116. Клинико-генеалогический метод.

Генеалогический метод – метод изучения родословных, с помощью котрого прослеживается распределение какого-либо признака в семье или роду с указанием типа родственных связей между членами родословной. В медицинской генетике метод называется клинико-генеалогическим. Это один из самых распространенных методов изучения генетики. С его помощью были установлены закономерности наследования многих признаков человека, а так же выявлены заболевания, имеющие наследственную природу. Достоинством данного метода является его простота и доступность, как для врача, так и для пациента. Клинико-генеалогический метод считается универсальным и широко применяется при решении медицинских (практических) и фундаментальных (теоретических) задач, например:

• Установления наследственного характера признака

• Определении типа наследования признака или заболевания

• Оценки пенетрантности гена

• Анализе сцепления генов и картировании хромосом

• При изучении интенсивности мутационного процесса

• Установлении механизмов взаимодействия генов

Клинико-генеалогичсекий метод включает в себя два основных этапа – составление родословной и анализ родословной.

Как правило, родословная составляется для изучения одного или нескольких признаков (однако, при изучении более чем двух признаков одновременно, становится трудно установить характер наследования). Существует правило: чем больше поколений вовлечено в составление родословной и чем более обширной будет информация о членах родословной, тем более точным будет результат. Обычно данные собираются в форме опроса и с изучением медицинских карт семьи. Делать окончательные выводы только на основе опроса и анализа родословной будет не верным. Для подтверждения сделанных выводов, необходимо проводить дополнительные клинические и лабораторные исследования. Для составления родословной используют специальные символы.

117. Современные методы цитогенетики.

Появление новых технологий молекулярной цитогенетики, основанных преимущественно на гибридизации нуклеиновых кислот, значительно расширило возможности хромосомной диагностики.

Среди методов молекулярной цитогенетики основными являются флуоресцентная гибридизация (FISH), сравнительная геномная гибридизация, мечение хромосом с помощью полимеразной реакции с использованием специфических праймеров.

• FISH. Метод флуоресцентной гибридизации позволяет выявлять индивидуальные хромосомы или их отдельные участки на препаратах метафазных хромосом или интерфазных ядрах на основе комплементарного взаимодействия ДНК-зонда, конъюгированного с флуоресцентной меткой искомого участка на хромосоме. Для визуализации на хромосоме пептидно-нуклеиновых соединений применяют зонды на основе белкового продукта. ДНК-зонды: цельнохромосомные (транслокации), теломерные (делеции, транслокации), локус-специфичные (амплификации, делеции, транслокации), центромерные (анеуплоидии).

• Метод основан на комплементарном связывании ДНК-зонда с ДНК в метафазных хромосомах или интерфазных клетках и включает следующие основные этапы:

• Денатурация двухцепочечной ДНК зонда и ДНК мишени до одноцепочечных под воздействием выосокой температуры или химических агентов

• Гибридизации ДНК-зонда с ДНК-мишенью по принципу ккомплементарности с образованием двухцепочечной гибридной молекулы

• Постгибридизационная отмывка для удаления негибридизовавшегося ДНК-зонда.

• Анализ гибридизационных сигналов в люминесцентном микроскопе

Многоцветная FISH. Для многоцветной FISH используются цельнохромосомные ДНК-зонды, которые гибридизуются с многочисленными короткими фрагментами молекулы ДНК по всей длине определенной хромосомы, обеспечивая ее равномерное окрашивание в специфичный цвет. Разновидностью этого метода является 24-хцветная FISH. Метод применяется для одновременной идентификации всех хромосом. При этом для мечения достаточно использовать 5 различных флуорохромов. Уникальная комбинация нескольких флуорохромов позволяет присвоить каждой хромосоме строго специфический виртуальный псевдоцвет при использовании специальной компьютерной программы цифровой обработки изображения. 24-х цветная FISH эффективна при выявлении хромосомных транслокаций (каждая пара хромосом имеет свой псевдоцвет), но не позволяет выявлять хромосомные делеции и инверсии.

Многоцветный бэндинг хромосом.

Многоцветный бэндинг хромосом позволяет проводить полный анализ каждой аутосомы, Х и У схромосом в метафазной пластинке. Набор ДНК-зондов обеспечивает получение специфических сигналов в пределах соответствующих районов хромосом. По интенсивности сигналов разных флуорохромов компьютерная программа каждому их хромосомных районов присваивает свой псевдоцвет, что позволяет проводить диагностику внутрихромосомных перестроек, таких как делеции, дупликации, инверсии и инсерции.