- •40.Ферменты генетической инженерии.
- •41Конструирование рекомбинантных днк.
- •42.Последовательность генно-инженерных процессов.
- •43.Методы получения генов.
- •1Рестрикционный
- •2Синтез:-Химическ.-ферментативный.-химико-ферментатив.
- •45.Перенос генетического материала при помощи векторов.
- •49Преимущества получения белка микробным путем.
- •54Одноступенчатый и двухступенчатый синтез аминокислот.
- •61. Приготовление заквасок в специальных лабораториях
- •62. Приготовление и применение заквасок в молочной промышленности
- •63Причины потери активности закваски.
- •67Изменение микрофлоры мяса и мясопродуктов при посоле.
- •69Биотехнология колбасных изделий.
- •70Применение микробиол-ких заквасок и ферментных препаратов в хлебопекарной отрасли.
- •74Биотрансформация вторичных сырьевых ресурсов перерабатывающих предприятий.
42.Последовательность генно-инженерных процессов.
Последовательность генно-инженерных процессов.
Получение гена.
Встраивание гена в векторы и их размножение – клонирование.
Перенос гена в клетки реципиентов.
Склиринг – отбор бактерий или клеток в которые встроился ген.
Встраивание гена в ДНК реципиента и его экспрессия (функционирование).
Вылавливание генных продуктов из «грязной» смеси.
43.Методы получения генов.
1Рестрикционный
2Синтез:-Химическ.-ферментативный.-химико-ферментатив.
Рестрикционный метод,получение генов с помощью специфических эндонуклеаз - рестриктаз. С помощью рестриктаз расщепляют ДНК бактерий другого штамма или клетки-хозяина.
Рестриктазы гидролизируют ДНК по определенным последовательностям, называемым сайтами рестрикции. Каждая из рестриктаз узнает свой сайт рестрикции и разрезает ДНК.Фрагменты ДНК, имеющие одинаковые «липкие» концы, могут соединяться др. с другом с помощью ДНК-лигазы,сайт рестрикции восстанавливается. рестриктазы не «выстригают» полностью ген и его нужно либо достраивать химическим путем, либо отщеплять лишние нуклеотидные последовательности.
Химический.Расшифровав последовательность аминокислот в белке, и используя генетический код,определяют последов-сть нуклеотидов ДНК на участке гена и производят его синтез из нуклеотидов при помощи фермента полимераза-1.
Ферментативный синтез возможен после открытия фермента обратной транскриптазы или ДНК-ревертазы, выделенной из онкогенных вирусов. Ревертазы могут синтезировать комплементарную цепь ДНК (к-ДНК) на РНК-матрице.
Химико-ферментативный синтез.Химическим путем синтезируют олигонуклеотиды:линкеры, адаптеры, праймеры, промоторы, а гены синтезируют ферментативным методом.Линкеры-короткий двухцепочечный олигонуклеотид, содержащий сайты узнавания д.ряда рестриктаз. Адаптеры-линкеры, содержащие более одного сайта узнавания рестриктазой, он предназ. д.соединения фрагментов с несовместимыми концами. Праймеры-короткие одноцепочечные фрагменты, комплементарные началу или концу гена. Промотор-фрагмент ДНК, узнаваемый РНК-полимеразой.
44.Химический синтез гена. Кто и когда осуществил его впервые?Химический синтез.Расшифровав последовательность аминокислот в белке, и используя генетический код, определяют последовательность нуклеотидов ДНК на участке гена и производят его синтез из нуклеотидов при помощи фермента полимераза-1. в 1969 г. Корана впервые синтезировал участок молекулы ДНК, кодирующий аланиновую т-РНК, а в 1977 г. Бойер синтезировал ген соматостатина человека, а затем и ген инсулина.В 1977г. В. Гилбертом,Ф. Сэнгером был предложен метод секвенирования, т.е. распознавания последовательности нуклеотидов в фрагментах нуклеиновых кислот. Метод химического синтеза генов оказался трудоемким и малоэффективным. Затем появились быстрые и простые методы синтеза сравнительно длинных олигонуклеотидов с определенной, заранее заданной, последовательностью нуклеотидов. Теперь легко синтезировать последовательность до 100 нуклеотидов.