Анализатор антибиотикограмм дискодиффузионный «Адажио»
«Адажио» функционально разделен на и систему считывания антибиотикограмм и систему анализатора результатов. Считывание чашки происходит за несколько секунд. На основании полученных данных прибор рассчитывает минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) по международным критериям и дает заключение о резистентности. Использование системы позволяет избежать большинства технических ошибок, связанных с человеческим фактором.
Микробиологический анализатор BIOMIC V3 проводит подсчет колоний с любой плотной питательной среды, в том числе и хромогенной, анализ тестов на чувствительность микроорганизмов к антибиотикам, автоматическое считывание Е-тестов, считывание результатов с идентификационных панелей (ID-тесты), считывание 96-луночных планшетов для микротитрования, контроль качества.
Глава 6.2 Метод диффузии в агар.
На чашку Петри с плотной питательной средой, содержащей тест-культуры с известной чувствительностью к антибиотикам, помещают цилиндры. В качестве тест-культур используют штаммы чувствительных микроорганизмов (E. coli, S. aureus, P. aeruginosa). В цилиндры вносят стандартные и испытуемые растворы антибиотиков. После инкубации измеряют зоны задержки роста микроба.
Глава 6.3 Метод серийных разведений.
Если антибиотики плохо диффундируют в питательную среду (полимиксин, ристомицин), определение чувствительности микробов к ним нужно проводить методом серийных разведений в жидкой или плотной питательной среде.
Используют для определения минимальных ингибирующих концентраций (МИК) препаратов.
6.3.1. Метод серийных разведений в жидкой среде.
Метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде осуществляют следующим образом: готовят 8-10 последовательных двукратных разведений антибиотика.
Для этого берут 10 пробирок и в каждую наливают по 2 см3 соответствующей жидкой питательной среды. В первую пробирку вносят 2 см3 раствора антибиотика определенной концентрации, перемешивают и 2 см3 переносят в следующую пробирку, и так последовательно разводят до предпоследней пробирки, из которой 2 см3 удаляют. Последняя пробирка является контролем роста культуры. Затем во все 10 пробирок вносят по 0,2 см3 взвеси исследуемой культуры, содержащей 105-106 микробных клеток в 1 см3 в зависимости от вида микроба. Пробирки ставят в термостат при 37 ˚С на 18-24 час.
Результат учитывают по наличию или отсутствию роста микробов в опытных пробирках. МИК антибиотика соответствует концентрации его в последней пробирке, где отмечается задержка роста исследуемой культуры. Затем, по таблице определяют степень чувствительности микроба к антибиотику. Если рост микробов отмечают во всех пробирках, то штамм устойчив к максимальной взятой в опыт концентрации антибиотика. Если микробы не выросли во всех пробирках, кроме контрольной, то МИК антибиотика в отношении данного микроорганизма меньше используемой концентрации.
6.3.2. Метод серийных разведений в плотной питательной среде
Метод серийных разведений в плотной питательной среде в принципе не отличается от вышеизложенного метода. Для его осуществления берут ряд пробирок или флаконов с 1,5 см3 МПА, расплавляют, остужают и добавляют по 1,5 см3 соответствующего разведения антибиотика (в бульоне), перемешивают и вносят в чашки Петри. Для контроля в пробирку с агаром вместо антибиотика вносят 1,5 см3 стерильной дистиллированной воды. Чашку делят на секторы, на которые сеют исследуемые культуры. Результаты учитывают через 18-24 часа инкубации в термостате при 37 ˚С. Наименьшая концентрация антибиотика, которая задерживает рост культуры на поверхности агара, и есть МИК антибиотика.
6.4. Е-тест (Epsilometer) – эллипс-тест.
Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию дискодиффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной.
В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Измеряют в мг/л или мкг/мл.
Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют дискодиффузионный метод.