- •Лабораторная диагностика вирусных болезней у животных
- •Вирусологическая лаборатория и правила работы с вируссодержащим материалом
- •Лабораторные методы диагностики вирусных болезней
- •I. Вирусологический метод
- •II. Серологический метод
- •Взятие патологического материала для лабораторной диагностики и его подготовка
- •1. Микроскопия мазков из патматериала в обычном
- •1) Заражение на хорионаллантоисную оболочку. Используют этот метод заражения при выделении и культивировании нейротропных,
- •1. Методы осаждения вирусов химическими веществами:
- •Главный опыт рск при определении типа вируса ящура
Главный опыт рск при определении типа вируса ящура
Компоненты реакции |
Стандартные сыворотки типов |
Без сыворотки |
||||
О |
А |
С |
САТ-1 |
Азия-1 |
||
Сыворотки в рабочем титре (удвоенный предельный титр) |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
— |
Испытуемый антиген (цельный или в разведении) |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Комплемент, 2 дозы |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Физиологический раствор |
- |
- |
- |
- |
- |
0,2 |
Водяная баня 20 минут при 37-38° С |
||||||
Гемолитическая система |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
Водяная баня 30 минут при 37-38° С |
||||||
Результат |
++++ |
- |
- |
- |
- |
- |
В данном примере антиген относится к типу О.
Одновременно ставят контроли: со стандартной позитивной сывороткой без антигена, с испытуемым антигеном без добавления сыворотки, с диагностической стандартной позитивной сывороткой и стандартным антигеном.
Учет реакции проводят сразу же после прохождения реакции в гемолитической системе (это предварительный учет) и через несколько часов, т. е. после оседания эритроцитов (это окончательный учет). При повторном учете оценку реакции дают в крестах (++++, +++, ++, +, —), при этом во внимание берут наличие осадка эритроцитов на дне и цвет надосадочной жидкости. Полная задержка гемолиза (жидкость прозрачная, бесцветная, на дне осадок эритроцитов) расценивается как положительная и обозначается ++++, если жидкость желто-розовая с осадком эритроцитов +++ и т. д. Если жидкость красная прозрачная и нет эритроцитов в осадке, оценивают «—».
В последнее время для постановки РСК успешно применяют технику постановки по микрометоду. Ставят реакцию при этом методе в объеме 0,125 мл и каждый компонент берут в объеме 0,025 мл.
Схема и этапы постановки реакций
|
На ку льтурах тканей |
|
|||
РГА |
РЗГА |
РИГА |
РГАд |
РЗГАд |
РСК |
|
(РТГА) |
(РПГА) |
|
|
|
|
стерильность (в боксе) |
|
|||
v + э-» |
AT + V |
1)У?+ЭАт -> |
(KT+V)-» |
(KT+V)-» |
(Аг+Ат+К) |
контакт 30- |
контакт* |
контакт |
контакт!-Э -> |
контакт^ Ат |
->баня 20' 37° |
40'->учет |
Э-> контакт |
учет |
контакт |
->контакгь |
+(Г+Э)->баня |
I) Капельный |
->учет |
2)Ат (сыв. в |
учет |
Э-> контакт |
20' 37°->учет |
метод на стекле |
|
разведении)? |
|
-»учет |
сразу и когда |
2) пробирочный |
|
+Эаг-> |
|
|
осядут (по |
|
|
контакт-» |
|
|
лизису Э) |
|
|
учет |
|
|
|
I) Vb |
1)Сыворотка |
1) VB |
КТ заражают |
(KT+V)-» |
1) Сыворотка |
разведении 1:10 |
(Ат) в |
разведении |
V, контакт |
контакт |
инактивнр 1:5 и |
и > 2- кратно по |
разведении |
1:10 и > по 0.5 |
неск. часов |
неск. часов |
1:10 по 0 2 мл |
0.5 |
1:10 и далее |
+ 0.1 мл ЭАт |
37°+0.2 мл |
37°-» слить |
2) Аг - 0.2 |
2) 1% Э по 0.5 |
2- кратно |
(эритроцит. |
0.5%Э |
среду-» |
3) К - 0.2 |
3)Контакт 40-60' |
по 0.25 |
диагностикум) |
контакт 15- |
промьпъ |
4) Баня 20' 37° |
4) Учет |
2) V 4АН по |
контакт |
20' 37°-» учет |
буф р-ром |
5) Г - 0.2 |
1 АЕ титр |
0.25 |
->учет |
под |
Хенкса-Ю.2 |
6) Э - 0.2 |
Это последнее |
3) Контакт |
2) Ат? В |
микроскопом |
мл Ат и 0.8 |
7) Баня 20' 3Г |
разведение на |
40-60' 37° |
разведении от |
|
Хенкса-» |
8) Учет сразу и |
++ |
4) Э 1% по |
1 10 и > по 0 .5 |
|
контакт 40- |
когда осядут Э |
|
0.5 |
Ш Эдг |
|
60' ЗГ+0.2 |
по лизису Э |
|
5)Контакт |
-контакт |
|
мл 0.5%Э-> |
|
|
40-60' |
->учет |
|
контакт 15- |
|
|
6)Учет по |
|
|
20' 37°-» |
|
|
задержке |
|
|
учет под |
|
|
ГА |
|
|
микроскопом |
|
|
Титр Ат |
|
|
|
|
Примечания:
V — вирус
Ат — антитела
Э — эритроциты
КТ — культура тканей
К — комплемент
Г — гемолизин
Содержание
Лабораторная диагностика вирусных болезней у животных 1
Учебное пособие (издание третье, дополненное) 1
ин = тут2 65
Содержание 88
