48

Гуманна медицина лікує людину, а ветеринарна медицина – людство.

Евсєєнко С.

МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ

ДНІПРОПЕТРОВСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ АГРАРНО-ЕКОНОМІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

Факультет ветеринарної медицини

Кафедра епізоотології та інфекційних хвороб тварин

РОБОЧИЙ ЗОШИТ

для лабораторних занять з ветеринарної вірусології

Студента _________________________________________групи_________

Викладач: ________________________________________________________

Дніпро – 2017

Робочий зошит для лабораторних занять з ветеринарної вірусології: методичні вказівки. Дніпро, ДДАЕУ. – 2017. – 48 с.

Укладачі: д. вет. н., проф. Сосницький О.І., к. вет. н., доцент Давиденко П. О.

Рецензент: доцент кафедри паразитології та ветеринарно-санітарної експертизи, к. вет. н. Шендрик Х. М.

Робочий зошит складено для студентів денної форми (ОС «Бакалавр») для опрацювання програми дисципліни «Ветеринарна вірусологія», проведення лабораторних занять, з метою полегшення засвоєння навчального матеріалу. Вміщено 12 лабораторних робіт, у яких висвітлено різні питання загальної та спеціальної вірусології: правила відбору патологічного матеріалу, прийоми роботи з живими системами та способи виділення на них вірусів. Розглянуто імунологічні та молекулярно-генетичні методи діагностики вірусних інфекцій, особливості та схеми діагностики найпоширеніших вірусних хвороб тварин. Наведено склад діагностичних наборів, що використовуються в Україні, завдання з діагностики вірусних інфекцій.

Розглянуто на засіданні кафедри епізоотології та інфекційних хвороб тварин протокол № 6 від 18 січня 2017 р

Розглянуто і схвалено до друку на засіданні науково-методичної ради факультету ветеринарної медицини, протокол № 3 від 26 січня 2017 р.

ЗМІСТ

	Стор.
ЗАГАЛЬНА ВІРУСОЛОГІЯ
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 1 Організація вірусологічної лабораторії. Відбір, консервування, транспортування патологічного матеріалу до лабораторії.	4
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 2 Культивування вірусів на лабораторних тваринах	12
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 3 Використання курячих ембріонів у вірусології	16
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 4 Культура клітин та її використання в вірусології	20
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 5 Титрування вірусів за інфекційною дією, поняття про титр вірусу	25
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 6 Ідентифікація вірусів та титрування антитіл до вірусів у РЗГА	27
СПЕЦІАЛЬНА ВІРУСОЛОГІЯ
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 7 Діагностика ящуру за допомогою РЗК з використанням біофабричних антигенів та сироваток	30
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 8 Лабораторне діагностика сказу, хвороби Ауєскі та віспи	32
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 9 Диференційна діагностика хвороби Ньюкасла та грипу птиці	35
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 10 Лабораторне діагностика парагрипу-3 великої рогатої худоби	38
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 11 Диференційна діагностика пневмоентеритів телят	40
ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 12 Розв’язання діагностичних задач	43
ЛІТЕРАТУРА	46

Частина і загальна вірусологія

ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ № 1

Організація вірусологічної лабораторії. Відбір, консервування, транспортування патологічного матеріалу до лабораторії.

Мета роботи: ознайомити студентів з організацією та обладнанням вірусологічної лабораторії, продемонструвати, що вірус (бактеріофаг) проходить крізь бактеріальний фільтр, а бактерії затримуються; навчити студентів методів отримання, транспортування й підготовки патологічного матеріалу для вірусологічних досліджень.

Тривалість роботи: 4 години.

Матеріали й устатковання: кювета із тришаровою марлею, просоченою дезінфекційним розчином; дві стерильні піпетки, гумова груша, баночка з йодованим спиртом, пінцет, вата, два пеніцилінових флакони зі стерильним фізіологічним розчином, закриті гумовими пробками. Світловий і люмінесцентний мікроскопи. Бактерійні фільтри (Шамберлена, Зейтца, Беркефельда, фільтрувальні мембрани, набір засобів для ультрафільтрування (колби, лійки, вакуумний насос), коліфаг, E. coli, дві чашки з МПА; стерилізатор з інструментами для розтину лабораторних тварин; стерильна ступка з піском; два пеніцилінових флакони з розчином Хенкса; пінцет; загорнуті в папір стерильні ватяні тампони — «ватики»; центрифуга.

Місце проведення: аудиторія кафедри епізоотології та інфекційних хвороб тварин, лабораторія кафедри, віварій.

Завдання:

1. Ознайомитися з вірусологічною лабораторією, її устаткуванням і правилами роботи з вірусовмісним матеріалом.

2. Підготувати стіл і настільний бокс для роботи з вірусовмісним матеріалом.

3. Набути навичок стерильної роботи з піпеткою за допомогою гумової груші.

4. Профільтрувати крізь бактерійні фільтри бактеріофаг та суспензію E. coli.

5. Від тварини, яка загинула, відберіть проби патологічного матеріалу — паренхіматозні органи, лімфатичні вузли.

6. У тварини з респіраторно-кишковим захворюванням відберіть носовий секрет та фекалії, отримайте мазки-відбитки зі слизової оболонки носа і кон’юнктиви.

7. Оформіть написи на флаконах з патологічним матеріалом, на бирці термоса, а також супровідний лист у вірусологічну лабораторію.

8. Приготуйте суспензію вірусовмісного матеріалу.

1. Ознайомитися з вірусологічною лабораторією, її устаткуванням і правилами роботи з вірусовмісним матеріалом.

Організація вірусологічної лабораторії.

_________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Режим роботи вірусологічної лабораторії

___________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Техніка безпеки роботи у вірусологічній лабораторії

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Правила техніки безпеки:

1. Забороняється палити, вживати їжу та зберігати продукти харчування у виробничих приміщеннях.

2. Весь матеріал, що надходить у лабораторію на дослідження, необхідно розглядати як патогенний. Під час розпакування матеріалу банки слід зовні дезінфікувати й ставити на піднос або кювету з кількома шарами марлі, зволоженої 5%-м розчином хлораміну; роботу проводити в спецодязі та гумових рукавичках.

3. Рідини, що містять віруси, переливають над кюветою із дезінфекційним розчином. Під час роботи з піпетками користуються гумовими грушами. Піпетки, предметні скельця, інший посуд знезаражують, занурюючи їх у 5%-й розчин хлораміну, фенолу, лізолу чи сульфатної кислоти.

4. У боксі належить працювати в стерильному халаті, масці, шапочці, обов’язково змінювати взуття, за потреби надягати гумові рукавички й окуляри.

5. Після закінчення роботи в боксі наводять лад на робочому місці й бокс ретельно дезінфікують.

6. Вірусовмісний матеріал ставлять на зберігання в холодильник, який опечатують.

7. Руки в рукавичках промивають у банці з 5%-м розчином хлораміну, потім рукавички знімають, знезаражують їх вдруге і миють.

8. У разі аварії негайно повідомляють про це завідувача лабораторії (у навчальних закладах — викладача) і під його контролем проводять дезінфекцію рук, халата й робочого місця, залитого вірусовмісним матеріалом, 5%-м хлораміном чи будь-яким іншим дезінфекційним розчином.

9. Забороняється виносити з лабораторії устатковання, інвентар і матеріали без попередньої дезінфекції їх на місці, а також виходити за межі лабораторії в халаті, спецвзутті, надягати верхній одяг на халат.

10. Під час роботи зі збудником особливо небезпечної хвороби і проведення біопроби на лабораторних тваринах зараження здійснюють у гумових рукавичках, захисних окулярах і масці.

11. Клітки із зараженими тваринами маркують етикетками, де вказано номер експертизи, дату зараження, назву матеріалу та кількість заражених тварин.

12. Після закінчення проведення біопроби піддослідних тварин, гній від них, рештки корму спалюють у спеціальній печі або автоклавують, клітки й стічні води дезінфікують.

13. Особи, які доглядають за тваринами, зобов’язані носити загальноприйнятий спецодяг і взуття, що не промокає. Гумовий одяг (фартухи, рукавички) після використання дезінфікують і миють водою.

Кожний, хто працює з вірусами, піддається ризику зараження внаслідок нещасного випадку у разі недотримання правил і методів асептики й антисептики.

Асептика ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антисептика ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Дезінфекція _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Стерилізація _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вірусологічна лабораторія повинна мати таку документацію:

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________