- •Лабораторная работа №2 методы исследования в биохимии Фотометрия
- •1. Принцип и техника колориметрирования. Устройство и правила работы на кфк-2
- •1.Устройство фотоэлектроколориметра кфк-2
- •Выбор светофильтра
- •3. Подбор кювет
- •4. Общая схема прибора и обозначения
- •5. Правила работы на спектрофотометрах или фотометрах
- •2. Определение общего белка по биуретовой реакции
- •Экспериментальная часть
- •3. Рефрактометрический метод определения белка в молоке
- •Экспериментальная часть
1.Устройство фотоэлектроколориметра кфк-2
Колориметр фотоэлектрический концентрационный (КФК-2) предназначен для количественного определения веществ в окрашенных растворах по их оптической плотности или коэффициенту светопропускания в диапазоне волн 315-980 нм. КФК-2 состоит из оптического блока (передняя часть прибора), где находятся осветитель, светофильтр, оптика, кюветное отделение, фотометрическое устройство и регистрирующий прибор, и блока питания (задняя часть), где расположены стабилизатор напряжения с выпрямителем и силовой трансформатор.
Источником света в колориметре служит галогенная лампа. Приемниками излучения являются фотоэлемент Ф-26 для работы в диапазоне волн 315-540 нм и фотодиод ФД-24К для работы в специальном диапазоне 590-980 нм.
Световой поток лампы с помощью специальных устройств конденсируется, усиливается и проходит через светофильтр, кювету с исследуемым раствором и падает на приемник излучения. При этом световое излучение преобразуется в электрические сигналы, которые подаются на измерительный прибор. Показания микроамперметра пропорциональны световому потоку, проходящему через исследуемый раствор.
Выбор светофильтра
При проведении фотоэлектроколориметрии следует учитывать, что в данном методе используется монохроматический свет различных длин волн. Для преобразования полихроматического света в монохроматический используются светофильтры. В КФК-2 имеется набор из 11 светофильтров. Использование конкретного светофильтра позволяет пропускать через раствор лучи определенной длины, поглощение которых наиболее характерно для исследуемого вещества. Обычно эффективная длина волны и цвет светофильтра указаны в применяемом методе. Если же такой ссылки нет, то выбрать нужный светофильтр можно с помощью таблицы:
Окраска исследуемого раствора |
Цвет нужного светофильтра |
Длина волны пропускаемого света, нм |
Желтая |
синий |
420 – 450 |
Оранжевая |
синий |
430 – 460 |
Красная |
зеленый |
460 – 500 |
Пурпурная |
зеленый |
490 – 530 |
Синяя |
оранжевый |
590 |
Сине-зеленая |
красный |
600 – 650 |
Голубая |
красный |
750 |
Сине-фиолетовая |
красный |
750 |
Примечание. Некоторые растворы одинакового цвета могут избирательно поглощать лучи с различной длиной волны. Поэтому при подборе светофильтра желательно знать спектр поглощения исследуемого вещества, причем выбор его осуществляют таким образом, чтобы он пропускал лучи с длиной волны, максимально поглощаемой исследуемым раствором. Таким образом, при выборе светофильтра оптимальной длиной волны окажется та, при прохождении которой через исследуемый раствор оптическая плотность будет максимальной.
