Ферменты микроорганизмов. Дифференциально-диагностические среды. Бактериологический метод исследования.

1. Культуральные свойства микроорганизмов. Значение культуральных признаков в определении вида микробов.

К культуральным (или макроморфологическим) свойствам относятся характерные особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах. На поверхности плотных питательных сред, в зависимости от посева, микроорганизмы могут расти в виде колоний, штриха или сплошного газона.

Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток). В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды или в толще ее), различают поверхностные, глубинные и донные колонии.  Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются разнообразием: они видоспецифичны и их изучение используется для определения видовой принадлежности исследуемой культуры.  При описании колоний учитывают следующие признаки (для твёрдых питательных сред):

1.) Размер колоний: 4-6мм – крупные, 2-4мм – средние, 1-2мм – мелкие, меньше 1мм – микроскопические.

2.) Форма колоний: округлые, неровные (неправильные), специфические (львиная грива или цветок маргаритки).

3.) Прозрачность: прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные.

4.) Профиль колонии (см. сбоку): плоский, выпуклый, куполообразный, кратерообразный.

5.) Пигмент (окраска в питательной среде).

6.) Консистенция (нужно взять петлю и прикоснуться к среде): мягкая (прогибается), слизистая (тянется), сухая (крошится).

7.) Структура колонии (чашку под микроскоп): зернистая, волокнистая, гомогенная (однородная).

8.) Поверхность: гладкая, шероховатая.

9.) Характер края: ровный, волнистый, фестончатый.

Для жидких питательных сред:

1.) Равномерное помутнение.

2.) Придонно-пристеночный рост (если встряхнуть прозрачную среду, то можно заметить осадок: хлопья, зёрна).

3.) Плёнка (нужно встряхнуть среду): нежная, грубая.

Глубинные колонии чаще всего похожи на более или менее сплющенные чечевички (форма овалов с заостренными концами), иногда комочки ваты с нитевидными выростами в питательную среду. Образование глубинных колоний часто сопровождается разрывом плотной среды, если микроорганизмы выделяют газ.

Донные колонии имеют обычно вид тонких прозрачных пленок, стелющихся по дну.  Особенности колонии могут изменяться с возрастом, они зависят от состава среды и температуры культивирования.  По температурному оптимуму роста выделяют три основные группы микроорганизмов.

1.) Психрофилы - растут при температурах ниже +20 градусов Цельсия.

2.) Мезофилы - растут в диапазоне температур от 20 до 45 градусов (часто оптимум - при 37 градусах С).

3.) Термофилы - растут при температурах выше плюс 45 градусов.

Краткая характеристика питательных сред.

По консистенции выделяют жидкие, плотные (1,5- 3% агара) и полужидкие (0,3- 0,7 % агара) среды.

Агар - полисахарид сложного состава из морских водорослей, основной отвердитель для плотных (твердых) сред. В качестве универсального источника углерода и азота применяют пептоны - продукты ферментации белков пепсином, различные гидролизаты - мясной, рыбный, казеиновый, дрожжевой и др.

По назначению среды разделяют на ряд групп:

- универсальные (простые), пригодные для различных нетребовательных микроорганизмов (мясопептонный бульон - МПБ, мясопептонный агар - МПА);

- специальные - среды для микроорганизмов, не растущих на универсальных средах (среда Мак - Коя на туляремию, среда Левенштейна - Иенсена для возбудителя туберкулеза);

- дифференциально- диагностические - для дифференциации микроорганизмов по ферментативной активности и культуральным свойствам ( среды Эндо, Плоскирева, Левина, Гисса);

- селективные (элективные) - для выделения определенных видов микроорганизмов и подавления роста сопутствующих - пептонная вода, селенитовая среда, среда Мюллера.

По происхождению среды делят на естественные, полусинтетические и синтетические.