6 6 Тема 3. Липиды

омыление наступает очень быстро. Полученный прозрачный раствор не дол-жен мутнеть от добавления 25 мл воды.

Опыт 6. Перекиси, альдегиды (проба Крейса). 1 мл масла взбалтывают

• течение 1 мин с 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной, прибавляют 1 мл эфирного раствора флороглюцина (1:1000) и перемешива-ют. Появление розового или красного окрашивания указывает на наличие разложившегося масла, присутствие которого не допускается.

Опыт 7. Мыла. Для жирных масел, не применяемых для приготовления инъекционных растворов, реакцию на присутствие мыла проводят следую-щим образом: 50 мл воды, смешанной с 10 каплями раствора фенолфталеи-на, кипятят в конической колбе вместимостью 250 мл в течение 1 мин, при этом раствор должен оставаться бесцветным. Затем к горячей воде приливают 5 г масла и кипятят еще 5 мин, после чего жидкость охлаждают до комнатной температуры, ставят на лист белой бумаги и прибавляют еще 10 капель рас-твора фенолфталеина. Полученный раствор должен быть бесцветным, что ука-зывает на отсутствие мыла или содержание его не более 0,01 %.

Задание 3. Проведите качественные реакции на семенные и косточковые масла и реакции подлинности рыбьего жира. Запишите наблюдения и вывод в лабораторный журнал.

Опыт 8. Реакция на семенные масла (реакция Беллиера). В пробирку на-ливают 2 мл исследуемого масла, осторожно наслаивают по 1 мл кислоты азотной (плотность 1,4) и 0,15 %-ного раствора резорцина в бензоле. Содер-жимое энергично перемешивают. Жирные масла, полученные из семян,

• течение 5 с дают красное или сине-фиолетовое окрашивание, которое быстро исчезает. При разделении слоев окраска переходит в бензольный слой.

Опыт 9. Реакция на косточковые масла (реакция Биберга). В пробирку помещают 2,5 мл масла, осторожно добавляют 1 мл охлажденной смеси рав-ных объемов воды и кислот серной и азотной концентрированных.

Слабо-желтая окраска образовавшегося роствора указывает на миндаль-ное масло, красноватый цвет — на персиковое или абрикосовое масло.

Опыты 10—11. Реакции на рыбий жир. 0,1 г жира растворяют в 1 мл хло-роформа и прибавляют 5 мл раствора сурьмы (III) хлорида; появляется не-стойкое голубое окрашивание (витамин А).

Раствор 1 капли жира в 1 мл хлороформа при взбалтывании с 1 каплей кислоты серной концентрированной окрашивается в сине-фиолетовый цвет, скоро переходящий в бурый (липохром).

Задание 4. В образце жирного масла или жира проведите определение плот ности и показателя преломления. Рассчитайте результат, запишите его в лабора торный журнал, сравните с данными табл. 3.1 и сделайте заключение о доброка чественности жирного масла.

Определение плотности. Метод 1. Метод применяют в случае определе-ния плотности жидкостей с точностью до 0,001.

Методика. Чистый сухой пикнометр взвешивают до 0,0002 г, заполняют с помощью маленькой воронки дистиллированной водой немного выше мет-ки, закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 мин в термостате,

• котором поддерживают постоянную температуру воды 20 °С с точностью до 0,1 °С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоски фильтровальной бумаги. Пикнометр закрывают пробкой и выдержи-вают в термостате еще 10 мин, проверяя положение мениска по отношению

Анализ жирных масел		6 7

Т а б л и ц а 3.1

Физические и химические показатели качества некоторых жиров

• метке. Затем пикнометр вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка, а также весь пикнометр сна-ружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 мин и взве-шивают с той же точностью.

Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последова-тельно спиртом и эфиром, удаляя остатки эфира продуванием воздуха (су-

6 8 Тема 3. Липиды

шить пикнометр путем нагревания не допускается). Заполняют пикнометр образцом исследуемого жирного масла и затем производят те же операции, что и с дистиллированной водой.

Плотность ρ₂₀, г/см³, вычисляют по формуле

(m₂ – m) ^. 0,99703

ρ₂₀ = ——————————— + 0,0012,

m₁ – m

где m — масса пустого пикнометра, г;

• ₁ — масса пикнометра с дистиллированной водой, г;

• ₂ — масса пикнометра с испытуемым образцом жирного масла, г; 0,99703 — значение плотности воды при 20 °С (в г/см³ с учетом плотности

воздуха);

0,0012 — плотность воздуха при 20 °С и барометрическом давлении

1011 гПа (760 мм рт. ст.).

Метод 2. Применяют для определения плотности твердых жиров и воска. Методика. Точно взвешивают пустой пикнометр, затем взвешивают тот же пикнометр, заполненный дистиллированной водой. После этого воду уда-ляют и пикнометр высушивают. Все операции проводят, соблюдая условия,

указанные в методе 1.

• пикнометр вливают при помощью пипетки или небольшой воронки

• тонкооттянутым концом расплавленный жир или воск в таком количестве, чтобы он занимал 1/3—1/2 объема пикнометра. Пикнометр ставят на 1 ч без пробки в горячую воду, затем охлаждают до 20 °С и взвешивают; доводят до метки дистиллированной водой при 20 °С, вытирают насухо и вновь взвеши-вают. В обеих фазах на поверхности их раздела не должно быть пузырьков воздуха.

Плотность вычисляют по формуле

(m₂ – m) ^. 0,99703

ρ₂₀ = ————————————— + 0,0012,

(m₁ – m₂) – (m + m₃)

где m — масса пустого пикнометра, г;

• ₁ — масса пикнометра с дистиллированной водой, г;

• ₂ — масса пикнометра с жиром, г;

• ₃ — масса пикнометра с жиром и водой, г.

Определение показателя преломления. Показатель преломления n^t_λ среды относительно воздуха равен отношению синуса угла падения луча света в воздухе к синусу угла преломления луча света в данной среде.

Показатель преломления (индекс рефракции) определяют при помощи рефрактометра. Показателем преломления называют отношение скорости рас-пространения света в воздухе к скорости распространения света в испытуе-мом веществе. Он зависит от природы вещества, температуры и длины волны света.

Методика. Рефрактометр имеет две призмы, одна из которых (верхняя) приподнимается. Перед проведением измерения на нижнюю призму наносят 1—2 капли жидкости, после чего опускают верхнюю призму и плотно ее прижимают. Пучок света с помощью зеркала направляют в верхнее окошко призмы. Наблюдая в окуляр, совмещают границу светотени со штрихом сет-ки. Для ахроматизации границы светотени служит компенсатор дисперсии. Отсчет показателя преломления производится с точностью до четвертого знака.

Перед каждым опытом рефрактометр необходимо проверять с помощью дистиллированной воды, имеющей показатель преломления 1,3330 при 20 °С.

Анализ жирных масел		6 9

Задание 5. Проведите анализ образца жирного масла методом тонкослой ной хроматографии. Зарисуйте схему хроматограммы в журнал, сравните ее с типовой хроматограммой жирных масел (рис. 3.3).

Рис. 3.3. Типовая хроматограмма для идентификации жирных масел:

1 — арахисовое масло; 2 — оливковое масло; 3 — кунжутное масло; 4 — кукурузное масло; 5 — миндальное масло; 6 — соевое масло; 7 — подсолнечное масло; 8 — рапсовое масло; 9 — рапсовое масло (свободное от эруковой кислоты); 10 — масло зародышей пшеницы

Методика. В качестве тонкого слоя используют октадецилсилильный силикагель для высокоэффективной тонкослойной хроматографии.

Испытуемый раствор. Около 20 мг (одну каплю) жирного масла растворя-ют в 3 мл метиленхлорида.

Раствор сравнения. Около 20 мг (одну каплю) масла кукурузного раство-ряют в 3 мл метиленхлорида.

На линию старта хроматографической пластинки отдельно наносят по 1 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку дважды хрома-тографируют на расстояние 0,5 см, используя в качестве подвижной фазы эфир, и дважды хроматографируют на расстояние 8 см, используя в качестве подвижной фазы смесь растворителей: метиленхлорид—кислота уксусная ле-дяная—ацетон (20:40:50). Затем пластинку сушат на воздухе, опрыскивают раствором 100 г/л кислоты фосфорно-молибденовой в спирте, нагревают при температуре 120 °С в течение 3 мин и просматривают при дневном свете.

Задание 6. Проведите определение химических показателей качества образца жирного масла. Расчет результатов приведите в лабораторном журнале, сравните их

• данными табл. 3.1 и сделайте заключение о доброкачественности жирного масла.

Химическими показателями качества жирных масел являются: кислотное

число, число омыления, эфирное, йодное в миллиграммах, гидроксильное и пере-кисное числа.

Кислотное число — количество калия гидроксида в миллиграммах, необ-ходимое для нейтрализации свободных кислот, содержащихся в 1 г масла. Оно показывает количество свободных кислот в исследуемом жире. По вели-чине кислотного числа судят о доброкачественности жира. Свежий жир сво-бодных кислот почти не содержит.

Методика. Около 10 г (точная навеска) жирного масла растворяют в 50 мл равных объемов спирта и эфира, предварительно нейтрализованного по фе-нолфталеину раствором калия гидроксида 0,1 моль/л. Прибавляют 3—5 ка-пель фенолфталеина и титруют при постоянном помешивании раствором калия

7 0 Тема 3. Липиды

гидроксида 0,1 моль/л до появления розового окрашивания, не исчезающего

• течение 15 с.

1 мл раствора калия гидроксида 0,1 моль/л соответствует 5,61 мг калия гидроксида.

Кислотное число I_A вычисляют по формуле

5,61 · n

I_A = ————— ,

m

где n — количество раствора калия гидроксида 0,1 моль/л, израсходованное на титрование, мл;

m — масса навески жира, г.

Если объем раствора калия гидроксида 0,1 моль/л, пошедший на титро-вание, менее 2 мл, то соответствующим образом увеличивают массу навески испытуемого вещества или используют более разбавленный титрант (в по-следнем случае вносят соответствующие изменения в формулу расчета).

Число омыления — количество калия гидроксида в миллиграммах, необ-ходимое для нейтрализации свободных кислот и омыления сложных эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого жира.

Т а б л и ц а 3.2	Методика. Точную навеску жира (в соответ-
	ствии с табл. 3.2) смешивают в колбе вместимос-
Выбор навески для определения	тью 200—250мл с 25 мл спиртового раствора ка-
числа омыления	лия гидроксида 0,5 моль/л.
	К колбе присоединяют обратный холодиль-
	ник и погружают ее в кипящую водяную баню на
	30 мин, поддерживая легкое кипение. Конец омы-
	ления определяют по образованию совершенно
	прозрачного и однородного раствора, не изменя-
	ющегося при разведении водой. Параллельно в тех
	же условиях ставят контрольный опыт: в другой
	колбе нагревают 25 мл спиртового раствора ка-
	лия гидроксида 0,5 моль/л без добавления жира.
	К растворам сразу же после прекращения на-
	гревания прибавляют 25 мл свежепрокипяченной
	горячей воды, прибавляют 5 капель раствора фе-
	нолфталеина и титруют раствором кислоты хло-

ристоводородной 0,5 моль/л до обесцвечивания. Из количества миллилитров раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, израсходованной в конт-рольном опыте, вычитают количество миллилитров раствора кислоты хло-ристоводородной 0,5 моль/л, пошедшей на титрование исследуемого образ-ца жира.

1 мл раствора калия гидроксида 0,5 моль/л содержит 28,05 мг калия гид-роксида.

Число омыления I_S вычисляют по формуле

28,05 · (n₁ – n₂)

IS = ————————— ,

m

где n₁ — количество раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, из-расходованное на титрование контрольного опыта, мл;

• ₂ — количество раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, из-расходованное на титрование испытуемого образца, мл;

m — масса навески жира, г.

Полученные результаты сравнивают с данными табл. 3.1 и делают вывод

• качестве анализируемого образца жирного масла.

Анализ жирных масел		7 1

Эфирное число — количество калия гидроксида, в миллиграммах, необ-ходимое для омыления эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого вещества.

Эфирное число I_E вычисляют по формуле

I_E = I_S – I_A,

где I_S — число омыления;

• _A — кислотное число.

Йодное число — количество галогена в пересчете на йод, в граммах, кото-рое присоединяется по месту двойных связей ненасыщенных жирных кислот

• 100 г испытуемого вещества в описанных условиях. Йодное число показыва-ет содержание ненасыщенных жирных кислот в 100 г жира.

Методика 1. Навеску вещества (в соответствии с табл. 3.3) помещают в сухую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл, растворяют в 15 мл хлороформа, если нет других указаний в част-ной статье. К полученному раствору медленно при-бавляют 25 мл раствора йода бромида.

Колбу закрывают пробкой и выдерживают

• темном месте при частом перемешивании в те-чение 30 мин, если нет других указаний в частной статье. Прибавляют 10 мл раствора 100 г/л калия йодида, 100 мл воды и титруют раствором натрия тиосульфата 0,1 моль/л при интенсивном переме-шивании до светло-желтой окраски, затем при-

бавляют 5 мл раствора крахмала и титруют раствором натрия тиосульфата 0,1 моль/л по каплям до обесцвечивания.

Параллельно проводят контрольный опыт. Йодное число I_I вычисляют по формуле

1,269 · (n₂ – n₁)

II = ————————— ,

m

где n₂ — количество раствора натрия тиосульфата 0,1 моль/л, израсходован-ное на титрование в испытуемом растворе, мл;

• ₁ — количество раствора натрия тиосульфата 0,1 моль/л, израсходован-ное на титрование в контрольном опыте, мл;

m — масса навески вещества, г.

Допускается проводить определение йодного числа по методике 2. Методика 2. Навеску испытуемого вещества (в соответствии с табл. 3.3)

помещают в сухую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл, раство-ряют в 3 мл эфира, если нет других указаний в частных статьях, медленно прибавляют 20 мл раствора йода хлорида.

Колбу закрывают пробкой, смоченной раствором 10 г/л калия йодида,

• выдерживают в темном месте при частом перемешивании в течение 1 ч, если нет других указаний в частной статье. Прибавляют 10 мл раствора 10 г/л калия йодида, 50 мл воды и титруют раствором натрия тиосульфата 0,1 моль/л при постоянном интенсивном перемешивании до светло-желтой окраски, затем прибавляют 3 мл эфира, интенсивно перемешивают, прибавляют 5 мл раствора крахмала и титруют раствором натрия тиосульфата 0,1 моль/л по каплям до обесцвечивания.

Параллельно проводят контрольный опыт. При анализе твердых жиров навеску растворяют в 6 мл эфира, прибавляют 20 мл раствора йода хлорида 0,1 моль/л. Дальнейшее определение проводят, как указано выше.