17.Методы выделения чистых культур аэробных бактерий.

Методы выделения чистых культур:

1. Методы механического разобщения, основаны на разъединении микробов путем последовательного растирания исследуемого материа­ла по поверхности агара.

а) Метод Пастера – имеет историческое значение, предусматривает последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде методом переката

б) Метод Коха – метод пластинчатых разводок – основан на последовательном разведении исследуемого материала мясопептонным агаром с последующей разливкой пробирок с разведенным материалом в чашки Петри.

в) Метод Дригальского – при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2-3 чашки для последовательного посева шпателем.

г) Посев петлей параллельными штрихами.

2. Биологические методы основаны на биологических свойствах возбудителей.

а) Биологический – заражение высокочувствительных животных, где микробы быстро размножаются и накапливаются. В одних случаях, этот метод является единственным, позволяющим вы­делить культуру возбудителя от больного человека (например, при туляремии), в других случаях - он более чувствителен (например, выделение пневмококка на белых мышах или воз­будителя туберкулеза на морских свинках).

б) Химический – основан на кислотоустойчивости микобактерий. Для освобождения материала от сопутствующей флоры, его обрабатывают раствором кислоты. Вырастут только туберкулезные палочки, так как кислотоподатливые микробы погибли под действием кислоты.

в) Физический метод основан на устойчивости спор к нагреванию. Для выделения культуры спорообразующих бактерий из смеси материал прогревают при 80°С и засевают на питательную среду. Вырастут только споровые бактерии, так как споры их остались живыми и дали рост.

г) Метод Щукевича – основан на высокой подвижности вуль­гарного протея, способного давать ползучий рост.

18. Анатоксины, реакция флоккуляции. Практическое применение анатоксинов.

Анатоксины — иммунобиологические препараты, которые получают в результате соответствующей обработки экзотоксинов бактерий; применяют для выработки активного иммунитета у привитых. Возможность использования анатоксинов в целях профилактики возникновения заболеваемости обусловливается тем, что в основе патогенеза многих заболеваний (столбняк, дифтерия, ботулизм, газовая гангрена и др.) лежит воздействие на организм специфических ядовитых продуктов (экзотоксинов), выделяемых возбудителями этих заболеваний. Анатоксины — одни из наиболее эффективных и безопасных препаратов, используемых с целью активной иммунизации людей. Такие анатоксины готовят в виде очищенных, концентрированных препаратов, адсорбированных на геле гидроксида алюминия. Адсорбция анатоксинов на различных минеральных адсорбентах обусловливает резкое повышение эффективности вакцинации. Это объясняется тем, что в месте введения адсорбированного препарата создается депо антигена и замедляется его всасывание.

При дробном поступлении антигена из места инъекции обеспечивается эффект суммации антигенного раздражения, резко повышается степень иммунного ответа. Кроме того, депонирующее вещество вызывает в месте инъекции воспалительную реакцию, что, с одной стороны, препятствует всасыванию антигена и усиливает его депонирующее действие, а, с другой, — служит неспецифическим стимулятором, усиливающим плазмоцитарные реакции в лимфатических тканях организма, которые участвуют в иммуногенезе. Адсорбированные препараты перед применением взбалтывают с целью обеспечения во всем их объёме равномерного распределения активного начала, находящегося в осадке вместе с адсорбентом. На практике наиболее широко применяются дифтерийный, столбнячный и ботулинический анатоксины.

Реакция флоккуляции основана на способности смеси токсина с антитоксической сывороткой в определенных условиях опыта давать помутнение и выпадать в осадок. Основным условием для визуального проявления реакции является эквивалентные соотношения антигена и антитела. Раньше всего реакция наступает там, где количество единиц токсина соответствует количеству единиц антитоксина. Примечательным является также и то, что реакция флоккуляции произойдет, если в качестве антигена используется и анатоксин. Анатоксин – это обезвреженный токсин, который получают из экзотоксина путем обработки его 0,3 – 0,4% раствором формалина при температуре 37-40°С в течение 18-30 дней. В результате такой обработки токсин теряет свои ядовитые свойства, но сохраняет антигенные. Сила анатоксина измеряется в антигенных единицах связывания (ЕС). Реакция флоккуляции используется в вакцинном производстве для титрования анатоксина или антитоксической сыворотки.