каплю масла, пока объектив не соприкоснется со стеклом

Работая быстро и не контролируя работу сбоку, можно объективом раздавить стекло

Порядок работы

Ошибки при работе

5. Глядя в окуляр, медленно вращать макровинт на себя, пока не промелькнет изображение препарата

Вращая макровинт быстро, можно не заметить изображение препарата

6. Провести окончательную фокусировку препарата микровинтом, вращая его в пределах одного оборота

Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, т.к. это может повлечь поломку стекла или фронтальной линзы

7. По окончании работы необходимо удалить масло с объектива, прикасаясь к нему салфеткой

Не тереть! Засохшее масло на салфетке может поцарапать линзу

8. Револьвер поставить в нейтральное положение, на предметный столик положить салфетку и опустить тубус

В результате нарушения этих пунктов может быть сорвана резьба, по которой поднимается и опускается тубус, и микроскоп будет выведен из строя

9. Микроскоп переносят двумя руками: одной держат за тубус, другой придерживают микроскоп снизу!

Последовательность действий

1. На стекло петлей нанести каплю воды, внести в нее культуру и растереть, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. Диаметр мазка должен быть равен 1 см

2. Высушить на воздухе

3. Зафиксировать: предметное стекло мазком вверх 3 раза провести над пламенем горелки

4. Окрасить

Простые

Сложные

Используется один краситель:

фуксин,

Бурри

Используется несколько красителей:

Грама,

Ожешки,

Нейссера,

Циля – Нильсена,

Бурри – Гинса