45.Перенос генетического материала при помощи векторов.

Вектор–молекула ДНК, способная переносить в клетку чужеродную ДНК и обеспечивать там ее размножение или– включение в геном.Вектор должен содержать:1иметь свойство репликона. 2содержать сайты рестрикции, т.е. участки узнавания д.рестриктаз. 3иметь один или несколько маркирующих генов, по к-м его можно обнаружить.4содержать специфические д.данной клетки промоторы и терминаторы транскрипции.Методы введения генов в бактериальныеклетки:1трансформация;2трансфекция;3трансдукция.Встраивание чужеродного фрагмента ДНК в геном вектора осущ-ся в 2этапа: сначала ДНК вектора разрезается с помощью рестриктазы, а затем в них встраивается чужеродный фрагмент.Сшивание генов ДНК по «липким» концам-ферментом ДНК-лигазой или при помощи линкеров.В качестве векторов исп-т:плазмиды, бактериофаги, мобильные элементы, вирусы животных.Типы векторов:1векторы для клонирования;2экспрессионные векторы;3векторы для трансформации.

46.Методы получения трансгенных животных.Живот-ое к-ое несет чужеродный ген наз-ся трансгеными животными.

Методы:1микроинъекции ДНК в пронуклеус зиготы. Суть метода-введении раствора генных конструкций в мужской пронуклеус зигот(ДНК). Из яйцевода самки извлекают зиготы-в нее водят в нее водят раствор с геном.Д. инъекции чужеродной ДНК в мужской пронуклеус зиготы использ. Плазмиды с конструкциями, включающим промотор и структурный ген.

2.использование ретровирусов в качестве векторов. Ретровирусы - семейство вирусов, генетический материал к-х яв. РНК. Генетич-ая информация передается от РНК к ДНК.

Схема размножения ретровируса:

-синтез ДНК-копии на вирус РНК обратной транскриптазой;

-синез двухцепочной ДНК клеточной ДНК-полимеразой;

-встраивание вирусной двухцепочной ДНК в геном клетки.

3.инъекция трансформированных эмбриональных стволовых клеток в эмбрион.Эмб-ые ствол.клетки получают из бластоцисты мыши. Такие клетки можно размножать, культивировать в пробирках, создавать банки клеток с желат-м генетич-ми своиствами.

47Методы трансформации раст-х клеток.По способу доставки ДНК в клетки растений выделяют 2 типа векторных систем:1.Прямое введение ДНК-вектор в клетки или протопласты.2.используют ферментативный аппарат доставки ДНК агробактерии(двух.доль.раст).

3)Микроинъекции ДНК.

4Электропорация-основан на повышении проницаемости биомембран за счет действия импульсов высокого напряжения. В результате молекулы ДНК проникают в клетки через поры в клеточной мембране.(однод.и двухдольраст)

5) Упаковка в липосомы. Это один из методов, позволяющих защитить экзогенный генетический материал от разрушения нуклеазами растительной клетки. Липосомы – сферические тельца, оболочки которых образованы фосфолипидами.

6) М.биобаллистической трансф.- из самых эффективных методов трансформации однодольных растений. Метод основан на напылении ДНК-вектора на мельчайшие частички вольфрама, которыми затем бомбардируют клетки. Бомбардировка осущ-я с помощью биолистической пушки за счет перепада давления. Часть клеток гибнет, а выжившие клетки трансформируются, затем их культивируют и используют для регенерации растений.

48.Использование микроорганизмов для получения белка.в мире не хватает белковых продуктов, и одним из наиболее реальных путей восполнения яв-ся организация производства белков с помощью м.о. Преимущества микроорганизмов как продуцентов белка состоят в его высоком содержании в биомассе и высокой скорости роста микроорганизмов. М.О.в 10–100 тысяч раз быстрее синтезируют белок, чем животные.Источником получения пищевого белка яв-ся биомасса различных м.о.(бактерий, дрожжей, грибов, водорослей). Кроме высокого содержания белка микробная биомасса содержит:жиры, нуклеиновые кислоты, витамины и минеральные компоненты.

Д.получения белка одноклеточных м.о. используют субстраты:парафины нефти,метан, водород, метанол, этанол, уксусную кислоту, углекислый газ, молочную сыворотку, крахмал.