8. Питательные среды. Требования, предъявляемые к питательным средам.

Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.

Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые катализируют метаболические процессы микробной клетки (витамины группы В, никотиновая кислота и др.).

Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их приготовления используют экономически рентабельное непищевое сырье.Сухие питательные среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют относительно стандартный состав.

Требования:

1. Питательная ценность и сбалансированность

2. Стерильность

3. Оптимальное значение активности воды (0,95..)

4. Оптимальный PH (7,2-7,4)

5. Оптимальные ок-вост потенциалы

6. Оптимальное значение вязкости

-Агар Эндо (Состав: Питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар)

Дифференцирующий фактор - лактоза

Индикатор - фуксин-сернистый реактив (фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия)

 Принцип действия: при расщеплении лактозы в питательной среде накапливаются кислые метаболиты. В кислой среде фуксин высвобождается и окрашивает лактозоположительные колонии в красный цвет. При интенсивном кислотообразовании колонии приобретают металлический блеск

Лактозонегативные колонии бесцветные или окрашенные в цвет среды (бледно розовые)

 Назначение: выделение и дифференцировка по лактозному признаку энтеробактерий)

-Кровяной Агар (Состав: питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар)

Дифференцирующий фактор - кровь (эритроциты); Индикатор - нет

 Принцип действия: кровь является фактором роста, необходимым для многих требовательных микроорганизмов

Некоторые микроорганизмы обладают гемолитической активностью и способны образовывать колонии, окруженные зоной гемолиза.

Таким образом среда позволяет дифференцировать микроорганизмы по наличию и типу гемолиза

 Назначение: выделение и дифференцировка микроорганизмов по гемолитической активности. Выделение и культивирование требовательных микроорганизмов.

- Солевой Агар (Состав: питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар)

Элективный фактор - 10% хлорида натрия

Принцип действия: высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост большинства микроорганизмов. Стафилококки при концентрации соли 10% не подавляются и формируют на среде изолированные колонии.

 Назначение

Выделение стафилококков с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры.

- Желточно-солевой (Состав: питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар) Дифференцирующий фактор - лецитин (эмульсия куринного желтка)

Элективный фактор - 10% хлорида натрия Индикатор - отсутствует

 Принцип действия

Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост большинства микроорганизмов. Стафилококки при концентрации соли 10% не подавляются. 

Наличие в среде лецитина позволяет дифференцировать стафилококки по наличию лецитовителазы. При расщеплении лецитина образуются нерастворимые продукты, выпадающие в толще среды вокруг колоний, образуя "перламутровую" зону.

 

Назначение

Выделение стафилококков и дифференцировка по лецитовителазному признаку (S.aureus - lec+, остальные - lec-) с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры.

-Агар Плоскирева (Состав: питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар)

Дифференцирующий фактор – лактоза- элективный фактор - соли желчных кислот

Индикатор - нейтральный красный Принцип действия:

Соли желчных кислот  подавляют рост сопутствующей микрофлоры. Поскольку полного подавления не происходит, колонии вырастающих микроорганизмов можно дифференцировать по способности расщеплять лактозу. В питательной среде накапливаются кислые метаболиты. В кислой среде нейтральный красный окрашивает лактозоположительные колонии в красный (брусничный) цвет. 

 Назначение

Выделение лактозонегативных патогенных энтеробактерий (сальмонеллы и шигеллы)

-Солевой бульон (Состав: питательная основа - питательный бульон (мясо-пептонный бульон)Элективный фактор - 10% хлорида натрия

 Принцип действия

Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост большинства микроорганизмов. Стафилококки при концентрации соли 10% размножаются. Если в исходном материале стафилококков было мало, то после инкубации их концентрация увеличится и при высеве из накопительной среды на плотную мы получим рост колоний стафилококков.

 Назначение

Накопление стафилококков с одновременным подавлением сопутствующей микрофлоры.

-Сахарно-кровяной Агар (Состав: питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар) Дыхательный субстрат – глюкоза Редуцирующий фактор - кровь (гемоглобин эритроцитов)

 Принцип действия

Глюкоза является дыхательным субстратом, используемым анаэробами в энергетических процессах

Гемоглобин, содержащийся в эритроцитах, связывает токсичные формы кислорода, понижая окислительно-восстановительный потенциал среды

Для обеспечения роста строгих анаэробов чашки необходимо инкубировать в бескислородной атмосфере.

Назначение

Выделение чистой культуры облигатно анаэробных бактерий.

-Тиогликолевая (среда контроля стерильности) Состав

Питательная основа - питательный бульон (мясо-пептонный бульон) + 0,1% агар-агара

Дыхательный субстрат – глюкоза Редуцирующий фактор - тиоловые соединения (тиогликолят натрия и цистеин)

 Принцип действия

Глюкоза является дыхательным субстратом и используется в энергетических анаэробных процессах.

Тиоловые соединения связывают токсичные формы кислорода и снижают окислительно-восстановительный потенциал среды.

Небольшое количество агар-агара повышает вязкость среды и уменьшает насыщение среды кислородом в результате конвекции.

Назначение

Накопление анаэробных микроорганизмов.

-среда Вильсона-Блер Состав питательная основа - питательный агар (мясо-пептонный агар) Дыхательный субстрат – глюкоза Редуцирующий фактор - сульфит натрия

Индикатор - хлористое железо (индикатор на серводород)

 Принцип действия

Глюкоза является дыхательным субстратом и используется в энергетических анаэробных процессах.

C.perfringens восстанавливает сульфит натрия до сульфида, который, взаимодействуя с ионами железа образует черное нераствориемое соединение - сульфид железа.

 Назначение

Обнаружение сульфитредуцирующих клостридий (в первую очередь Clostridium perfringens)