132. Реакция лизиса, ее модификации, практическое применение.

Многие исследователи давно подметили факт довольно быстрого исчезновения из крови введенных в нее сапрофитов. Учение о бактерицидных свойствах сывороток получило дальнейшее развитие в работах Г. Бухнера, который доказал наличие в нормальной сыворотке бактерицидных свойств к другим микробам (возбудителям брюшного тифа и холеры). Наиболее убедительными были классические опыты Л. М. Исаева и Р. Пфейффера, которые констатировали появление в сыворотке иммунного животного, бактериолизинов. Термины «бактерицидная» и «бактериолитическая» способность сыворотки определяют один и тот же процесс, так как убивающее (бактерицидное) или убивающее и одновременно растворяющее (бактериолитическое) действие зависит не от различных свойств сыворотки, а от особенностей микроорганизмов. Под влиянием бактериолизинов микробы сильно изменяются: лишаются подвижности, их тело разбухает, теряя типичную форму, и постепенно они превращаются в круглые образования (шары) и затем в аморфную массу. При бактерицидном действии сывороток наступает только гибель микробов: при этом они претерпевают сравнительно небольшие морфологические изменения. Явления бактериолиза можно наблюдать в опыте как in vivo (в организме животного), так и in vitro (в пробирке). Для наступления бактериолиза необходимо участие двух веществ. Одно из них, быстро разрушающееся при нагревании до 56° и не обладающее специфичностью, называется комплемент. Другое вещество — антитело (лизины), появляющееся в крови при активной иммунизации, стойкое по отношению к температуре. Лизины способны оказывать свое действие только в присутствии дополнительного фактора — комплемента. Комплемент — это вещество белкового характера, содержащееся в любой свежей сыворотке человека и животных, способствующее лизису (растворению) клеточного антигена (эритроцитов барана, бактерий и т. д.) в присутствии специфической иммунной сыворотки. Он неустойчив, разрушается при температуре 55—56°, при длительном хранении, действии света, энергичном встряхивании, воздействии некоторых химических веществ. Количество его не повышается в течение процесса иммунизации.Принято пользоваться в качестве комплемента свежей сывороткой морской свинки.

133. Реакция бактериолиза, механизм, методы постановки, применении

Бактериолиз — разрушение поверхностных слоев бактериальной клетки с выходом ее содержимого в окружающую среду. Специфический бактериолиз, наступающий под действием антител, используют как диагностическую реакцию. Бактериолиз протекает при обязательном участии следующих трех компонентов: антигена в виде микробной взвеси, специфических антител (бактериолизинов) и комплемента. Бактериолиз может быть вызван также различными физическими агентами,ферментами, бактериофагом как в живом организме, так и в эксперименте вне организма.

Бактериолиз может быть неспецифическим и специфическим. Неспецифический бактериолиз может быть вызван действием различных физических и химических факторов. Специфический Бактериолиз происходит обычно под действием бактериофага (см.) или антител (см.). Бактериолиз при действии антител происходит при участии двух ингредиентов: специфического, содержащегося в иммунной сыворотке (антитела-бактериолизины), и неспецифического, содержащегося в любой сыворотке — иммунной или неиммунной (комплемент). Основной фактор — специфическое антитело, которое сенсибилизирует микробы, изменяет их поверхностные свойства и тем подготавливает их к лизирующему действию комплемента. При воздействии одного из этих факторов лизис микробов не наблюдается. Если к сыворотке, прогретой в течение 30 мин. при t° 56°, прибавить комплемент и затем внести микробы, то после выдерживания смеси в термостате при t° 37° отмечается уменьшение числа жизнеспособных микробов; при микроскопировании висячей капли из указанной смеси наблюдается лизис микробных клеток. О бактериолитическом титре иммунной сыворотки судят по конечному ее разведению, при котором отмечается бактериолитическое действие. Бактерицидную (литическую) силу сывороток определяют по числу колоний, вырастающих в посевах из микробной взвеси, к которой были добавлены иммунная сыворотка и комплемент. Не все виды микробов в одинаковой степени подвержены лизису при воздействии антител и комплемента. Легко лизируются большинство грамотрицательных микробов и холерные вибрионы; грамположительные микробы лизируются с трудом или вовсе не лизируются.

В микробиологической диагностике реакция бактериолиза применяется для: 1) определения вида неизвестного микроба при помощи специфической сыворотки; 2) определения в исследуемой сыворотке наличия бактериолизинов к известному микробу. Исследуемую сыворотку, для разрушения имеющегося в ней комплемента, инактивируют при 56 °С в течение 30 минут.

Под воздействием бактериолизинов в присутствии комплемента микробы теряют подвижность, меняют форму (набухают), распадаются и, наконец, совсем растворяются.

Реакция бактериолизина применяется при холере с целью идентификации вибрионов (р. иммобилизации вибрионов холерными сыворотками) и определения вибриолизинов в сыворотке; при сифилисе (р. иммобилизации трепонем), при лептоспирозе (р. агглютинации-лизиса); при возвратном тифе с целью серодиагностики (р. лизиса).