Как найти нужный клон ?
ПОДХОДЫ К АНАЛИЗУ БИБЛИОТЕК
Скрининг с помощью гибридизации
Иммунологический скрининг
Скрининг по активности белка
Скрининг с помощью
гибридизации
Выбор зонда
Известна последовательность целевого гена
Известна последовательность родственного гена
(генов)- Если ожидается, что гомология высокая, то в качестве зонда
может быть выбран олиго- или полинуклеотид с последовательностью родственного гена.
- На основании сравнения группы родственных генов в
качестве зонда может быть выбран участок с
Известна последовательность целевого белка
высококонсервативной последовательностью. - Если известна последовательность или часть
последовательности целевого белка, то на ее основе может быть сконструирован вырожденный зонд.
- На основании сравнения группы родственных белков может быть выбран участок с высококонсервативной
последовательностью и на его основе сконструирован вырожденный зонд.Вырожденный зонд
Аминокислотная |
Нуклеотидная |
|
Количест |
|
последовательно |
последовательнос |
во |
|
|
сть |
ть |
|
варианто |
|
Met-Gln-Lys-Phe-Asn ATG-CAA/G-AAA/G-TTT/C-AAT/C |
в |
16 |
||
Met-Ser-Leu-Gly |
ATG-ТСТ/C/A/G-СТТ/C/A/G-GGТ/C/A/G |
|
144 |
|
|
AGТ/C |
TТA/G |
|
|
|
|
|
|
|
Иммунологический скрининг
Скрининг по активности
Протеазыбелка
. Молочный агар.
Ingredients Gms /
Litre
Skim milk powder 28.0
Casein hydrolysate 5.0
Yeast extract |
2.5 |
Agar |
15.0 |
Final pH ( at 25°C) 7.0±0.2
Скрининг по активности
белка
ДНКазный агар
Formula / Liter
Enzymatic Digest of
Casein .................. |
|
15 g |
Enzymatic Digest of Animal |
||
Tissue......... |
5 g |
|
Sodium |
|
5 g |
Chloride .................................... |
|
|
Deoxyribonucleic |
2 g |
|
Acid ........................... |
|
|
Test Procedure |
|
|
1. Inoculate plates
Agar.................................................
...... 15 g
2 Incubate plates at 35 ± 2°C for Final pH: 7.3 ± 0.2 at 25°C
18 – 24 hours and up to 48 hours.
3.Flood plates with 1 N HCl.
4.Observe for clearing around the spot or streak.
Скрининг по активности
зы. Агар со спиртовымбелкасиним (spirit blue a
триглице |
глицер |
жирн |
ые |
||
рид |
ин |
кисло |
Спиртовой синий – это |
Spirit blue |
ты |
|
||
индикатор изменяющий |
|
|
цвет со светло лилового |
|
|
на ярко синий в кислой |
|
|
|
среде |
|
+ СУБСТРАТ (ЛИПАЗНЫЙ РЕАГЕН |
|||
ВАЯ СРЕДА (1000 мл) |
||||||
|
Ingredients |
Gms / |
|
|
The lipase reagents recommended as |
|
|
Litre |
|
|
|
the lipid source are cotton seed meal, |
|
|
Casein enzymic hydrolysate |
|
|
cream, olive oil etc. A satisfactory |
|
|
|
10.00 |
5.00 |
|
|
emulsion can be prepared by dissolving |
|
|
Yeast extract |
|
|
1 ml polysorbate 80 in 400 ml warm |
|
|
|
Spirit blue |
0.15 |
|
|
distilled water, adding 100 ml cotton |
|
|
Agar |
17.00 |
|
|
seed or olive oil and agitating |
|
Скрининг по активности
Амилазы. Гидролизбелка крахмала.
КРАХМАЛ
амилопектин
амилоза
Негидролизованный крахмал взаимодействует с йодом (используют раствор Люголя: KI + I2 → KI3), формируя
окрашенный комплекс.
Если крахмал гидролизован, то формируются прозрачные зоны.