1. L’analyse qualitatif des mélanges d’acides aminés selon la méthode de la chromatographie sur couche mince.
On dessine la ligne avec le crayon à la distance de 2 cm de la marge de la plaque chromatographique. Sur cette ligne on marque 4 points à égale distance. On prend la solution de premier acide aminé à l’aide de la pipette. On touche la plaque avec l’extrémité de la pipette au point 1 et on verse la solution. On fait la même chose aux points 2, 3, 4 avec les solutions d’autres acides aminés et avec leur mélange, chauqe fois il faut utiliser une pipette propre.
On met le chromatogramme dans le vase chromatographique au fond duquel on a versé le mélange de butanol, d’acide acétique et d’eau (15:3:7), le bord de la plaque doit être plongé dans le révélateur à 1 cm. On ferme le vase avec le couvercle et on y laisse le chromatogramme pour quelque temps, le révélateur avance de bas en haut à 10 cm. On tire le chromatogramme du vase, on marque la frontière du révélateur et on le sèche sur le banc Kofler. A l’aide du pulvérisateur dans la chambre de nébulisation on asperge le chromatogramme séché avec la solution de ninhydrine dans l’acétone (0,5 % ) jusqu’à l’abreuvage égal (sans traînées). Ensuite on met le chromatogramme sur le banc Kofler lors de la température 70 °С pour 15 min. Sur le chromatogramme les positions des acides aminés se manifestent sous forme de taches bleues violettes.
On peut identifier les acides aminés selon la valeur Rf (le rapport frontal ou facteur de rétention). Pour cela on mesure la distance passée par le révélateur de la ligne de départ jusqu’à la frontière du révélateur et aussi la distance du point de l’application de chaque acide aminé jusqu’au centre de la tache colorée formée pendant la réaction de ninhydrine. On détermine la valeur du rapport frontal (Rf) de chaque acide aminé en divisant la distance passée par l’acide aminé sur le chromatogramme sur la distance passée par le révélateur. On fait les mêmes calculations pour les acides aminés du mélange étudié. En comparant les valeurs de Rf des acides aminés-témoins et des acides aminés du mélange observé on fait la conclusion sur la nature des acides aminés dans la composition du mélange. Les acides aminés qui se trouvent au même niveau sont identiques.
1. Dessinez le chromatogramme.
2. Calculez Rf pour toutes les substances. Comparez les valeurs.
Conclusion:
2. L’analyse des composants de la mucine de la salive.
2.1. La sécrétion de la mucine de la salive.
On met dans 2 éprouvettes 1 ml de salive et on y ajoute goutte à goutte la solution d’acide acétique (1%) jusqu’à l’apparition des caillots de mucine. On lave prudement avec l’eau le précipité de mucine dans les éprouvettes, en tenant le caillot à l’aide de la baguette.
2.2. Les réactions à la partie protéique (réaction de biuret).
Pour déterminer la protéine dans l’éprouvette avec le précipité de mucine on ajoute en mélangeant la solution d’hydroxyde de sodium (10 %) jusqu’à la dissolution du caillot et on fait la réaction de biuret.
Observations:
Conclusion:
2.3. La réaction au groupement glucidique (l’essai de naphtol).
Les glucides de la mucine sont déterminés par l’essai de naphtol (réaction de Pobédov et de Molisch). Sous influence de l’acide sulfurique on forme des hexoses l’hydroxyméthylfurfural. Lors de son interaction avec α-naphtol est formé le produit coloré de la condensation.
Dans la deuxième éprouvette avec le précipité de la mucine on ajoute 0,5 ml de solution alcoolique d’α-naphtol (1 %), on mélange et le long du bord de l’éprouvette on verse prudement 0,5 ml d’acide sulfurique concentré.
Observations:
Conclusion