Лабораторная диагностика Микробиологические методы и люминесцентное исследование

Люминесцентное исследование

Исследование проводят в затемненной комнате люминесцентной лампой Вуда. Очаги поражения предварительно очищают от корок, мази и других наслоений. Наблюдается ярко-зеленое свечение длинных и пушковых волос (или корневой части волоса после его удаления из свежего очага) пораженных грибами рода Microsporum. При гибели гриба свечение в волосе сохраняется.

Микроскопическое исследование

Исследуют патологический материал (волосы, чешуйки кожи) на наличие патогенного гриба Microsporum в нативных препаратах. Полученный материал размягчают при помощи скальпеля и помещают на середину предметного стекла. Для более четкого выявления элементов гриба производят просветление (мацерацию) материала нанося 1-3 капли 20% раствора едкой щелочи KaOH (которая растворяла эпидермальные чешуйки, просветляя пигмент волоса). Исследуемый материал в каплях щелочи подогревают над пламенем спиртовки до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли. После подогревания каплю накрывают покровным стеклом. В соответствии с рекомендациями Р.А.Аравийского и Г.И.Горшковой (1995), препараты кожных чешуек и волос оставляют на 10 минут до микроскопирования. Микроскопическое исследование производят на обычном лабораторном микроскопе без иммерсии с опущенным конденсором и суженной диафрагмой.

Суждение о присутствии патогенного гриба Microsporum в изучаемом материале выносят на основании обнаружения спор и нитей мицелия гриба.

При микроскопическом изучении пораженного волоса при зоонозной и антропонозной микроспории на его поверхности выявляется множество мелких спор, расположенных не упорядоченно – цепочками, а хаотично или мозаично. Границы волоса вследствие его поражения выглядят как бы размытыми. При геофильной микроспории (она встречается казуистически редко) споры гриба располагаются также мозаично по типу ectothrix, однако в отличие от возбудителей зоо - и антропонозной форм имеют крупные размеры (megasporon).

Вопрос о виде возбудителя микроспории, как и вопрос выявления возбудителя заболевания при отрицательных результатах микроскопии, решают при помощи культуральной диагностики.

Культуральное исследование

Перед посевом патологический материал расщепляют на предметном стекле на мелкие кусочки, затем переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1-2 см друг от друга. Материалом одной пробы засевают две пробирки (волосы) и четыре пробирки (кожные чешуйки). Используют стандартную агаризированную среду Сабуро с 2- 4% глюкозы. Посев производят над пламенем спиртовой горелки платиновой петлей. После нанесения частицы материала на поверхность агара пробирку закрывают обожженной над пламенем пробкой. Можно использовать для посева чашку Петри. Посев инкубируют при температуре 28ºС.

Microsporum canis. Рост колонии (основного возбудителя микроспории) отмечается на 3-ий день после посева. К 10-му дню колония достигает диаметра 4-5 см и представлена плоским диском с радиальными бороздами, покрытыми беловатым, нежным пушком. Обратная сторона колонии имеет желтую окраску. При росте в пробирке колония лучиками стелется по ее стенкам.

При микроскопическом исследовании мицелий длинный, прямой, много веретенообразных толстостенных макроконидий с пятью и более камерами. Микроконидии, напротив, не многочисленны и располагаются вдоль нитей мицелия.

Microsporum ferrugineum. Колония формируется к 10-му дню и представлена округлым плоским диском с немногочисленными радиальными бороздами, серовато-белого или бледно-кремового цвета. Поверхность колонии пушистая. Иногда имеется центральное возвышение. Окраска обратной стороны варьирует от коричневой до оранжевой.

При микроскопическом исследовании мицелий тонкий, длинный. Часто наблюдаются концевые и интеркалярные хламидоспоры. Микроконидии встречаются редко. Веретенообразные, деформированные макроконидии имеют обычно 1-2 камеры и толстые стенки.