37. Провести облік біохімічних властивостей ентеробактерій на середовищах ряду Гісса. Інтерпретувати результат досліджень

Сере¬довища Гісса – дослідження ферментації декількох цукрів – рідкі та напіврідкі.

Основа рідкого середовища – 1 % лептонна вода з 0,5 % натрію хлориду, 1 % вуглеводів (глюкози, мальтози, лактози, сахарози, манніту та ін.), додають індикатор Андреде (кислий фуксин він розчині NaOH). Встановлюють рН 7,2 – жовтий колір. Середовища з різними вуглево¬дами розливають в окремі пробірки, в які встановлюють поплавок – запаяну з одного кінця скляну трубочку довжиною 3 см з відкритим кінцем донизу. Стерилі¬зують парою під тиском 0,5 атм 15 хв.

Після посіву, якщо ферментують вуглеводи – червоне забарвлення – зміна рН у кислу сторону, деколи з поплавка витісняється рідина – утворення газу. Три варіанти: не ферментують субстрату/ бактерії розкладають вуглеводи з утворенням кислоти без газу чи кислоти і газу.

38. Пояснити принцип виявлення антигену збудника сибірки при контролі біологічної безпеки шкірсировини за допомогою реакції кільцепреципітації. Описати властивості антигенів збудників сибірки

Сибіркові бацили мають білковий антиген, який міститься в капсулі, і полісахаридний антиген, розташований в клітинній стінці. Полісахаридний антиген можна виявити за допомогою реакції термопреципітації за Асколі. При розмноженні в організмі, а також на середов. з плазмою й екстрактами з тканин збудники утворюють протективний антиген, який має сильні імуногенні властивості.

Реакція Асколі - реакція преципітації (термопреципітації) для виявлення збудника сибірської виразки або його антигену в різних субстратах (шкіра, шерсть, повсть, щетина, сукно, м'ясо, земля, випорожнення тварин і т. д.). З досліджуваного матеріалу (шкіра) готують шляхом кип'ятіння протягом 5-45 хв. витяжку в фізіологічному розчині хлориду натрію або екстрагують антиген 0,5% карболової або оцтової кислоти в фізіологічному розчині хлориду натрію. Екстракт фільтрують через паперовий фільтр або азбестову вату або центрифугують при 1000-3000 об / хв. У вузьку пробірку для преципітації наливають імунну преципітуючих протисибіркову сироватку і обережно нашаровуються на неї приготований екстракт. Протягом найближчих 10 хв. на кордоні між сироваткою і екстрактом в позитивних випадках з'являється кільце помутніння (кільцепреціпітаціі). Асколі реакція дуже чутлива і специфічна. З її допомогою вдається швидко виявити матеріали, інфіковані на сибірку.

39. Пояснити принципи проведення серодіагностики про спірохетозах. Пояснити механізм реакції Вассермана та принцип її постановки, провести облік реакції та проінтерпретувати результати обліку

Серологічна діагностика здійсюється шляхом постановки реакції Вассермана, осадових реакцій (Кана і Закса-Вітебського), реакції іммобілізації блідих трепонем (РІБТ), РІФ, ІФА.

Реакція Вассермана відноситься до групи реакцій зв'язування комплементу, в якій використовують неспецифічний кардіоліпідний антиген. Вона заснована на здатності сироватки крові хворого утворювати комплекс з відповідними антигенами.

Кров для реакції Вассермана необхідно брати натщесерце або через 6 годин після прийому їжі.

Для постановки реакції необхідні наступні інгредієнти: 1) досліджувана сироватка, 2) антигени, 3) комплемент, 4) гемолітична сироватка, 5) еритроцити барана. Перед постановкою реакції Вассермана досліджувану сироватку необхідно прогріти на водяній бані при 4° 56° протягом 30 хв. з метою інактивації власного комплементу і стабілізації глобулінів. Антигени для реакції Вассермана випускають в готовому вигляді з зазначенням титру і способу розведення.

Всі інгредієнти для реакції Вассермана беруть в однаковому обсязі - 0,5 або 0,25 мл З метою міцної фіксації комплементу на специфічному комплексі суміш досліджуваної сироватки, антигену і комплементу поміщають у термостат при t° 37° на 45-60 хв. (I фаза реакції), після чого вносять гемолітичну систему, що складається з баранячих еритроцитів і гемолітичної сироватки (II фаза реакції), і пробірки знову поміщають у термостат на 30-60 хвилин до настання гемолізу в контролі, де: 1) антиген замінюють фізіологічним розчином, 2) замість досліджуваної сироватки вносять фізіологічний розчин. Існує ряд модифікацій реакції Вассерман

Ступінь позитивності реакції Вассермана прийнято позначати кількістю плюсів: + + ++ повна затримка гемолізу, рідина не пофарбована, всі еритроцити в осаді; + + + виражена затримка гемолізу, рожева рідина, еритроцити в осаді; + + часткова затримка гемолізу, рідина інтенсивно забарвлена, осад еритроцитів ясно видно; + слабка затримка гемолізу, рідина інтенсивно забарвлена, осад незначний, слабо помітний; - повний гемоліз, рідина інтенсивно забарвлена, осаду немає.

Реакція Кана - тест на наявність спірохетозів, в якому визначення характерних для цього захворювання антитіл в крові обстежуваного проводиться за допомогою реакції преципітації. Даний тест є менш доступним, ніж деякі інші.

Реакція Закса-Вітебського - метод серодіагностики спірохетозів, заснований на реакції преципітації, що розвивається в сироватці хворого при додаванні цитохолевого антигену; протікає повільно.