Лабораторные методы диагностики вирусных болезней

Современные методы лабораторной диагностики такие, как выде­лите вирусов на культурах тканей и на куриных эмбрионах, биопро­ба на лабораторных животных, люминесцентная и электронная мик­роскопии, методы иммуноферментного анализа, постановка различ­ных серологических реакций (с учетом всех других методов диагнос- | и ки) позволяют точно поставить диагноз при большинстве вирусных заболеваний животных.

Лабораторные методы диагностики вирусных болезней включают:

I. Вирусологический метод

(вируссодержащий материал на наличие вируса) Схема исследований:

1. Обнаружение вируса

   1. микроскопией мазков (лучше отпе­чатков) на тельца-включения (ТВ)

а) обычная

б) люминесцентная

• метод флуорохромирования (МФ)

• методы флуоресцирующих антител (МФА)

в) электронная

2. индикация вирусов - РГА, РГАд

   2. Выделение вируса заражением чув- твчтелтых 0-5 пассажей)'.

а) лаб. животных, животных

б) куриных эмбрионов (КЭ)

в) культур тканей (КТ)

Идецщифищцин вируса (опредш- ние вида), типизация (определение тццд, варианта) и дифференциации*

Постановкой серологических реакций с известными биофабричны­ми диагностическими иммунными сыворотками.

II. Серологический метод

(испытуемые сыворотки на наличие

антител -Am), постановка реакций с известными био­фабричными вирусными антигенами

РН (на лаб. жив., на КЭ и на КТ) РСК

РИД(РИД) РИЭОФ МФА ИФА

РЗГА(РТГА)

РИГА

РЗГАд

Взятие патологического материала для лабораторной диагностики и его подготовка

При взятии вируссодержащего патологического материала большое значение имеет правильность выбора материала и его свежесть. Виру­сы очень чувствительны к нагреванию и гниению. Поэтому материал нужно брать от свежих трупов (не позже 12 часов после гибели), а еще лучше от забитых клинически больных животных. При выборе мате­риала учитывают тропизм вирусов и клиническое проявление бо­лезни, вид и возраст животного, стадию течения болезни, наличие видимых изменений в органах и тканях и т. д.

При жизни животного в качестве вируссодержащего материала мо­жет служить: афты и их содержимое (ящур), пустулы (оспа), истече­ния из носа и глаз (инфекционные заболевания и др.), слизь и смывы со слизистых, моча (чума свиней и др.), фекальные массы (при вирус-

ных энтеритах), кровь и лимфа (при пантропных инфекциях), кусочки органов, взятые биопсией, и т. д. Посмертно кроме указанных материа­лов можно брать кусочки паренхиматозных и других органов (печень, селезенка, почки, мозг, лимфоузлы и др.). Трупы мелких животных направляют обычно целиком.

Берут материал по возможности стерильно с помощью стерильно­го инструмента и в стерильную посуду. Если лаборатория рядом, ма­териал отправляют неконсервированным и обычно в термосах со льдом. Если же материал нужно транспортировать далеко, то его обычно кон­сервируют и тщательно упаковывают (особенно, если отправляют по почте или самолетом). Кусочки органов консервируют в 50% стериль­ном глицерине или насыщенном растворе хлористого натра и допол­нительно помещают в термос со льдом. Жидкий материал консерви­руют замораживанием и сохраняют при -20° С (в термосе с сухим льдом). Пересылка материала сопровождается направлением, в кото­ром сообщаются эпизоотологические и клинические данные, картина патологоанатомических изменений.

Присланный в лабораторию материал принимают и, по возможно­сти, сразу же начинают исследовать, а, если это невозможно, то мате­риал хранят до исследования в холодильнике при -20° С (в морозил­ке). Подготовка материала к вирусологическим исследованиям заклю­чается в следующем. После осмотра органов и тканей, если материал был консервирован, их отмывают стерильным физраствором от кон­серванта. Если труп поступил целый, его осматривают и затем прово­дят вскрытие, измененные органы тщательно осматривают и извлека­ют в стерильные баночки или чашки Петри. При бешенстве часто по­ступает голова трупа, которую также сначала осматривают, а затем вскрывают и извлекают мозг. Жидкий материал проверяют на бакте­риальную загрязненность микроскопией мазков и посевом на среды (МГ1Б, МПА, среду Китт-Тароцци и среду Сабуро) и при необходи­мости обрабатывают антибиотиками (пенициллин и стрептомицин по 500-2000 ЕД на мл среды в зависимости от степени загрязненности).

Из кусочков органов готовят суспензию. Для этого из присланных органов и тканей берут небольшие кусочки (1.0-1.5 г) и помещают в стерильную ступку, где после измельчения ножницами тщательно ра­стирают до кашицеобразной массы со стерильным песком или стек­лом. !1атем добавляют стерильный физраствор в соотношении 1:10 или 1:5 и получается суспензия. Ее переносят в центрифужные пробирки и туда же вносят вышеуказанные антибиотики в дозе 500-2000 ЕД на 1 мл суспензии. Суспензию в пробирках 2-3 раза замораживают (при -20°-50°С) и отстаивают при комнатной температуре или в термостате при 37° С. При этом происходит дополнительное разрушение клеток и освобождение вируса. Затем пробирки с суспензией центрифугируют 15-20 минут при 3000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость про­веряют на стерильность посевом на среды в аэробные и анаэробные условия и затем используют как вируссодержащий материал для за­ражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культур тка­ней и для постановки серологических реакций в качестве антигена. Од­новременно из исходного патологического материала готовят мазки или мазки-отпечатки, которые исследуют на наличие телец-включе­ний и вируса в клетках после специальной окраски под обычным мик­роскопом или применяют люминесцентную микроскопию с исполь­зованием иммунофлуоресценции (флуоресцирующие антитела). При необходимости можно из органов готовить гистосрезы и исследовать их гистологически (например, при бешенстве).

Микроскопический метод исследования