4 4 Тема 2. Соединения с гликозидной связью: полисахариды и гликозиды
Образовавшиеся в результате гидролиза сахара восстанавливают реактив Фелинга с образованием осадка меди (I) оксида. В спиртовом извлечении из листьев ландыша содержатся свободные сахара в количестве, недостаточном для окислительно-восстановительной реакции.
Пронаблюдайте за образованием осадка и запишите в лабораторный журнал его цвет.
Опыт 17. Ферментный гидролиз. Смочите горчичник или горчичный по-рошок в фильтр-пакете водой с температурой 38—40 °С. Приложите пакет или горчичник к руке в области запястья.
Отметьте появление через некоторое время запаха горчичного эфирного масла
раздражение кожи. Запишите химизм энзиматического гидролиза синигрина в лабораторный журнал:
Задание 3. Выделите полисахариды из лекарственного растительного сырья.
Для выполнения задания используют извлечение, которое получают
процессе количественного определения полисахаридов в листьях подорож-ника.
Методика (ст. 20 ГФ ХI). Аналитическую пробу сырья измельчают до час-тиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 10 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вмес-тимостью 250 мл, прибавляют 200 мл воды, колбу присоединяют к обрат-ному холодильнику и кипятят при перемешивании на электрической плитке в течение 30 мин. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя пер-вый раз 200 мл, второй раз — 100 мл воды. Водные извлечения объединяют, центрифугируют с частотой вращения 5000 об/мин в течение 10 мин, де-кантируют в мерную колбу вместимостью 500 мл через 5 слоев марли, вложенной в стеклянную воронку диаметром 55 мм и предварительно про-мытой водой. Фильтр промывают водой и доводят объем раствора водой до метки (раствор А).
25 мл раствора А помещают в колбу вместимостью 200 мл, прибавляют
75 мл 96 %-ного спирта, перемешивают, подогревают на водяной бане в те-чение 3 мин для лучшей коагуляции осадка. Появляются хлопьевидные сгус-тки, которые образуют осадок при отстаивании. Осадок представляет собой сложный комплекс полисахаридов, связанных с белками и минеральными веществами.
Осадок фильтруют через бумажный фильтр и делят на две части для об-наружения восстанавливающих и кислых моносахаридов.
Задание 4. Установите качественный моносахаридный состав полисахари дов. Результаты реакции и вывод запишите в лабораторный журнал. Подумайте, почему реакция на восстанавливающие сахара проводится после гидролиза по лисахаридов.
Опыт 18. Обнаружение восстанавливающих моносахаридов. Половину осад-ка (см. задание 3) переносят в колбу вместимостью 25 мл, перемешивают
Химический анализ ЛРС, содержащего соединения с гликозидной связью |
4 5 |
|
|
|
|
|
|
|
5 мл кислоты хлористоводородной разведенной (или 10 мл 10 %-ного рас-твора кислоты серной) и нагревают на водяной бане в течение 20 мин. К охлажденному гидролизату прибавляют 10 мл реактива Фелинга и нагре-вают на водяной бане в течение 5 мин. Появляется кирпично-красный осадок меди (I) оксида.
Опыт 19. Обнаружение кислых моносахаридов. Вторую часть осадка рас-творяют в 5 мл 0,1 моль/л раствора натрия гидроксида. К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,25 мл 0,5 %-ного раствора карбазола и 5 мл кислоты серной концентрированной, перемешивают и нагревают на кипящей водя-ной бане в течение 10 мин.
Появляется красно-фиолетовая окраска при наличии кислоты галактуро-новой или глюкуроновой.
Реактив. 0,5 г карбазола растворяют в очищенном 95 %-ном спирте в мерной кол-бе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора этим же спиртом до метки.
Задание 5. Проведите хроматографический анализ моносахаридов в семе нах подорожника блошного методом, описанным для семян подорожника исфагу ла — Plantago isphagula (Plantago ovata) и адаптированным к лабораторным заня тиям. Зарисуйте схему хроматограммы, рассчитайте величину Rf моносахаридов, сделайте заключение.
Методика. 10 мг порошка семян подорожника (сито 355) помещают
ампулу, прибавляют 5 мл (230 г/л) раствора кислоты трихлоруксусной и перемешивают. Ампулу запаивают и нагревают смесь в сушильном шкафу при 120 °С в течение 1 ч. Гидролизат центрифугируют, переносят надосадоч-ную жидкость в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл воды и выпа-ривают раствор под вакуумом до сухого остатка (азеотропная перегонка). Рас-творяют осадок в 10 мл воды и снова выпаривают под вакуумом досуха. Ра-створяют остаток в 2 мл спирта.
Приготовление растворов стандартных образцов: 10 мг арабинозы раство-ряют в минимальном количестве воды и приливают к 10 мл спирта. Так же готовят стандартные образцы ксилозы и галактозы.
На линию старта хроматографической пластинки размером 7×15 см, по-крытой слоем силикагеля, наносят по 10 мкл гидролизата и растворов стан-дартных образцов арабинозы, ксилозы и галактозы. Пластинку помещают
камеру со смесью растворителей вода—ацетонитрил (15 : 85) и хроматогра-фируют. Когда фронт растворителей пройдет 15 см от линии старта, пластин-ку вынимают, высушивают на воздухе, обрабатывают реактивом и нагревают
сушильном шкафу при 100 °С в течение 5 мин. Анализируют при дневном свете.
гидролизате семян подорожника обнаруживают два красноватых пятна (арабиноза и ксилоза) и желтое пятно (галактоза), совпадающих с пятнами стандартных образцов.
Реактивы: 3 г кислоты фталевой и 0,3 г кислоты аминогиппуровой растворяют
100 мл спирта; или 1,23 г n-анизидина (анилина) и 1,66 г кислоты фталевой раство-ряют в 100 мл спирта.
Задание 6. Определите количество полисахаридов в листьях подорожника большого гравиметрическим методом, используя извлечение, полученное при выполнении задания 3. Произведите расчет, сравните результат с требованиями АНД. Сделайте заключение о доброкачественности анализируемого образца листьев подорожника.
4 6 Тема 2. Соединения с гликозидной связью: полисахариды и гликозиды
Методика (ст. 20 ГФ ХI). 25 мл раствора А, полученного при выполнении задания 3, помещают в центрифужную пробирку, прибавляют 75 мл 96 %-ного
спирта, перемешивают, подогревают на водяной бане до 30 °С в течение
5 мин. Через 1 ч содержимое центрифугируют с частотой вращения
5000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость фильтруют под вакуумом при остаточном давлении 13—16 кПа через высушенный до посто-янной массы при температуре 100—105 °С стеклянный фильтр ПОР 16 диа-метром 40 мм. Осадок количественно переносят на фильтр и последовательно промывают 15 мл раствора 96 %-ного спирта в воде (3:1), 10 мл ацетона, 10 мл этилацетата. Фильтр с осадком высушивают сначала на воздухе, затем при температуре 100—105 °С до постоянной массы.
Содержание полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье Х, %, вычисляют по формуле
(m2 – m1) · 500 · 100 · 100
Х = ———————————————,
m · 25 · (100 – W)
где m1 — масса фильтра, г;
2 — масса фильтра с осадком, г;
— масса сырья, г;
W — потеря в массе при высушивании сырья, %.
?
