Дата_________група_______ п.і.п.______________________
ПРАКТИЧНЕ ЗАНЯТТЯ № 3 Тема3: Виділення чистих культур аеробних бактерій ( 2-й етап дослідження ). Культуральні властивості бактерій. Виділення чистої культури аеробів ІІІ день дослідження. Ферменти бактерій. Виділення чистих культур анаеробних бактерій. Метаболізм бактерій. Культивування мікроорганізмів. Поживні середовища. Виділення чистої культури аеробів та анаеробів.
Завдання для самостійної роботи:
а) Перелік питань, що підлягають вивченню:
1. Ріст та розмноження мікроорганізмів. Вегетативні форми та форми спокою мікробів.
2. Фази розмноження мікробів у рідкому живильному середовищі в стаціонарних умовах.
3. Колонії, особливості їх формування у різних видів бактерій. Пігментоутворення.
4. Виділення чистих культур аеробних бактерій (2-й етап дослідження).
б) Перелік практичних навичок та вмінь, якими необхідно оволодіти:
1. Додержання правил протиепідемічного режиму і техніки безпеки в бактеріологічній лабораторії. 2. Посів патологічного матеріалу петлею на щільні живильні середовища.
3. Знезаражування інфікованого матеріалу, антисептична обробка рук, контамінованих досліджуваним матеріалом або культурою мікробів.
4. Виготовлення препаратів для мікроскопічного дослідження.
5. Забарвлення препаратів складним методом (за Грамом).
6. Мікроскопія препаратів в світловому мікроскопі з імерсійним об’єктивом.
7. Диференціація мікроорганізмів за морфологічними і тинкторіальними ознаками.
Перелік питань для підготовки до практичного заняття;
Хімічний склад мікроорганізмів. Бактеріальні білки, полісахариди, ліпіди, їх комплекси та інші макромолекули мікроорганізмів. Токсичні макромолекули мікробної клітини. Нуклеїнові кислоти мікроорганізмів. Мінеральні речовини, іонні та буферні системи, мікроелементи. Порівняння хімічного складу різних груп мікроорганізмів та еукаріотичних клітин.
Живлення бактерій. Голофітний спосіб живлення. Фототрофний та хемотрофний тип живлення. Джерела азоту та вуглецю. Хемоорганотрофи (гетеротрофи). Ауксотрофи. Особливості живлення паразитичних мікроорганізмів. Потреби в мінеральних солях, факторах росту. Механізми транспорту поживних речовин та іонів у клітину. Значення ферментів периплазми. Пермеази.
Енергетичні процеси та обмін речовин у бактерій. Біологічне окислення у бактерій. Інтенсивність енергетичних процесів у бактерій. Синтез АТФ. Дихання у бактерій. Аероби, анаероби, факультативні анаероби, мікроаерофільні та капнічні мікроорганізми.
Білковий обмін у бактерій. Джерела амінокислот, їх синтез. Генетичний контроль синтезу білка. Транскрипція та трансляція генетичної інформації. Особливості роботи систем синтезу білка. Розкладання білків, кінцеві продукти обміну білків і методи їх визначення.
Нуклеїнові кислоти у бактерій. Попередники нуклеїнових кислот. Принцип матричного синтезу. Реплікація геному. Ферменти полімерази нуклеїнових кислот.
Обмін вуглеводів та ліпідів у бактерій. Шляхи розкладу вуглеводів. Типи бродіння. Кінцеві продукти обміну вуглеводів і методи їх визначення.
Інтенсивність обмінних процесів у бактерій. Лімітуючі фактори росту, використання мікробіологічних методів для якісного та кількісного аналізу біологічно активних речовин.
Регуляція та саморегуляція біохімічних процесів у мікроорганізмів.
Ферменти бактерій. Конструктивні та адаптивні ферменти. Екзо- та ендоферменти. Біохімічні зміни у зовнішньому щодо клітин середовищі. Особливості біохімічних процесів у патогенних бактерій. Ферменти патогенності. Синтез токсинів, факторів інвазії та агресії.
Культивування мікроорганізмів. Поживні середовища. Вимоги до середовищ, їх види. Приготування і підготовка поживних середовищ, контроль якості. Організація виробництва поживних середовищ.
Умови культивування мікроорганізмів. Температурний оптимум, мезофільні, термофільні та психрофільні мікроорганізми. Забезпечення температурного оптимуму. Термостати.
Ріст та розмноження бактерій. Поділ бактеріальної клітини. Час і динаміка поділу. Динаміка розмноження мікробної популяції. Фази розмноження. Стаціонарна фаза, її тривалість, способи її підтримання. Безперервне культивування мікроорганізмів. Збалансований ріст мікробних культур. Принцип роботи хемостата. Культивування мікроорганізмів, видимі прояви росту на середовищах. Колонії мікроорганізмів. Чисті та змішані культури мікроорганізмів. Принципи та методи виділення чистих культур. Ідентифікація чистих культур. Культуральні та біохімічні критерії. Вивчення розкладу білків, вуглеводів, обміну амінокислот та інших азотовмісних сполук для ідентифікації бактерій. Сучасні індикаторні, автоматизовані та напів автоматизовані системи для ідентифікації мікроорганізмів за біохімічною активністю.
Особливості культивування мікроорганізмів для технологічних цілей. Надлишковий синтез. Нагромадження продуктів синтезу та проміжного обміну в клітинах та зовнішньому середовищі, значення у біотехнологічних процесах. Синтез мікроорганізмами амінокислот, вітамінів, органічних кислот та інших речовин. Одержання мікробних ферментів, полісахаридів, білків.
Модифікація мікроорганізмами органічних речовин і використання їх для одержання вітамінних, гормональних та інших препаратів медичного призначення.
Особливості фізіології найпростіших. Фізіологія мікроскопічних грибів. Середовища для культивування грибів. Культивування грибів для технологічних цілей.
а) Перелік питань, що підлягають вивченню:
1. Ферменти бактерій і їх класифікація.
2. Методи вивчення ферментативної активності бактерій та використання їх для ідентифікації бактерій.
3. Диференційно-діагностичні живильні середовища, їх склад та призначення.
4. Способи ідентифікації виділених культур. Поняття про серовари, морфовари, біовари, фаговари.
5. Сучасні методи ідентифікації бактерій за допомогою автоматизованих ферментних систем ідентифікації. 6. Виділення чистих культур аеробів (3-й та 4-й етапи).
б) Перелік практичних навичок та вмінь, якими необхідно оволодіти:
1. Додержання правил протиепідемічного режиму і техніки безпеки в бактеріологічній лабораторії.
2. Знезараження інфікованого матеріалу, антисептична обробка рук, контамінованих досліджуваним матеріалом або культурою мікробів.
3. Виготовлення препаратів для мікроскопічного дослідження. 4. Забарвлення препаратів складним методом (за Грамом).
5. Мікроскопія препаратів в світловому мікроскопі з імерсійним об’єктивом
6. Посів досліджуваного матеріалу петлею і піпеткою на тверді, напіврідкі та рідкі живильні середовища.
7. Виділення чистих культур аеробних мікроорганізмів.
Протокол практичного заняття
Практичні завдання, що підлягають виконанню:
Завдання № 1: Написати основні правила взяття матеріалу для бактеріологічного дослідження.
Забір проводиться ……………………………………………………………………………
Обєм матеріалу……………………………………………………………………………….
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Посів крові ……………………………………………………………………………………
Тампони з мазками…………………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Заморожування матеріалу …………………………………………………………………..
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Забір матеріалу з підозрою на анаеробну інфекцію………………………………………..
……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Термін дослідження …………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 2 Мікроскопія матеріалу. Основні завдання мікроскопії
……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
Завдання 3
Нативні препарати ………………………………………………………………………………......
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 4
Зафарбовані препарати. Препарати які використовуються ………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 6 Спеціальні методи фарбування мазків
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
Завдання 7 Методи фарбування капсул
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Методи фарбування жгутиків…………………………………………………………………….
………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Методи фарбування спор………………………………………………………………………….
……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 8 Принципи мікроскопії.
Світлооптична мікроскопія………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..
Темнопольна мікроскопія ………………………………………………………………..
………………………………………………………………………………………………………. ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….
Фазовоконтрастна мікроскопія …………………………………………………………..
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Поляризаційна мікроскопія …………………………………………………………..
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Люмінесцентна ……………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Інші відомі Вам методи мікроскопії……………………………………………………..
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 9 Поживні середовища
Критерії придатності середовища
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 10 Класифікація середовищ
По консистенції……………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
По складу …………………………………………………………………………………….
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
По походженню……………………………………………………………………………...
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
По призначенню……………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 10 Характеристика середовищ……………………………………………….
Консервуючі середовища.………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Середовища збагачення .………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Селективні середовща .………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Диференційно діагностичні середовища………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання 11 Заповнити таблицю середовищ що часто використовуються для виділення неприхотливих бактерій з клінічного матеріалу.
Матеріал |
Середовище |
Умови культивування |
Гнійні виділення з тканин і абсцесів
|
|
|
Сеча
|
|
|
Мокрота, промивні води бронхів
|
|
|
Мазки із зіву
|
|
|
Випорожнення
|
|
|
Виділення з уретри та вагіни
|
|
|
Виділення з очей
|
|
|
Виділення з вух
|
|
|
Носоглотка
|
|
|
Завдання 12 Заповнити таблицю біохімічних тестів що застосовуються для індикації бактерій
Тест |
Принцип дії |
Варіант застосування |
На лабільність до солей жовчі
|
|
|
На каталазну активність
|
|
|
На коагулазну активність
|
|
|
На ДНК-азну активність
|
|
|
Бактеріостатичний метод Хеддльсона
|
|
|
Посів на середовище Гісса
|
|
|
Тест на утворення індолу
|
|
|
Цитратна проба Козера
|
|
|
Тест на лецитиназну активність на яєчному середовище з лактозою
|
|
|
Проба з лакмусовим молоком
|
|
|
Реакція з метиловим червоним для визначення інтенсивності кислото утворення з глюкози (метиротреакція)
|
|
|
Ферментація вуглеводів нейсеріями
|
|
|
Відновлення нітратів
|
|
|
Тест на оксидазну активність
|
|
|
Тест на окислення і ферментацію глюкози
|
|
|
Посів на пептонну воду з набором вуглеводів
|
|
|
Тест на фенілаланіндезаминазну активність
|
|
|
Уреазний тест
|
|
|
Реакція Фогеса Проскауера
|
|
|
Тест Х- і V |
|
|
Завдання №13 :Вивчити схему етапів виділення чистої культри аеробних бактерій, вказати мету кожного етапу.
Забарвлення 37°С (за Грамом) 24г
1) макро- и мікроскопічне вивчення культуральних властивостей
2) Забарвлення (за Грамом або другим методом)
3) 37°С 24г
1) Оцінка чистоти культури:
а) макроскопічно
б) мікроскопічно Забарвлення (за Грамом)
2) Посів на диференційно- діагностичні середовища
3) Зараження лабораторних тварин, вивчення токсиноутворення
4) Постановка серологічних реакцій с діагностичними сироватками
5) Постановка антибіотикограм
6) Вивчення чутливості до фагів
Облік вивчених властивостей:
1) Морфологічні
2) Тинкторіальні
3) Культуральні
4) Біохімічні (ферментативні)
5) Біологічні (токсигенність, вірулентність, та інші.)
6) Антигенні
7) Фаголізабельні
8) Чутливість до антибіотиків
I етап
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
II етап
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
III етап
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
IV етап
…..…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
…..………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
Завдання № 14: Ознайомитися з культуральними властивостями різних видів мікроорганізмів:
а) холерний вібріон у лужній пептонній воді;
б) стрептокок у цукровому м’ясо-пептонному бульйоні;
в) лептоспіри у середовищі Уленгута;
г) стафілокок у м'ясо-пептонному бульйоні (МПБ).
д) гриби
Замалювати і вказати характер росту мікроорганізмів у рідкому живильному середовищі:
А)
Б) В)
Г) Д)
Завдання № 15: Опишіть культуральні властивості бактерій, враховуючи характер росту ізольованих колоній на щільному живильному середовищі (заповніть таблицю).
Культуральні властивості |
№1 Колонія стафілокок
|
№2 Колонія грибок
|
Дослідження в прохідному світлі |
||
Розмір (діаметр) |
|
|
Форма обрисів |
|
|
Ступінь прозорості |
|
|
Дослідження у відбитому світлі |
||
Колір колонії |
|
|
Характер поверхні |
|
|
Положення на живильному середовищі |
|
|
Мікроскопічне дослідження |
||
Характер краю |
|
|
Структура |
|
|
Інші культуральні властивості |
||
Консистенція |
|
|
Завдання № 16: Мікроскопіювати і замалювати препарати грибів, актиноміцетів.
Цвільовий гриб роду Mucor Цвільовий гриб роду Aspergillus Цвільовий гриб роду Penicillium
Дріжджеподібні гриби роду Candida Актиноміцети
Завдання № 17. Охарактеризуйте мікроорганізми з урахуванням морфологічних та тинкторіальних властивостей.
Цвільовий гриб роду Mucor__________________________________________________________ _________________________________________________________________________________
Цвільовий гриб роду Aspergillus ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________
Цвільовий гриб роду Penicillium_____________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Дріжджеподібні гриби роду Candida__________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Актиноміцети_____________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Завдання № 18 Написати етапи отримання культури грибів.
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Завдання № 19 Мікроскопіювати і замалювати препарати найпростіших:
трипаносоми трихомонади
забарвлення за Романовським-Гімза забарвлення за метиленовим синім
лейшманії малярійний плазмодій
забарвлення за Романовським-Гімза забарвлення за Романовським-Гімза
Завдання № 20. Охарактеризуйте мікроорганізми з урахуванням морфологічних та тинкторіальних властивостей.
трипаносоми ______________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________
трихомонади_____________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
лейшманії ____________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
малярійний плазмодій _________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Підпис викладача_______________________
Самостійна робота.
Завдання для самостійної роботи: