Особенности выделения чистых культур анаэробных бактерий

1. Применение специальных сред = Китта – Тароцци (питательный бульон, глюкоза, 0,15% агара, кусочек мяса, рН=7,4)

2. Механическая защита = сверху наливают вазелиновое масло

3. Культивирование в анаэростатах

4. Культивирование в толще питательной среды по Вейнбергу: 1 петлю материала вносят в бульон, оттуда пастеровской пипеткой переносят в агар (45⁰) и готовят 10-тикратные разведения

5. Метод Виньяла – Вейона = культивирование в запаянных ампулах или пастеровских пипетках

6. Посев в высокий столбик питательной среды: 10-15 мл плотной среды, материал засевают уколом

7. Химическая защита: в пробирку с питательной средой вносят химические вещества = поглотители кислорода: щелочной раствор пирогаллола, гидрокарбонат натрия и гидросульфит натрия

8. Биологический метод Фортнера: на чашку с питательной средой засевают одновременно аэробы и анаэробы, после чего чашку герметизируют парафином

Ход выделения:

1) материал первоначально засевают на среды обогащения = в 2 пробирки со средой Китта – Тароцци, одну – выдерживают при 80 ⁰С 30 мин для уничтожения вегетативных форм и сопутствующей флоры, вторую – нет. Обе пробирки затем инкубируют в термостате;

2) делают пересев из среды Китта – Тароцци по методу Цейсслера: материал петлей наносят на 1 чашку и растирают шпателем последовательно в 1, 2 и 3-й чашке...;

3) выделяют чистую культуру и идентифицируют

Величина

Крупные, средние, мелкие

Форма

Круглые, овальные, розеткообразные, напоминающие гриву льва, яичницу и т.п.

Цвет

Белые, желтые, красные, бесцветные

Консистенция

Сухие, влажные, слизистые

Поверхность

Гладкая, морщинистая, плоская, выпуклая

Край

Ровный, волнистый, фестончатый

Структура

Аморфная, зернистая, волокнистая

Определение сахаролитических ферментов = посев на «пестрый ряд» (среды Гисса – включают в себя углевод и индикатор Андреде). Для сбора газообразных продуктов в пробирки помещают поплавок

Короткий «пестрый ряд» включает углеводы: глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза, маннит

Длинный «пестрый ряд» включает те же углеводы, что и короткий ряд: глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза, маннит и дополнительно в его состав входят: 1) моносахариды: арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза; 2) полисахариды: инулин, крахмал, гликоген; 3) спирты: глицерин, дульцит, инозит

Учет результатов:

1. Если цвет среды изменился, бактерии ферментируют этот углевод до кислых продуктов (ставят в таблице букву К).

2. Если наряду с изменением цвета среды в поплавке обнаруживается газ, бактерии ферментируют этот углевод до кислоты и газа (ставят – КГ).

3. Если цвет среды не изменился, бактерии не ферментируют этот углевод

Определение протеолитических ферментов = посев бактерий уколом в столбик 10-20% желатины и пептонную воду (в пробирку к пробке прикрепляют индикаторные бумажки на индол, сероводород, аммиак). Для обнаружения каталазы на стекло наносят культуру и каплю 1-3% р-ра Н₂О₂

Учет результатов:

1. При наличии протеолитических ферментов бактерии разжижают желатин, образуя «воронку» или «елочку».

2. При образовании газообразных продуктов разложения пептона бумажки меняют цвет:

бумажка на аммиак – синеет,

бумажка на сероводород - чернеет,

бумажка на индол – розовеет.

Морфология бактерий

Окраска по Граму и другими методами

Характер роста (культуральные признаки)

Колонии на плотной среде

Рост на жидкой среде

Биохимические

признаки

ферментация

глюкозы

лактозы

сахарозы

мальтозы

маннита

образование

индола

сероводорода

аммиака

каталазы

Наименование рода и вида культуры

Риккетсии и хламидии = внутриклеточные паразиты – на питательных средах не растут

Риккетсии культивируют в:

1) куриных эмбрионах,

2) культурах клеток,

3) организме чувствительных животных,

4) организме переносчиков болезней: вшей, блох, клещей

Хламидии культивируют в:

1) куриных эмбрионах,

2) культурах клеток,

3) организме чувствительных животных