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Biochimie (partie 1).doc
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L'expérience 3. Le diagnostic rapide des pathologies du métabolisme glucidique

3.1. La réaction de Trommer avec l’hydroxyde du cuivre

Vers 1 ml de l'urine on verse le volume égal de 10 % solution de l’hydroxyde du sodium et selon les gouttes de 1 % la solution du sulfate du cuivre jusqu’à l'apparition du dépôt de l’hydroxyde du cuivre (II) qui ne disparait pas. L'apparition à la chauffe de la peinture rouge témoigne de la présence du glucose dans l'urine.

3.2. La révélation de la fructosirie par l’essai de Selivanov

La méthode est fondée sur la transformation de la fructose à la chauffe et en présence de l’acide chlorhydrique à l’hydroxyméthylfurfurol qui est condensé avec la résorcine (0,05 % la solution dans 20 % acide chlorhydrique, le réactif de Selivanov), en formant la liaison de la couleur rouge.

Dans 2 éprouvettes on verse selon 1 ml de la solution de la résorcine et on ajoute à un d'eux 2 ml de l’urine normal, et à l'autre – l'urine pathologique. On chauffe les deux éprouvettes dans le bain-marie jusqu'au bouillonnement. À la présence dans l'urine de la fructose il y a une peinture intense rouge. On apprécie au moment du bouillonnement; à la chauffe longue le glucose peut aussi donner la réaction positive.

3.3. La méthode enzymatique de la détermination semi-quantitative du glucose dans l'urine à l'aide de la raie de test "glucophan"

Les raies "GLUCOPHAN" ont la ligne transversale de la couleur jaune clair imprégnée par les solutions des enzymes de la glucooxydase, de la peroxydase et du colorant (la benzidine dérivée). Glucooxydase – flavoprotéine dont le groupe prosthétique est FAD. Elle catalise le transfert de deux atomes de l'hydrogène du glucose sur l'oxygène de l'air. Le peroxyde formant de l'hydrogène se désagrège par l’enzyme peroxydase aux frais de quoi il y a une oxydation du colorant. Le changement de la coloration du colorant à son oxydation témoigne de la présence du glucose dans l'urine. La méthode donnée permet de définir la concentration du glucose dans l'urine de 0,1 à 2 %.

On verse dans le verre la petite quantité d'urine étudiée. On charge la raie "GLUCOPHAN" à l'urine étudiée de manière que la ligne jaune ait été mouillée entièrement. On tire immédiatement la raie du liquide, on attend 2 minutes. On compare la coloration changée de la ligne colorée avec l'échelle colorée. En l'absence du glucose dans l'urine la couleur de la raie ne change pas. On trouve la plus grande coïncidence de la couleur de la raie "GLUCOPHAN" avec la couleur sur l'échelle colorée et on définit la concentration du glucose.

Les questions de contrôle

1. Quelles sont les conditions optimales du fonctionnement de l’amylase pancréatique?

2. Comment on peut définir la présence des produits de l'hydrolyse de l'amidon dans l'essai?

3. À quelles classes se rapportent les enzymes désagrégeant le glycogène jusqu'au glucose?

4. Quelles liaisons sont les produits de la glycolyse aérobie et anaérobe?

5. Pourquoi dans l'organisme se garde la glycolyse énergétiquement désavantageuse anaérobe?

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