L'expérience 6. La réaction qualitative sur la vitamine в (le ribophlavine)
Vers 0,5 ml de la solution du ribophlovine on verse 10 gouttes du chlorhydrique concentré et on apporte le morceau du zinc métallique. On observe le dégagement des bulles de l'hydrogène, le liquide devient rose graduellement, puis il se décolore. La réaction est conditionnée par la restitution du ribophlovine d'abord à rodophlovine de la couleur rouge et puis à leucophlovine incoloré. Au secouement de la solution décolorée la leucoliaison s'oxyde de nouveau par l'oxygène de l'air au ribophlavine:
L'expérience 7. La réaction de la vitamine В6 (l’adermine)
avec le chlorure du fer (III)
L’adermine – le nom total du groupe des substances possédant l'activité de la vitamine В6 :
À l'éprouvette on apporte 5-10 gouttes de 5 % de la solution d'eau de la vitamine В6 et on ajoute 1-2 gouttes 5 % solution du chlorure du fer. Après la secousse du mélange apparaît la coloration rouge du liquide. La liaison complexe se forme du type du phénolate du fer.
L'expérience 8. La réaction qualitative sur la vitamine РР
(la nicotinamide, l'acide de nicotine)
5-10 mg de l'acide de nicotine on dilue pendant la chauffe dans 10-20 gouttes 10 % de la solution de l'acide acétique. À la solution chauffée jusqu'au bouillonnement on ajoute le volume égal de 5 % de la solution de l'acétate du cuivre. Le liquide se colore à la couleur bleu clair et pendant le stationnement tombe le dépôt de la couleur bleue du sel de cuivre de l'acide de nicotine.
L'expérience 9. Les réactions qualitatives sur la vitamine c (acide ascorbique)
9.1. La coopération de la vitamine c avec к3[Fe(cn)6]
Vers 5 ml de 0,02 % solution de la vitamine C on ajoute selon quelques gouttes de 5 % solution d’hydroxyde du potassium et 10 % solution К3[Fe(CN)6], on mélange, puis on ajoute 2-3 gouttes 10 % solutions du chlorhydrique et 1-2 gouttes 10 % solution du chlorure du fer (III). Il y a une peinture bleu-verte et se forme graduellement le dépôt bleu du bleu de Prusse – Fe4[Fe(CN)6]3.
L-ascorbique acide L-déshydroascorbique acide
3K4[Fe(CN)6] + 4FeCl3 → Fe4[Fe(CN)6]3 ↓ + 12KCl
9.2. La réaction avec le bleu de méthylène
Dans l'éprouvette on verse 2 gouttes de 10 % de la solution du bleu de méthylène, 2 gouttes de 10 % de la solution de l'hydrocarbonate du sodium, 10 gouttes de la solution de la vitamine C et on chauffe. Le liquide se décolore.
L'expérience 10. La détermination quantitative de l'acide ascorbique dans l'urine par la méthode de Tilmanse
La quantité de vitamine C dans le volume de vingt-quatre heures de l'urine dépend de son contenu dans la nourriture, du besoin de l'organisme, de l'âge de la personne, de la capacité muqueux de l'intestin vers l'absorption. La personne saine dégage en moyenne 20-40 mg de la vitamine C. D’après la quantité de la vitamine C dégagée avec l'urine pour un jour, on peut juger sur la sécurité de l'organisme par l'acide ascorbique. La méthode plus sûre du diagnostic de l'hypovitaminose c’est l'essai avec la charge de l'acide ascorbique.
La méthode est fondée sur l'oxydation de l'acide ascorbique à l'acide déshydroascorbique par 2,6-dichlorphénolindophénol qui dans un milieu aigre se rétablit à la leucoliaison incolorée.
On verse au fiole conique 10 ml de l'urine, on ajoute 10 ml de l'eau distillée et 1 ml de l'acide acétique concentré. On fait le titrage du contenu de la fiole de la microburette 0,001 n par la solution du sel de sodium 2,6-dichlorphénolindophénol avant la réception de la coloration stable rose.
Le contenu de la vitamine C en quantité de vingt-quatre heures d'urine on calcule selon la formule:
où х – la quantité de l'acide ascorbique degagée avec l'urine pour un jour, mg; 0,088 – la quantité d'acide ascorbique correspondant à 1 ml 0,001 n de la solution du sel de sodium 2,6-dichlorphénolindophénol, mg; V1 – le volume total de l'urine recueillie pour un jour, mg; V2 – la quantité de l'urine prise pour le titrage, ml. Pour les femmes la quantité d'urine pour vingt-quatre heures en moyenne 1200 ml, pour les hommes – 1500 ml.
Les questions de contrôle
1. Quelles substances se rapportent aux vitamines? Quelle est leur fonction totale dans l'organisme?
2. Énumérez les fonctions biochimiques des vitamines, la définition desquelles était passée dans le travail de laboratoire.
3. Donnez la définition aux avitaminoses, hypo- et hypervitaminoses.
4. Quelles méthodes excepté titrimétrique peuvent être utilisées pour la définition quantitative des vitamines?
LE TRAVAIL 7. OXYDORÉDUCTASES
1. La détection de la déshydrogénase
(xanthynoxydase, aldéhyddéshydrogénase, КF 1.1.3.22)
dans le lait (la réaction de Chardinguère)
Dans trois éprouvettes on verse selon 2 ml du lait frais de vache. On fait bouillir un essai pendant 2-3 minutes et on refroidit. À l'essai bouilli et à un des essais non bouillis on ajoute selon 0,5 ml 0,4 % solution du formaldéhyde, et à l’autre essai non bouilli – 0,5 ml de l'eau. Puis à toutes trois éprouvettes on verse selon 2 gouttes 0,01 % solution du bleu de méthylène. On mélange le contenu des éprouvettes et on ajoute à chacune selon 3-4 gouttes de l'huile de vaseline. On place tous les essais au bain-marie à 40 °С. Dans un certain temps le liquide dans l'essai non bouilli contenant le substrat, se décolore aux frais de la formation de la forme réduite du bleu de méthylène.
Si la solution incolore de méthylène bleu secouer en air, il acquiert de nouveau la couleur bleue/
On peut utiliser cette réaction pour la différence du lait non bouilli du lait bouilli.