7 4 Тема 3. Липиды
Т а б л и ц а 3.5
Приготовление смеси веществ, применяемых для калибровки*
р и м е ч а н и е. * Для ГХ с применением капиллярной колонки и разделением потока рекомендуется добавлять к смеси веществ, применяемых для калибровки, компоненты с большей длиной цепи.
** Эти значения, вычисленные с применением калибровочной кривой, представлены как пример для колонки, заполненной полиэтиленгликольсукцинатом (1) и макроголом 20 000 (2).
Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизацион-ным детектором в следующих условиях:
— колонка стеклянная или из нержавеющей стали длиной от 2 до 3 м
внутренним диаметром от 2 до 4 мм, заполненная диатомитом для газовой хроматографии с размером частиц от 125 до 200 мкм, на который нанесено от 5 до 15 % полиэтиленгликольсукцината или полиэтиленгликольадипината;
— газ-носитель — азот для хроматографии;
— скорость газа-носителя — 25 мл/мин;
— температура колонки — 180 °С;
— температура устройства ввода проб и детектора — 200 °С.
При необходимости или если указано в частной статье, температуру ко-лонки увеличивают от 120 до 200 °С со скоростью 5 °С в минуту.
Хроматографировать возможно также на газовом хроматографе с пламен-но-ионизационным детектором в следующих условиях:
— колонка капиллярная стеклянная или кварцевая длиной от 10 до 30 м
внутренним диаметром от 0,2 до 0,8 мм, внутренняя поверхность которой покрыта слоем поли[(цианопропил)(метил)][(фенил)(метил)]силоксана или макрогола 20 000 с толщиной слоя от 0,1 до 0,5 мкм или другой подходящей неподвижной фазой;
— газ-носитель — гелий для хроматографии или водород для хроматогра-фии;
— скорость газа-носителя — 1,3 мл/мин (для колонки с внутренним диа-метром 0,32 мм);
— деление потока — 1:100 или менее в зависимости от внутреннего диа-метра применяемой колонки (в случае использования колонки с внутренним диаметром 0,32 мм деление потока должно составлять 1:50);
— температура колонки от 160 до 200 °С, в зависимости от длины колон-ки и используемой неподвижной фазы (для колонки длиной 30 м, покрытой слоем макрогола 20 000, температура должна составлять 200 °С);
— температура устройства ввода проб и детектора — 250 °С.
При необходимости или если указано в частной статье, температуру ко-лонки увеличивают от 170 до 230 °С со скоростью 3 °С в мин (для колонки, покрытой слоем макрогола 20 000).
Анализ жирных масел |
7 5 |
|
|
|
|
|
|
|
Хроматографируют 0,5 мкл раствора сравнения (а). Чувствительность си-стемы регулируют таким образом, чтобы высота основного пика на получен-ной хроматограмме составляла от 50 до 70 % шкалы регистрирующего уст-ройства. Определяют времена удерживания жирных кислот, входящих в со-став калибровочной смеси. Хроматографируют 1 мкл раствора сравнения (б)
рассчитывают отношение сигнал/шум для пика, соответствующего метил-миристату.
Хроматографируют от 0,5 до 1,0 мкл испытуемого раствора. Время хрома-тографирования должно в 2,5 раза превышать время удерживания метилоле-ата. Хроматограмму оценивают, как описано ниже.
При использовании калибровочных смесей № 1 или № 3 хроматографи-ческая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
— на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических таре-лок n, вычисленное для пика, соответствующего метилстеарату, составляет не менее 2000 для набивной колонки и не менее 30 000 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (a) коэффициент разделения RS пиков, соответствующих метилолеату и метилстеарату, составляет не ме-нее 1,25 для набивной колонки и не менее 1,8 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (б) отношение сигнал/шум для пика метилмиристата составляет не менее 5.
При использовании калибровочной смеси № 2 хроматографическая сис-тема считается пригодной, если выполняются следующие условия:
— на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических таре-лок (n), вычисленное для пика, соответствующего метилкапрату, составляет не менее 1500 для набивной колонки и не менее 15 000 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (a) коэффициент разделения Rs
пиков, соответствующих метилкаприлату и метилкапрату, составляет не менее 2 для набивной колонки и не менее 4 для капиллярной колонки;
— на хроматограмме раствора сравнения (б) отношение сигнал/шум для пика метилкапроата составляет не менее 5.
Оценка хроматограмм. Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать неразделенные пики (наличие компонентов с неболь-шим различием между временами удерживания, например кислоты линоле-новая и арахидоновая).
Качественный анализ. Строят калибровочную кривую, используя хрома-тограммы раствора сравнения и данные табл. 3.5.
Пример типовой хроматограммы кунжутного масла (PhEur) приведен на рис. 3.4.
Для хроматограмм, полученных в изотермическом режиме, вычисляют логарифмы приведенных времен удерживания как функцию эквивалента числа атомов углерода в жирных кислотах. Калибровочная кривая насыщенных кислот представляет собой прямую линию. Логарифмы приведенных времен удержи-вания ненасыщенных кислот расположены на этой линии как точки, соот-ветствующие нецелым значениям «эквивалента длины цепи». Идентифика-цию компонентов жирных кислот испытуемого масла проводят, рассчитывая логарифмы приведенных времен удерживания пиков, полученных на хрома-тограмме испытуемого раствора, и устанавливая по калибровочной кривой «эквиваленты длины цепи».
Для хроматограмм, полученных с использованием линейного градиента температуры, определяют времена удерживания, находящиеся в зависимос-