Условия получения суспензии клеток

Операция	Среда	Термостатирование		Центрифугирование
		Температура,ºС	Продоолжительность,ч	Частота вращения центрифуги, с-1	Продолжительность, мин
Получение культуры	Гидролизованное молоко с 2,5 % дрожжевого автолизата	25 или 30	17-18	-	-
Наращивание клеток	То же	25 или 30	4-6	-	-
Очистка клеток	Дистиллированная вода	-	-	313-523	10-15

Колбочку, содержащую 2 мл суспензии клеток, помещают на качалку в термостат и выдерживают там определенное время. Для снятия остаточного действия мутагена суспензию клеток центрифу­гируют. Надосадочную жидкость сливают, клетки ресуспендируют в 100 мл бульона (гидролизованное молоко с 2,5 % дрожжевого автолизата), подращивают в термостате при оптимальной температуре роста.

Затем суспензию клеток высевают на плотную питательную среду (глубинный или поверхностный посев). Разведение суспензии берут из такого расчета, чтобы на чашке вырастало 20-30 колоний. Чашки с посевами выдерживают в термостате, а затем дополнительно при комнатной температуре. Выделение колоний, исследование вариантов и отбор активных вариантов проводят так же, как и при комбинированном воздействии этиленимина и УФ-лучей.

Среди активных вариантов, полученных при комбинированном воздействии этиленимина и УФ-лучей и воздействии НЭМ, отбирают мутанты, имеющие гомогенную популяцию клеток (коэффициент вариации до 10 %). Эти мутанты являются наиболее стойкими к сезон­ным изменениям качества молока и ценными для использования в заквасках. Отбирают мутанты, свертывающие молоко через 3-4, 5 ч и образующие плотную колющуюся консистенцию и чистый кисломолочный вкус.

НЭМ является летучим веществом, раствор которого нестоек. Навеску НЭМ следует брать на аналитических весах; раствор приго­товляют перед употреблением и не хранят. Раствор НЭМ отбирают пипеткой с грушей или опусканием пипетки в раствор.

Комбинированное воздействие нитрозосоединений и ультрафиоле­товых лучей на штаммы L.cremoris и L.lactis subsp. acetoinicus. Для получения мутантов L.cremoris и L.lactis subsp. acetoinicus с повышенной биохимической активностью применяют комбинированное воздействие нитрозосоединений и ультрафиолетовых лучей (УФ-лу­чей). Так, для получения мутантов S. cremoris с повышенной актив­ностью свертывания и улучшенной консистенцией используют комби­нированное воздействие N-нитрозоэтилмочевины и УФ-лучей. При этом в зависимости от концентрации и дозы мутагена получают куль­туры с колющейся или вязкой консистенцией.

Для получения мутантов L.lactis subsp. acetoinicus с повышенной активностью свертывания и образованием ароматических веществ ис­пользуют комбинированное воздействие N-нитрозо-биуретмочевины или N-нитрозометилмочевины и УФ-лучей.

Режимы воздействия нитрозосоединений и УФ-лучей приведены в табл. 5.

Таблица 5