Для чего нужно разбавлять сперму, какие требования предъявляются к средам и компонентам разбавителей

Для разбавления спермы используют специальные среды, создающие следующие преимущества:получается большой объем спермы, что имеет важное практическое значе¬ние для интенсивного использования ценных производителей;в сперме, смешанной с некоторыми разбавителями, спермии переходят из активного в анабиотическое состояние;удлиняется срок переживаемое спермиев вне организма вследствие за¬мены секретов придаточных половых желез искусственной средой и ослабле¬ния концентрации в сперме токсичес¬ких веществ, бактериостатического дей¬ствия добавляемых в разбавитель анти¬септиков и других веществ.

Перед разбавлением эякулята опре-деляют подвижность и концентрацию спермиев. Эти показатели должны удовлетворять требованиям инструкции, по-скольку они являются основой для оп-ределения степени разбавления, кото¬рая выражается отношением, показывающим объем среды, добавляемой на каждый миллилитр эякулята, и имеет определенные пределы у каждого вида производителей . Предельную степень разбавления спермы можно вы¬числить по формуле

Эякулят разбавляют, добавляя по частям необходимое количество разбавителя и тщательно перемешивая жидкость. Обычно сперму быка разбавляют в 10 (1 : 9)—15 (1: 14) раз. В некоторых странах разбавляют сперму 1 : 20 : 25 : 50.. Одни авторы считают, что в дозе для осеменения одной коровы дол¬жно быть минимум 10—15 млн живых спермиев, другие — 25—50 млн.

Состав сред меняется в зависимости от вида животных и способа хранения спермы. Разбавляют эякулят не позднее чем через 30 мин после его получения.

Впервые для разбавления спермы И. И. Иванов использовал физиологический раствор хлорида натрия (0,9%). Однако он оказался малопригодным для этой цели, так как его вязкость меньше вязкости спермы, поэтому спермии в ней быстро оседают: pH физиологического раствора колеблется в пределах 5,6—6,2 и даж е ниже, так как дистиллированная вода поглощает из воздуха углекислоту. Затем Были предложены: ГФО — глюкозофосфатный разбавитель для овец; ГСЛ — глюкозосульфатный разба¬витель для лошадей; ГГ С — глюкозо- тартратный разбавитель для свиней; ГТКр — глюкозотартратный разбави¬тель для кроликов; ГТСо — глюкозотар¬тратный разбавитель для собак, желатинированный и другие разбавители.

Г. Н. Павлов установил важность включения в разбавитель лецитина и желтка куриного яйца для выживаемости спермиев. На основе этого с первой половины XX столетия широкое распространение получили глюкозоцитратно-желточные среды.Все компоненты для приготовления разбавителей должны быть химически чистыми, проверенными на токсич¬ность и соответствовать ГОСТу, указанному в инструкции по искусственному осеменению. Компоненты хранят в сухом темном месте в плотно закрытых банках. Биологический контроль обязателен для новой серии каждого препарата, особенно антибиотиков, добавляемых в среду, так как некоторые из них могут оказаться губительными для спермиев. Разбавители необходимо готовить только на дистиллированной воде. В ней нет хлористых соединений, разрушающих оболочку спермиев.

Глюкоза, фруктоза, лактоза, сахароза и гликокол (аминоуксусная кислота) снижают электропроводность раствора, предупреждая агглютинацию спермиев, связанную с потерей ими электрических зарядов. Глюкозу и фруктозу спермии могут использовать как источник энергии.

В сперме быка и барана при хранении начинают образовываться молочная кислота и другие продукты обмена. Для их нейтрализации, задержки набухания коллоидов цитоплазмы, оболочки спёр-

. Минимальные показатели спермы, допускаемой к разбавлению и хранению, и степень ее разбавления

Произво¬

дитель Концен¬

трация

спермиев,

млрд/мл Подвиж¬

ность

спермиев,

баллы Степень разбавления

мини¬

мальная макси¬

мальная

Бык 0,7 8 1 9 1 : 31

Баран 1,0 8 1 1 1 : 3

Хряк 0,15 7 1 1 1:9

Жеребец 0,15 6 1 1 1 : 3

Петух, 2,0 7 1 1 1 : 2

индюк

Гусак 0,4 7 1 1 1 : 2

s. Среды для краткосрочного хранения спермы

Сперма

компоненты среды быка барана жеребца хряка петуха и индюка гусака

Сокращенное название сред Компоненты: ГЦЖ ГЦЖ лхцж гхце ВИРГЖ-2 внитип

вода дистиллированная, мл 100 100 100 100 100 100

глюкоза, г 3 0,8 — 4 — —

фруктоза, г — — — — 1,8’ 0,3г

лактоза, г _ — 11 — — —

цитрат натрия, г 1,4 2,8 0,089 0,38 — 0,57

натрий глютаминовокислый, г — — — — 2,8 1,67

гидрокарбонат натрия, г — — 0,008 0,05 — —

сульфат аммония, г — — — 0,18 — —

хелатон (трилон Б), г — — 0,1 0,26 — —

желток куриного яйца, мл 20 20 1,6 — — —

спермосан-З, тыс. ед. 75-90 50-75 25-30 25-30 — —

Температура хранения разбавленной спермы, °С 2-5 2-5 2-5 16-20 2-4 —

Максимальная продолжительность хранения, ч 72 24 48 72 3-4 0,5

* Если нет фруктозы, можно использовать глюкозу в тех же дозах.

миев, уменьшения их проницаемости вводят в состав разбавителей лимонно¬кислый натрий (цитрат), являющийся естественным буфером спермы (его pH 7,8—8,0). Поскольку в сыворотке спер¬мы жеребца и хряка содержится много солей, то в разбавитель для спермы таких животных лимоннокислый натрий не вводят или добавляют его в очень незначительном количестве.

Один из первых факторов внешней среды, действующих на свежую спер¬му, — температура. При ее понижении (особенно ниже 18 °С) спермии подвер¬гаются температурному шоку и гибнут. Для ослабления шока в разбавитель вводят желток куриного яйца, содержащий около 7 % неокисленного лецитина. Он одновременно является питательным веществом, предохраняющим расходование липидов цитоплазмы спермиев. В яйце со¬держатся полный набор незаменимых аминокислот, углеводы, жироподобные вещества, пигменты, микроэлементы, витамины. Для предупреждения отрицательного действия микробов на спермиев в среду добавляют пенициллин, стрептомицин и белый растворимый стрептоцид или смесь из перечисленных препаратов, выпускаемую под названием «спермо- сан-3», в рекомендуемых дозах . Опыты показали, что до-бавление в среду стрептоцида положительно сказывается на жизнеспособности спермиев, но не приостанавливает рост микробов. Пенициллин задерживает рост микробов, но не повышает оплодотворяемое. Стрептомицин, угнетая рост микробов, в больших дозах отрицательно влияет на спермиев.Нецелесообразно вводить в среду для спермы хряка в качестве загус¬тителя поливиниловый спирт, он снижает эффек¬тивность искусственного осеменения.

Среду нужно готовить с учетом того, что ее компоненты делятся на термоустойчивые, которые можно стерилизовать физическими методами (кипячение, автоклавирование), и термочувствительные (желток куриного яйца, глицерин, спермосан), не подвергаемые стерилизации. Сначала растворяют в воде термоустойчивые компоненты и 10 мин стерилизуют в кипящей водяной бане. Остужают до 30—35 °С и добавля¬ют термочувствительные компоненты. Затем среда находится при указанной температуре не более 4 ч в водяной бане или термостате. Остатки неиспользо¬ванных сред выбрасывают.

Перед разбавлением среда и сперма должны быть одинаковой температуры.

Дляоценки качества сред ы на чистое предметное стекло помещают каплю проверенной на активность спермы и к ней добавляют 2—3 капли среды, пробу накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Понижение активности спермиев — свидетельство непригодности, а отсутствие заметных изменений в сперме слу-жит основанием для использования разбавителя.

Хороший разбавитель для спермы быка, жеребца, хряка и других произво-дителей — свежее молоко., молочная среда обладает большой буферностью, понижает степень раздражения спермиев, увеличивает вязкость разбав¬ленной спермы и имеет концентрацию водородных ионов (pH), сходную с ма-точной слизью. Молочный разбави¬тель повышает переживаемость спер¬миев, их оплодотворяющую способ¬ность, которая при температуре О °С со¬храняется до 7 сут. Поэтому оплодотво- ряемость коров, кобыл при применении молочного разбавителя выше, чем при употреблении желточно-цитратных разбавителей. В качестве разбавителя можно применять и сухое молоко, взя¬тое в количестве 10 г на 100 мл дистиллированной воды.

Из многочисленных сред для разбавления и хранения спермы хряков при температуре 16—20 °С в настоящее вре¬мя используют глюкозохелато цитратную и глюкозохелатоцитратносульфатную. Один из основных компонентов этих сред — хелатон , снижая обменные процессы в сперме, увеличивает срок переживаемое спермиев и предохраняет их акросому и оболочку от разрушения. Он тормозит размножение микробов, а на некоторые из них оказывает бактериоли- тическое действие. Наибольшая пережи¬ваемость спермиев хряка отмечается при разбавлении спермы 1: 3.

При осеменении свиней фракционным методом ряд сред, назначение которых — заполнить полости рогов матки, поэтому их называют заполнителями: глюкозо¬солевой (30 г глюкозы и 4,5 г NaCl на 1 л дистиллированной воды); солевой (9 г NaCl на 1 л дистиллированной воды); молочный (свежий обрат). Эти заполнители оказывают на слизистую оболочку матки более благоприятное действие, чем желточно-цитратные и другие раз¬бавители.

В Болгарии предложен медовый разбавитель для спермы жеребца, быка и барана. Авторы установили, что 7%-ный вод¬ный раствор меда очень благоприятно действует на спермиев. Добавление в разбавители для спермы быка и барана фосфатов и сульфатов улучшает их каче¬ство.